Vérvizsgálat a mellrákhoz kapcsolódó autoantitestek kimutatására

Általános információ:

Mivel egy normál sejt rosszindulatú daganathoz vezető mutációi a sejtek szerkezetében és működésében bekövetkező változásokkal járnak, feltételezhető, hogy az immunrendszer e változások egy részét antigéndeterminánsként ismerte fel, amelyre reagálni kell. A kutatók sok éven át próbáltak különbséget tenni a rákos betegek és az egészséges populáció között a specifikus autoantitestszintek különbsége alapján. Az egészséges populációban az autoantitestek mennyiségének alapértékét határoztuk meg, és a betegpopulációban statisztikailag szignifikánsan magasabb autoantitestszinttel kellett rendelkezni. Erre a módszerre számos példa található a tudományos irodalomban [példahivatkozások - Naora et.al. (2001); mintz et. Al. (2003); Korneeva et. Al (2000)]. Az autoantitestek jelenléte minden populációban, különböző szinteken nagyon megnehezítette ezeknek a specifikusan megkülönböztető antitesteknek a megtalálását. A mai napig egyetlen specifikus autoantitest sem tesz különbséget az egészséges és a rákos betegek között (ellentétben az autoimmun betegségekkel, ahol a specifikus autoantitestek csak a betegekben találhatók nagyon magas szinten).

Munkánk feltételezi, hogy a specifikus Autoantitestek expressziós szintjét meg kell változtatni rák esetén, így ezek a különbségek jelezhetik a rák jelenlétét/hiányát.

Ebben a kísérleti protokollban a feltételezett emlőpatológiás autoantitestek expressziós szintjei közötti különbségeket ellenőrizzük.

Jövő CAAA-teszt Felhasználási szándék – A specifikus emlő CAAA-k azonosítása, további immunológiai és antigéninformációkkal szolgálhat a klinikus számára a páciens állapotáról vagy egészségügyi állapotáról.

A tesztelés fő lépései és összetevői – A CAAA-teszt egy vérvételi és feldolgozási lépésből áll, amelyet specifikus autoantitestek kimutatása követ ELISA-alapú teszttel és matematikai feldolgozással, majd az eredményeket "pozitív" vagy "negatív" kategóriába sorolják. mellrák esetén.

Tanulmányi népesség:

A vizsgálati populációba minden olyan nő beletartozik, akinél bármilyen rákellenes kezelést megelőzően patológiás vagy citológiai vizsgálatot végeznek, akár biopsziával, akár citológiával. A klinikai gyanú a következők egyikét tartalmazza: pozitív mammográfia/US/MRI és feltételezett fizikális ellenőrzés. A végső ellenőrzést ("igazi pozitív" vagy "igazi negatív") csak a patológiával/citológiával kapcsolatban kell elvégezni.

Tárgyválasztás:

Az „igazán pozitív” csoport minden olyan szekvenciális betegből áll, akik megfelelnek a felvételi kritériumoknak, és pozitív biopsziás eredménnyel rendelkeznek. Az "igazi negatív" csoport olyan szekvenciális betegekből áll, akik megfelelnek a felvételi kritériumoknak, és negatív biopsziás eredményekkel rendelkeznek.

A betegtől vérminta vétele előtt írásos beleegyezést kell kérni.

Ez a tanulmány több központ részvételén fog alapulni. A vizsgálathoz szükséges helyszínek minimális száma 2.

Minden telephely a kórházakon belül lesz, akár a sebészeti osztályon, akár az adott egységen, amely felelős a BC betegek ellátásáért.

Ugyanazt a protokollt és ugyanazokat a megfigyelési rutinokat alkalmazzák minden helyen. Az összes CRF adatot elektronikusan küldjük be egy erre a célra kialakított és biztonságos internetes oldalon, és minden változást nyomon követünk. A CAAA-tesztek végrehajtása során a labor/szponzor csapatnak nem lesz információja a minta jellegéről. Ezt a kóros információt a CAAA-teszttel párhuzamosan statisztikai értékeléshez adjuk.

DIZÁJNT TANULNI:

Általános leírás - A jelenlegi vizsgálat egyetlen vak eset-kontroll validációs vizsgálat, amelyben minden olyan emlőrákos alany vesz részt, akiknek pozitív biopsziás eredménye (igaz pozitív), és azonos számú beteg biopsziás eredménye negatív (igaz negatív). A vizsgálat célja a CAAA teszt hatékonyságának értékelése.

A vizsgálat hatékonyságát a CAAA-teszt specificitásaként határozzák meg egy előre meghatározott 95%-os érzékenység mellett.

A tanulmány értékeli a CAAA-teszt érzékenységét annak bizonyítására, hogy az nem éri el a deklarált 95%-os szintet.

A tanulmány értékeli a CAAA teszt specifitását az új vizsgálati populációban.

A különböző populációkban végzett mammográfiás PPV ismert eredményei alapján feltételezzük, hogy a vizsgált populáció a valódi pozitív rákos esetek körülbelül 30%-át tartalmazza.

A mai napig a gyanús személyek nagy részét csak a biopszia végleges patológiája diagnosztizálta. Ebben a vizsgálatban a valódi pozitív és a valódi negatív eseteket (a biopsziával igazolt) összehasonlítjuk a CAAA-teszt eredményeivel.

Tanulmányi eljárások

A kórházban:

Először is, egy azonosított vizsgálati alanynak alá kell írnia egy tájékozott beleegyezési űrlapot, és kitöltött alkalmassági űrlapját, mindkettőt vonalkóddal kell ellátni.

Az alanyok a páciens egészségügyi aktájából szerzett klinikai információit, beleértve az életkort, a kórelőzményt és az emlőrák diagnosztikus értékeléséhez vezető vizsgálatok eredményeit, a megfelelő, vonalkódos, vizsgálat előtti esetjelentési űrlapokon rögzítik. A jelentések elektronikus úton készülnek egy erre a célra kialakított és biztonságos internetes oldalon, az adatbázisban bekövetkezett változásokat rögzítjük és nyomon követhetőek lesznek. Az iratok nyomtatott példányát az osztályon őrizzük meg. A vizsgálat névtelen, és az osztály megőrzi a beteg nevét anélkül, hogy felfedné a vizsgálók és a vizsgálat szponzora számára.

Az orvos/ápolónő/phlebotomist összegyűjt egy heparin vákuumcsövet (kb. 8 ml), és felcímkézi (vonalkóddal). A vért tartalmazó tubus duplán lezárt tartályba kerül.

A vért szobahőmérsékleten (18-25°C) a vonatkozó előírásoknak megfelelően szállítjuk a laboratóriumba. A szállítási idő nem haladja meg a 6 órát.

A vérkezelő laboratórium a protokoll szerint gyűjti a szérumot, és a szérumot -80 °C-on lefagyasztva, megfelelően jelölt alikvotokban tárolja. A lefagyasztott mintákat a diagnosztikai laboratóriumba küldik ellenanyag-vizsgálatra.

A diagnosztikai laboratóriumban ELISA alapú teszteket végeznek az autoantitestek relatív expressziós arányának kimutatására minden mintán a laboratóriumi protokollnak megfelelően. A mintákat megvizsgálják a korábbi betanítási sorozat során azonosított antigének antitestszintjére. Az összes adatot véglegesen közvetlenül egy erre a célra szolgáló számítógépre rögzítjük. Minden egyes mintánál az összes antitest-eredmény a kódolt betegfájlba kerül. Egy matematikai algoritmus határozza meg, hogy a minta pozitív vagy negatív.

A kórházban, biopszia után:

A biopszia után 2-3 héttel a CRO összegyűjti a páciens aktájából a patológiai labor eredményeit és minden egyéb lényeges információt a feltételezett tömeg természetére vonatkozóan. Ezeket az eredményeket rögzítik a dedikált és biztonságos internetes oldalon, és egy nyomtatott, vonalkódos CRF-et az osztályon tárolnak.

A kórház megőrzi a feltételezett tömegek szeleteit (akár biopsziából, akár műtétből) a jövőbeni immunhisztokémiai vagy egyéb vizsgálatokhoz, amelyeket a szponzor végez.

A végső patológiát összehasonlítják a CAAA teszt eredményeivel. Az eredményeket a rákos populáció vizsgálatában jártas statisztikus elemzi.

A vizsgálatba bevont betegek vérvizsgálaton esnek át, és csak a vérvétellel kapcsolatos kockázatok vannak. Mivel a kezelést az eredmények nem befolyásolják, a vizsgálatban részt vevő betegeket nem kockáztatják.

Mivel a vizsgálatot az egyes betegekhez való kapcsolódás nélkül végzik, a vérmintán végzett további vizsgálatoknak nincs közvetlen előnye. A jövőbeni előnyök származhatnak a vizsgálati eljárás fejlesztéséből.

A jelenlegi vizsgálat egy vak prospektív validációs vizsgálat, amely magában foglalja az összes egymást követő emlőpatológiás gyanús alanyt, akiket biopsziára terveznek a vizsgálat időtartama alatt. A vizsgálat célja a CAAA-teszt érzékenységének és specificitásának felmérése az emlőrák kimutatására biopsziára tervezett nőknél.

A vizsgálati alanyokat a felvételi és kizárási kritériumoknak megfelelően szűrik a vizsgálatban való potenciális részvételre.

Az adatok tartalmazzák az alanyok klinikai és patológiás állapotának paramétereit, valamint a CAAA ELISA eredményeit.

A tanulmánynak két célja van.

1. Annak ellenőrzésére, hogy a CAAA érzékenysége nem haladja meg az előre meghatározott szintet.
2. A CAAA teszt specificitásának értékelése. Statisztikai hipotézis A mintanagyság meghatározásának fő feltétele annak érvényesítése, hogy a teszt érzékenysége ne legyen alacsonyabb az előre meghatározott szintnél. Az osztályozási szabályt úgy határozták meg, hogy az érzékenység a tréningkészletben 100% legyen. Feltételezzük, hogy a valós érzékenység nem alacsonyabb, mint 99%.

Null hipotézis: A teszt érzékenysége nem haladja meg a 95%-ot. Alternatív hipotézis: A teszt érzékenysége nem kevesebb, mint 99%. Adatkezelés Adatbázis-kezelő rendszert kell megtervezni és karbantartani, beleértve a képernyő-előkészítést és a szerkesztésellenőrzési programozást. Minden adatbeviteli központban el kell végezni a klinikai adatok bevitel előtti és utáni minőségellenőrzését. Az összes ELISA teszt eredményét egy internetes felületen keresztül feltöltjük az adatbázisba, és a további változtatások ellen zároljuk. Az ELISA teszt eredményeinek megváltoztatásához az adatbázis feloldásához a helyi CRO, a szponzor és a helyszíni orvos beleegyezése szükséges. A zárolás feloldását csak a webmester végezheti el, és rögzítő lesz a nyomkövetési rendszer komponensében, valamint a szponzor és a CRO által a helyszínen tárolt nyomtatott példányban.