Analiza proteomiczna i glikoproteomiczna płynu pęcherzykowego

W tym badaniu planujemy wykorzystać ultraczułą spektrometrię mas (MS) i inne konwencjonalne podejścia proteomiczne do identyfikacji białek o niskiej i wysokiej obfitości obecnych w ludzkim FF. Ponadto planujemy zastosować wysokosprawną chromatografię cieczową (HPLC) i techniki Western blot do oceny technik ELISA opartych na Neu5Gc i glikanach w celu wykrycia profilu przeciwciał anty-Neu5Gc w ludzkim FF. Ta analiza zostanie przeprowadzona na próbkach FF uzyskanych od normalnych kobiet poddawanych zapłodnieniu in vitro i transferom zarodków (IVF-ET) dla samego czynnika męskiego oraz dawców oocytów z naszego zewnętrznego programu reprodukcji oraz od szczupłych i otyłych kobiet z PCOS. Badanie to dostarczy informacji na temat ekspresji białek, glikoprotein i hormonów steroidowych podczas normalnej folikulogenezy i podczas stanu patologicznego PCOS, co powinno również dostarczyć podstawowych informacji naukowych na temat prawidłowego i nieprawidłowego rozwoju oocytów.

Ludzki FF kąpie rozwijający się oocyt. Wcześniejsze badania wskazują, że FF zawiera cytokiny, hormony steroidowe i białkowe oraz czynniki wzrostu. Obecność białek o tak znaczących właściwościach biologicznych implikuje parakrynną i autokrynną rolę FF w promowaniu prawidłowego rozwoju oocytów. Ponadto obecność jakiegokolwiek antygenowego kwasu sialowego Neu5Gc oraz obecność przeciwciał ukierunkowanych na te antygenowe glikokoniugaty (glikolipid i glikoproteiny dekorowane kwasem sialowym) może zakłócać rozwój oocytów, ekspresję hormonalną, zapłodnienie i prawdopodobnie implantację. Tutaj stawiamy hipotezę, że wyczerpująca charakterystyka proteomiczna i gliko-proteomiczna ludzkiego FF jest niezbędna do dokładnego zrozumienia jego biologicznego znaczenia. Stawiamy również hipotezę, że PCOS może mieć zróżnicowaną ekspresję białka FF i środowiska glikoprotein oraz że ekspresja może się dalej różnić między szczupłymi i otyłymi kobietami z PCOS. PCOS reprezentuje heterogenne zaburzenie. Nasilenie hiperandrogenizmu, zaburzeń metabolicznych i menstruacyjnych oraz otyłości jest zmienne i do 40% nie wykazuje klinicznie objawów klasycznego hiperandrogenizmu. Z drugiej strony te nietypowe, często szczupłe kobiety z PCOS mogą mieć upośledzoną tolerancję glukozy i cukrzycę. Raporty sugerują, że te szczupłe kobiety z PCOS mają zmienione stężenie IGFBP-1 w surowicy, charakterystyczną cechę endokrynologiczną pacjentek z otyłym PCOS i związaną z hiperinsulinemią i/lub otyłością. Fenotyp szczupłego PCOS i jego znaczenie jest niejasny, ale może reprezentować tajemniczą lub niewyrażoną postać PCOS lub może być wstępem do osób, u których później pojawią się kliniczne objawy otyłości / nadwagi PCOS. Można spodziewać się zmian w ekspresji ze względu na różne ilości hormonów steroidowych i markerów stanu zapalnego w FF pochodzących od kobiet z PCOS.