Протеомика и гликопротеомный анализ фолликулярной жидкости

В этом исследовании мы планируем использовать сверхчувствительную масс-спектрометрию (МС) и другие традиционные протеомные подходы для идентификации белков с низким и высоким содержанием, присутствующих в ФЖ человека. Кроме того, мы планируем использовать высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) и методы вестерн-блоттинга для оценки методов ELISA на основе Neu5Gc и гликановых массивов для определения профиля антител против Neu5Gc в человеческом FF. Этот анализ будет проводиться на образцах FF, полученных от нормальных женщин, подвергающихся экстракорпоральному оплодотворению и переносу эмбрионов (ЭКО-ЭТ) только с мужским фактором, и доноров ооцитов из нашей сторонней программы репродукции, а также от худых женщин и женщин с ожирением с СПКЯ. Это исследование предоставит информацию об экспрессии белков, гликопротеинов и стероидных гормонов при нормальном фолликулогенезе и при патологическом состоянии СПКЯ, что также должно предоставить основную научную информацию о нормальном и аномальном развитии ооцитов.

ФФ человека омывает развивающийся ооцит. Предыдущие исследования показывают, что ФЖ содержит цитокины, стероидные и белковые гормоны и факторы роста. Присутствие белков с такими важными биологическими свойствами предполагает паракринную и аутокринную роль FF в обеспечении нормального развития ооцитов. Кроме того, присутствие любой антигенной сиаловой кислоты Neu5Gc и присутствие антител, нацеленных на эти антигенные гликоконъюгаты (гликолипиды и гликопротеины, украшенные сиаловой кислотой), могут препятствовать развитию ооцитов, экспрессии гормонов, оплодотворению и, возможно, имплантации. Здесь мы предполагаем, что исчерпывающая протеомная и гликопротеомная характеристика FF человека необходима для полного понимания его биологического значения. Мы также предполагаем, что СПКЯ может иметь дифференциальную экспрессию белка FF и гликопротеиновой среды, и что экспрессия может дополнительно различаться у худых и тучных женщин с СПКЯ. СПКЯ представляет собой гетерогенное заболевание. Тяжесть гиперандрогении, метаболических и менструальных нарушений, ожирения вариабельна, до 40% не имеют клинически выраженных признаков классической гиперандрогении. С другой стороны, эти нетипичные, часто худые женщины с СПКЯ могут иметь нарушенную толерантность к глюкозе и диабет. Сообщения предполагают, что у этих худых женщин с СПКЯ изменен сывороточный IGFBP-1, характерный эндокринный признак пациентов с ожирением с СПКЯ, связанный с гиперинсулинемией и/или ожирением. Худощавый фенотип СПКЯ и его значение неясны, но он может представлять собой скрытую или невыраженную форму СПКЯ или может быть прелюдией к людям, у которых позже будут проявляться клинические признаки ожирения/избыточного веса СПКЯ. Изменения в экспрессии можно ожидать из-за разного количества стероидных гормонов и воспалительных маркеров в ФФ женщин с СПКЯ.