Proteomica e analisi glico-proteomica del fluido follicolare

In questo studio, intendiamo utilizzare la spettrometria di massa ultrasensibile (MS) e altri approcci proteomici convenzionali per identificare le proteine ​​​​a bassa e ad alta abbondanza presenti nella FF umana. Inoltre, prevediamo di utilizzare tecniche di cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) e Western blot per valutare le tecniche ELISA basate su Neu5Gc e glycan array per rilevare il profilo anticorpale anti-Neu5Gc nella FF umana. Questa analisi verrà eseguita su campioni FF ottenuti da donne normali sottoposte a fecondazione in vitro e trasferimenti di embrioni (IVF-ET) per un solo fattore maschile e donatori di ovociti dal nostro programma di riproduzione di terze parti e da donne magre e obese con PCOS. Questo studio fornirà informazioni sull'espressione di proteine, glicoproteine ​​e ormoni steroidei durante la normale follicologenesi e durante la condizione patologica della PCOS, che dovrebbe anche fornire informazioni scientifiche di base sullo sviluppo normale e anormale degli ovociti.

La FF umana bagna l'ovocita in via di sviluppo. Precedenti studi indicano che la FF contiene citochine, ormoni steroidei e proteici e fattori di crescita. La presenza di proteine ​​con proprietà biologiche così significative implica un ruolo paracrino e autocrino del FF nel promuovere il normale sviluppo degli ovociti. Inoltre, la presenza di qualsiasi acido sialico antigenico Neu5Gc e la presenza di anticorpi mirati a questi glicoconiugati antigenici (glicolipidi e glicoproteine ​​decorate con acido sialico) possono interferire con lo sviluppo degli ovociti, l'espressione ormonale, la fecondazione e possibilmente l'impianto. Qui ipotizziamo che un'esauriente caratterizzazione proteomica e glico-proteomica della FF umana sia essenziale per una comprensione approfondita del suo significato biologico. Ipotizziamo anche che la PCOS possa avere un'espressione differenziale della proteina FF e dell'ambiente glicoproteico e che l'espressione possa differire ulteriormente tra donne magre e obese con PCOS. La PCOS rappresenta un disturbo eterogeneo. La gravità dell'iperandrogenismo, dei disturbi metabolici e mestruali e dell'obesità è variabile con fino al 40% che non esprime clinicamente segni di iperandrogenismo classico. D'altra parte, queste donne con PCOS atipiche, spesso magre, possono avere una ridotta tolleranza al glucosio e diabete. I rapporti suggeriscono che queste donne magre con PCOS hanno alterato l'IGFBP-1 sierico, una caratteristica endocrina caratteristica dei pazienti con PCOS obesa e correlata all'iperinsulinemia e/o all'obesità. Il fenotipo magro della PCOS e il suo significato non sono chiari, ma possono rappresentare una forma criptica o inespressa di PCOS o possono essere un preludio a individui che in seguito manifesteranno segni clinici di PCOS obesi/sovrappeso. Ci si possono aspettare cambiamenti nell'espressione a causa delle diverse quantità di ormoni steroidei e marcatori infiammatori nel FF derivato da donne con PCOS.