Proteomics & glyco-proteomische analyse van folliculaire vloeistof

In deze studie zijn we van plan ultrasensitieve massaspectrometrie (MS) en andere conventionele proteomische benaderingen te gebruiken om de laag en hoog overvloedige eiwitten die aanwezig zijn in menselijke FF te identificeren. Bovendien zijn we van plan om krachtige vloeistofchromatografie (HPLC) en Western-blottechnieken te gebruiken om de op Neu5Gc en glycan-array gebaseerde ELISA-technieken te evalueren om anti-Neu5Gc-antilichaamprofiel in menselijke FF te detecteren. Deze analyse zal worden uitgevoerd op FF-monsters die zijn verkregen van normale vrouwen die in-vitrofertilisatie en embryotransfers (IVF-ET) ondergaan voor alleen een mannelijke factor en eiceldonoren van ons 3rd Party Reproduction Program en van magere en zwaarlijvige vrouwen met PCOS. Deze studie zal informatie verschaffen over eiwit-, glycoproteïne- en steroïdehormoonexpressie tijdens normale folliculogenese en tijdens de pathologische toestand van PCOS, die ook fundamentele wetenschappelijke informatie zou moeten opleveren over normale en abnormale eicelontwikkeling.

Menselijke FF baadt de zich ontwikkelende eicel. Eerdere studies geven aan dat de FF cytokines, steroïde- en eiwithormonen en groeifactoren bevat. De aanwezigheid van eiwitten met dergelijke significante biologische eigenschappen impliceert een paracriene en autocriene rol voor de FF bij het bevorderen van de normale eicelontwikkeling. Bovendien kunnen de aanwezigheid van elk antigeen siaalzuur Neu5Gc en de aanwezigheid van antilichamen gericht tegen deze antigene glycoconjugaten (glycolipide en glycoproteïnen gedecoreerd met siaalzuur) de ontwikkeling van eicellen, hormonale expressie, bevruchting en mogelijk implantatie verstoren. Hier veronderstellen we dat een uitputtende proteomische en glyco-proteomische karakterisering van menselijke FF essentieel is voor een grondig begrip van de biologische betekenis ervan. We veronderstellen ook dat PCOS een differentiële expressie van het FF-eiwit en glyco-eiwitmilieu kan hebben, en dat de expressie verder kan verschillen tussen magere en zwaarlijvige vrouwen met PCOS. PCOS vertegenwoordigt een heterogene aandoening. De ernst van hyperandrogensim, metabole en menstruele stoornissen en obesitas is variabel met tot 40% geen klinische tekenen van klassiek hyperandrogenisme. Aan de andere kant kunnen deze atypische, vaak slanke, PCOS-vrouwen een verminderde glucosetolerantie en diabetes hebben. Rapporten suggereren dat deze magere PCOS-vrouwen een veranderd serum IGFBP-1 hebben, een kenmerkend endocrien kenmerk van patiënten met obese PCOS, en gerelateerd aan hyperinsulinemie en/of obesitas. Het magere fenotype van PCOS en de betekenis ervan is onduidelijk, maar kan een cryptische of onuitgesproken vorm van PCOS vertegenwoordigen of kan een opmaat zijn voor personen die later klinische symptomen van obesitas / overgewicht PCOS zullen vertonen. Veranderingen in expressie kunnen worden verwacht vanwege de verschillende hoeveelheden steroïde hormonen en ontstekingsmarkers in de FF afkomstig van vrouwen met PCOS.