Análisis de sangre para autoanticuerpos asociados al cáncer de mama

Información general:

Dado que las mutaciones de una célula normal que conducen a una malignidad implican cambios en la estructura y función de las células, podría suponerse que el sistema inmunitario ha reconocido algunos de estos cambios como determinantes antigénicos contra los que debe responderse. Durante muchos años, los investigadores trataron de distinguir entre los pacientes con cáncer y la población sana por la diferencia en el nivel de autoanticuerpos específicos. En la población sana, se determinó una línea de base de la cantidad de autoanticuerpos, y la población de pacientes tenía que tener un nivel de autoanticuerpos más alto estadísticamente significativo. Se pueden encontrar muchos ejemplos de este método en la literatura científica [referencias de ejemplo - Naora et.al. (2001); mintz et. Alabama. (2003); Korneeva et. Al (2000)]. La presencia de autoanticuerpos en toda la población en diferentes niveles hizo muy difícil encontrar estos anticuerpos específicamente discriminatorios. Hasta la fecha, ningún autoanticuerpo específico distingue únicamente entre pacientes sanos y con cáncer (a diferencia de las enfermedades autoinmunes, en las que se pueden encontrar autoanticuerpos específicos en niveles muy altos solo en pacientes).

Nuestro trabajo asume que el nivel de expresión de autoanticuerpos específicos debe estar alterado en el cáncer y, por lo tanto, estas diferencias pueden indicar la presencia/ausencia de cáncer.

En este protocolo de experimento, buscamos diferencias en los niveles de expresión de autoanticuerpos específicos de sospecha de patología mamaria.

Uso futuro de la prueba CAAA: la identificación de CAAA de mama específicas podría proporcionar al médico información inmunológica y antigénica adicional con respecto a la condición o el estado médico del paciente.

Pasos y componentes principales de la prueba: la prueba CAAA consta de un paso de recolección y procesamiento de sangre seguido de la detección de autoanticuerpos específicos con un ensayo basado en ELISA y un procesamiento matemático, con una clasificación posterior de los resultados como "positivo" o "negativo". para el cáncer de mama.

Población de estudio:

La población de estudio incluye a todas las mujeres que están programadas para una confirmación patológica o citológica ya sea por cualquier tipo de biopsia o citología, previo a cualquier tratamiento contra el cáncer. La sospecha clínica incluye uno de los siguientes: mamografía/US/MRI positiva y control físico sospechoso. La verificación final ("verdadero positivo" o "verdadero negativo") se realizará únicamente en relación con la patología/citología.

Selección de tema:

El grupo "verdadero positivo" consta de todos los pacientes secuenciales que cumplen los criterios de inclusión y tienen resultados de biopsia positivos. El grupo "verdadero negativo" consta de pacientes secuenciales que cumplen los criterios de inclusión y tienen resultados de biopsia negativos.

Se debe obtener el consentimiento informado por escrito antes de obtener una muestra de sangre del paciente.

Este estudio se basará en la participación de varios centros. El número mínimo de sitios para el estudio es de 2.

Todos los sitios estarán dentro de los hospitales, ya sea en el departamento de cirugía o en la unidad específica relevante que sea responsable de brindar atención a los pacientes con CM.

Se aplicará el mismo protocolo y las mismas rutinas de monitoreo a todos los sitios. Todos los datos de CRF se enviarán electrónicamente a través de un sitio de Internet dedicado y seguro, se realizará un seguimiento de todos los cambios. Al realizar las pruebas CAAA, el equipo de laboratorio/patrocinador no tendrá información sobre la naturaleza de la muestra. Esta información patológica se proporcionará para la evaluación estadística en paralelo a la prueba CAAA.

DISEÑO DEL ESTUDIO:

Descripción general: el estudio actual es un estudio de validación de casos y controles ciego simple, que involucra a todos los sujetos consecutivos con cáncer de mama que tienen resultados de biopsia positivos (verdadero positivo) y el mismo número de pacientes con resultados de biopsia negativos (verdadero negativo). El propósito del estudio es evaluar la efectividad de la prueba CAAA.

La efectividad del estudio se define como la especificidad de la prueba CAAA para una sensibilidad predefinida del 95%.

El estudio evaluará la sensibilidad de la prueba CAAA para demostrar que no está por debajo del nivel declarado del 95 %.

El estudio evaluará la especificidad de la prueba CAAA en la nueva población de estudio.

De acuerdo con los resultados conocidos del VPP de la mamografía en varias poblaciones, asumimos que la población del estudio incluirá alrededor del 30 % de los casos de cáncer positivos verdaderos.

A día de hoy, una gran proporción de los sujetos sospechosos solo fueron diagnosticados por patología final de la biopsia. En este estudio, los casos verdaderos positivos y verdaderos negativos (verificados por biopsia) se compararán con los resultados de la prueba CAAA.

Procedimientos de estudio

En el hospital:

Primero, un sujeto de estudio identificado tiene que firmar un formulario de consentimiento informado, y su Formulario de Elegibilidad completado, ambos deben tener un código de barras.

La información clínica de los sujetos obtenida del expediente médico del paciente, incluida la edad, el historial médico y los resultados de las pruebas realizadas que conducen a la evaluación diagnóstica del cáncer de mama, se registrará en los formularios de informes de casos previos al estudio con código de barras apropiados. Los informes serán electrónicos a través de un sitio de Internet dedicado y seguro, cualquier cambio en la base de datos se registrará y será rastreable. Una copia impresa de los registros se mantendrá en el departamento. El estudio es anónimo y el Departamento conservará el nombre del paciente sin revelarlo a los investigadores ni al patrocinador del estudio.

El médico/enfermera/flebotomista recogerá un tubo de vacío de heparina (alrededor de 8 ml), lo etiquetará (código de barras). El tubo con la sangre se empaquetará en un recipiente de doble sellado.

La sangre será transportada a temperatura ambiente (18-25°C), según la normativa vigente, al laboratorio. El tiempo de transporte no será mayor a 6 horas.

El laboratorio de manipulación de sangre recolectará suero de acuerdo con el protocolo, y el suero se mantendrá congelado a -80, en alícuotas debidamente etiquetadas. Las muestras congeladas se enviarán al laboratorio de diagnóstico para las pruebas de anticuerpos.

En el laboratorio de diagnóstico, se realizarán pruebas basadas en ELISA para la detección de relaciones de expresión relativa de autoanticuerpos, en cada muestra de acuerdo con el protocolo de laboratorio. Las muestras se analizarán en busca de niveles de anticuerpos para los antígenos que se identificaron en un conjunto de entrenamiento anterior. Todos los datos se registrarán permanentemente directamente en una computadora dedicada. Para cada muestra, todos los resultados de anticuerpos se incluirán en el archivo codificado del paciente. Un algoritmo matemático determinará si la muestra es positiva o negativa.

En el Hospital, post biopsia:

2-3 semanas después de la biopsia, el CRO recopilará del expediente del paciente los resultados del laboratorio de patología y cualquier otra información relevante en cuanto a la naturaleza de la masa sospechosa. Estos resultados se registrarán en el sitio de Internet dedicado y seguro y se mantendrá un CRF impreso con código de barras en el Departamento.

El hospital conservará cortes de las masas sospechosas (ya sea de biopsia o cirugía) para futuros estudios inmunohistoquímicos u otros estudios que realizará el patrocinador.

La patología final se comparará con los resultados de la prueba CAAA. Los resultados serán analizados por un estadístico con experiencia en estudios de población con cáncer.

Los pacientes incluidos en este estudio están siendo sometidos a análisis de sangre, y los únicos riesgos son los relacionados con la extracción de sangre. Como el tratamiento no se ve afectado por los resultados, no hay riesgos para los pacientes que participan en el estudio.

Como el estudio se lleva a cabo sin ningún vínculo con el paciente individual, no se obtiene un beneficio inmediato de las pruebas adicionales realizadas en la muestra de sangre. Se pueden derivar beneficios futuros del desarrollo del ensayo.

El estudio actual es un estudio de validación prospectivo ciego, que involucra a todos los sujetos consecutivos con sospecha de patología mamaria programados para biopsia durante la duración del estudio. El propósito del estudio es evaluar la sensibilidad y especificidad de la prueba CAAA para la detección de cáncer de mama en mujeres programadas para biopsia.

Los sujetos serán seleccionados para su posible participación en el estudio, de acuerdo con los criterios de inclusión y exclusión.

Los datos incluirán parámetros del estado clínico y patológico de los sujetos y resultados de CAAA ELISA.

Hay dos objetivos del estudio.

1. Para probar que la sensibilidad de CAAA no está por debajo del nivel predefinido.
2. Evaluar la especificidad de la prueba CAAA. Hipótesis estadística La principal condición para determinar el tamaño de la muestra es validar que la sensibilidad de la prueba no sea inferior al nivel predefinido. La regla de clasificación se estableció de tal forma que la sensibilidad en el conjunto de entrenamiento fuera del 100%. Suponemos que la sensibilidad real no es inferior al 99%.

Hipótesis Nula: La sensibilidad de la prueba no es superior al 95%. Hipótesis alternativa: La sensibilidad de la prueba no es inferior al 99%. Gestión de datos Se debe diseñar y mantener un sistema de gestión de base de datos, incluida la preparación de pantallas y la programación de verificación de edición. El control de calidad previo y posterior al ingreso de los datos clínicos se realizará en cada centro de ingreso de datos. Todos los resultados de las pruebas ELISA se cargarán en la base de datos a través de una interfaz basada en Internet y se bloquearán contra cambios posteriores. Para cambiar los resultados de la prueba ELISA, el desbloqueo de la base de datos requiere el consentimiento del CRO local, el patrocinador y el médico del sitio. El desbloqueo será realizado únicamente por el webmaster, y quedará registrado en el componente del sistema de rastreo, y en una copia impresa en poder tanto del patrocinador como del CRO en el sitio.