Proteomika a glykoproteomická analýza folikulární tekutiny

V této studii plánujeme využít ultrasenzitivní hmotnostní spektrometrii (MS) a další konvenční proteomické přístupy k identifikaci proteinů s nízkým a vysokým zastoupením přítomných v lidské FF. Kromě toho plánujeme použít vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (HPLC) a techniky Western blot k vyhodnocení technik ELISA založených na Neu5Gc a glykanovém čipu k detekci profilu anti-Neu5Gc protilátky v lidské FF. Tato analýza bude provedena na vzorcích FF získaných od normálních žen podstupujících oplodnění in vitro a přenos embryí (IVF-ET) pro samotný mužský faktor a dárce oocytů z našeho 3rd Party Reproduction Program a od štíhlých a obézních žen s PCOS. Tato studie poskytne informace o expresi proteinů, glykoproteinů a steroidních hormonů během normální folikulogeneze a během patologického stavu PCOS, což by také mělo poskytnout základní vědecké informace o normálním a abnormálním vývoji oocytů.

Lidský FF koupe vyvíjející se oocyt. Předchozí studie naznačují, že FF obsahuje cytokiny, steroidní a proteinové hormony a růstové faktory. Přítomnost proteinů s tak významnými biologickými vlastnostmi implikuje parakrinní a autokrinní roli FF při podpoře normálního vývoje oocytů. Kromě toho přítomnost jakékoli antigenní kyseliny sialové Neu5Gc a přítomnost protilátek zaměřujících se na tyto antigenní glykokonjugáty (glykolipid a glykoproteiny zdobené kyselinou sialovou) mohou interferovat s vývojem oocytů, hormonální expresí, oplodněním a možná implantací. Zde předpokládáme, že vyčerpávající proteomická a glykoproteomická charakterizace lidského FF je nezbytná pro důkladné pochopení jeho biologického významu. Také předpokládáme, že PCOS může mít rozdílnou expresi FF proteinu a glykoproteinového prostředí a že exprese se může dále lišit mezi štíhlými a obézními ženami s PCOS. PCOS představuje heterogenní poruchu. Závažnost hyperandrogensimu, metabolických a menstruačních poruch a obezity je variabilní, přičemž až 40 % klinicky nevykazuje známky klasického hyperandrogenismu. Na druhou stranu tyto atypické, často štíhlé ženy s PCOS mohou mít zhoršenou glukózovou toleranci a cukrovku. Zprávy naznačují, že tyto štíhlé ženy s PCOS mají změněný sérový IGFBP-1, což je charakteristický endokrinní rys pacientů s obézním PCOS a souvisí s hyperinzulinémií a/nebo obezitou. Štíhlý fenotyp PCOS a jeho význam je nejasný, ale může představovat kryptickou nebo nevyjádřenou formu PCOS nebo může být předehrou jedinců, u kterých se později projeví klinické příznaky obezity/nadváhy PCOS. Změny v expresi lze očekávat kvůli různým množstvím steroidních hormonů a zánětlivých markerů ve FF odvozených od žen s PCOS.