Proteomikk og glykoproteomisk analyse av follikkelvæske

I denne studien planlegger vi å bruke ultrasensitiv massespektrometri (MS) og andre konvensjonelle proteomiske tilnærminger for å identifisere de lave og høye proteinene som er tilstede i human FF. I tillegg planlegger vi å bruke høyytelses væskekromatografi (HPLC) og Western blot-teknikker for å evaluere Neu5Gc- og glykanarray-baserte ELISA-teknikker for å oppdage anti-Neu5Gc-antistoffprofil i human FF. Denne analysen vil bli utført på FF-prøver hentet fra normale kvinner som gjennomgår in-vitro fertilisering og embryooverføringer (IVF-ET) for en mannlig faktor alene og oocyttdonorer fra vårt tredjeparts reproduksjonsprogram og fra magre og overvektige kvinner med PCOS. Denne studien vil gi informasjon om protein-, glykoprotein- og steroidhormonuttrykk under normal follikulogenese og under den patologiske tilstanden til PCOS, som også skal gi grunnleggende vitenskapelig informasjon om normal og unormal oocyttutvikling.

Human FF bader den utviklende oocytten. Tidligere studier indikerer at FF inneholder cytokiner, steroid- og proteinhormoner og vekstfaktorer. Tilstedeværelsen av proteiner med slike betydelige biologiske egenskaper innebærer en parakrin og autokrin rolle for FF i å fremme normal oocyttutvikling. Videre kan tilstedeværelsen av antigen sialinsyre Neu5Gc og tilstedeværelsen av antistoffer rettet mot disse antigene glykokonjugatene (glykolipid og glykoproteiner dekorert med sialinsyre) forstyrre oocyttutvikling, hormonell ekspresjon, befruktning og muligens implantasjon. Her antar vi at en uttømmende proteomisk og glykoproteomisk karakterisering av menneskelig FF er avgjørende for en grundig forståelse av dens biologiske betydning. Vi antar også at PCOS kan ha differensielt uttrykk for FF-proteinet og glykoproteinmiljøet, og at uttrykket kan avvike ytterligere mellom magre og overvektige kvinner med PCOS. PCOS representerer en heterogen lidelse. Alvorlighetsgraden av hyperandrogensim, metabolske og menstruasjonsforstyrrelser og fedme varierer med opptil 40 % som ikke klinisk uttrykker tegn på klassisk hyperandrogenisme. På den annen side kan disse atypiske, ofte magre, PCOS-kvinnene ha nedsatt glukosetoleranse og diabetes. Rapporter tyder på at disse magre PCOS-kvinnene har endret serum IGFBP-1, et karakteristisk endokrine trekk hos pasienter med overvektige PCOS, og relatert til hyperinsulinemi og/eller fedme. Den magre fenotypen av PCOS og dens betydning er uklar, men kan representere en kryptisk eller uuttrykt form for PCOS eller kan være et forspill til individer som senere vil manifestere kliniske tegn på fedme/overvekt PCOS. Endringer i uttrykk kan forventes på grunn av de forskjellige mengder av steroidhormoner og inflammatoriske markører i FF avledet fra kvinner med PCOS.