Follikulaarisen nesteen proteomiikka ja glykoproteominen analyysi

Tässä tutkimuksessa aiomme käyttää ultrasensitiivistä massaspektrometriaa (MS) ja muita tavanomaisia ​​proteomisia lähestymistapoja tunnistaaksemme ihmisen FF:ssä esiintyviä vähäisiä ja runsaasti proteiineja. Lisäksi aiomme käyttää korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa (HPLC) ja Western blot -tekniikoita arvioidaksemme Neu5Gc- ja glykaanirivipohjaisia ​​ELISA-tekniikoita anti-Neu5Gc-vasta-aineprofiilin havaitsemiseksi ihmisen FF:ssä. Tämä analyysi suoritetaan FF-näytteillä, jotka on saatu normaaleista naisista, joille tehdään koeputkihedelmöitystä ja alkionsiirtoja (IVF-ET) pelkästään miespuolisen tekijän osalta ja munasolun luovuttajille kolmannen osapuolen lisääntymisohjelmasta sekä laihoilta ja lihavilta naisilta, joilla on PCOS. Tämä tutkimus antaa tietoa proteiinien, glykoproteiinien ja steroidihormonien ilmentymisestä normaalin follikulogeneesin ja PCOS:n patologisen tilan aikana, minkä pitäisi myös tarjota tieteellistä perustietoa munasolujen normaalista ja epänormaalista kehityksestä.

Ihmisen FF kylpee kehittyvää munasolua. Aiemmat tutkimukset osoittavat, että FF sisältää sytokiinejä, steroidi- ja proteiinihormoneja sekä kasvutekijöitä. Tällaisten merkittävien biologisten ominaisuuksien omaavien proteiinien läsnäolo viittaa FF:n parakriiniseen ja autokriiniseen rooliin normaalin munasolun kehityksen edistämisessä. Lisäksi minkä tahansa antigeenisen siaalihapon Neu5Gc ja näihin antigeenisiin glykokonjugaatteihin kohdistuvien vasta-aineiden (glykolipidit ja siaalihapolla koristellut glykoproteiinit) läsnäolo voi häiritä munasolujen kehitystä, hormonaalista ilmentymistä, hedelmöittymistä ja mahdollisesti implantaatiota. Tässä oletamme, että ihmisen FF:n kattava proteominen ja glykoproteominen karakterisointi on välttämätöntä sen biologisen merkityksen perusteelliselle ymmärtämiselle. Oletamme myös, että PCOS:llä voi olla erilainen FF-proteiinin ja glykoproteiinimiljöö ilmentyminen ja että ilmentyminen voi vaihdella edelleen laihojen ja liikalihavien naisten välillä, joilla on PCOS. PCOS edustaa heterogeenistä sairautta. Hyperandrogenismin, aineenvaihdunta- ja kuukautishäiriöiden sekä liikalihavuuden vakavuus vaihtelee, ja jopa 40 %:lla ei ole kliinisesti ilmeneviä klassisen hyperandrogenismin merkkejä. Toisaalta näillä epätyypillisillä, usein laihoilla PCOS-naisilla voi olla heikentynyt glukoositoleranssi ja diabetes. Raportit viittaavat siihen, että näillä laihoilla PCOS-naisilla on muuttunut seerumin IGFBP-1, joka on liikalihavien PCOS-potilaiden tyypillinen endokriininen piirre ja liittyy hyperinsulinemiaan ja/tai liikalihavuuteen. PCOS:n laiha fenotyyppi ja sen merkitys on epäselvä, mutta se voi edustaa PCOS:n salaperäistä tai ilmentämätöntä muotoa tai se voi olla alkusoitto henkilöille, joilla myöhemmin ilmenee liikalihavuuden/ylipainoisen PCOS:n kliinisiä oireita. Muutoksia ilmentymisessä voidaan odottaa johtuen steroidihormonien ja tulehdusmerkkiaineiden eri määristä FF:ssä, jotka ovat peräisin PCOS-potilailta.