Proteomics & Glyco-Proteomic Analyse af follikulær væske

I denne undersøgelse planlægger vi at bruge ultrasensitiv massespektrometri (MS) og andre konventionelle proteomiske tilgange til at identificere de lave og rigelige proteiner, der er til stede i human FF. Derudover planlægger vi at bruge højtydende væskekromatografi (HPLC) og Western blot-teknikker til at evaluere de Neu5Gc- og glycan-array-baserede ELISA-teknikker til at detektere anti-Neu5Gc-antistofprofil i human FF. Denne analyse vil blive udført på FF-prøver opnået fra normale kvinder, der gennemgår in-vitro-fertilisering og embryooverførsel (IVF-ET) for en mandlig faktor alene og oocytdonorer fra vores 3. parts reproduktionsprogram og fra magre og overvægtige kvinder med PCOS. Denne undersøgelse vil give information om protein-, glycoprotein- og steroidhormonekspression under normal follikulogenese og under den patologiske tilstand af PCOS, hvilket også skulle give grundlæggende videnskabelig information om normal og unormal oocytudvikling.

Human FF bader den udviklende oocyt. Tidligere undersøgelser indikerer, at FF indeholder cytokiner, steroid- og proteinhormoner og vækstfaktorer. Tilstedeværelsen af ​​proteiner med så betydelige biologiske egenskaber indebærer en parakrin og autokrin rolle for FF i at fremme normal oocytudvikling. Ydermere kan tilstedeværelsen af ​​enhver antigen sialinsyre Neu5Gc og tilstedeværelsen af ​​antistoffer rettet mod disse antigene glycokonjugater (glycolipid og glycoproteiner dekoreret med sialinsyre) forstyrre oocytudvikling, hormonel ekspression, befrugtning og muligvis implantation. Her antager vi, at en udtømmende proteomisk og glykoproteomisk karakterisering af human FF er afgørende for en grundig forståelse af dens biologiske betydning. Vi antager også, at PCOS kan have differentiel ekspression af FF-proteinet og glykoproteinmiljøet, og at udtrykket kan afvige yderligere mellem magre og overvægtige kvinder med PCOS. PCOS repræsenterer en heterogen lidelse. Sværhedsgraden af ​​hyperandrogensim, metaboliske og menstruationsforstyrrelser og fedme varierer med op til 40%, der ikke klinisk udtrykker tegn på klassisk hyperandrogenisme. På den anden side kan disse atypiske, ofte magre, PCOS-kvinder have nedsat glukosetolerance og diabetes. Rapporter tyder på, at disse magre PCOS-kvinder har ændret serum IGFBP-1, et karakteristisk endokrin træk hos patienter med overvægtige PCOS, og relateret til hyperinsulinemi og/eller fedme. Den magre fænotype af PCOS og dens betydning er uklar, men kan repræsentere en kryptisk eller uudtrykt form for PCOS eller kan være en optakt til personer, der senere vil manifestere kliniske tegn på fedme/overvægtige PCOS. Ændringer i ekspression kan forventes på grund af de forskellige mængder af steroide hormoner og inflammatoriske markører i FF afledt af kvinder med PCOS.