HCV-virionen gebonden eiwitten

De opkomst van hepatocellulair carcinoom (HCC) heeft geleid tot een zoektocht naar een grondig begrip van de biologie van een van de belangrijkste veroorzakers ervan, het hepatitis C-virus (HCV). HCV-deeltjes verwerven via ontluikende en inkapseling van cellulaire eiwitten. Er zijn steeds meer aanwijzingen voor verschillende virale soorten dat virion-gebonden eiwitten geneigd zijn betrokken te zijn bij de replicatie-, budding/egress- of entry/release-stappen van de virale cyclus.

Het identificeren van dergelijke doelen kan ideale kandidaten opleveren voor het verkrijgen van inzicht in de afhankelijkheid van HCV van een beperkte subset van gastheereiwitten, waardoor verfijnde sets van genetisch stabiele doelen voor therapie worden verschaft. De doelstellingen van dit project zijn het opzetten van adequate voorwaarden voor robuuste en reproduceerbare zuivering van HCV-virionen in klinische monsters, gevolgd door de identificatie van hun HCV-gebonden gastheereiwitten en de karakterisering van hun functies. Proteomics-profilering van HCV-deeltjes die uit klinische monsters zijn gezuiverd, zal worden bedekt met eiwitten die tijdens mijn postdoctorale opleiding zijn geïdentificeerd en gekarakteriseerd in in celkweek gekweekte HCV-deeltjes, met behulp van criteria voor de ontdekking van klinische biomarkers. Doelwitten die in beide monstersets worden geïdentificeerd, zullen worden onderworpen aan in-vitro-onderzoeken met behulp van HCV-replicerende cellen. Conventionele biochemische en beeldvormende methoden zullen worden gebruikt om: (i) hun fysische associatie met HCV-virionen vast te stellen; (ii) de modaliteiten van hun interactie met HCV-eiwitten definiëren; (iii) ontcijferen van de topologie en subcellulaire lokalisatie van hun associatie met HCV-eiwitten en virionen; (iv) het kwantitatief beoordelen van hun functionele betrokkenheid bij het ontluiken, uittreden of uitscheiden van deeltjes en besmettelijkheid. Een kandidaat die bevredigende resultaten opleverde in deze experimenten zal worden onthuld en verder worden onderzocht op het niveau van structurele biologie, in gezamenlijke onderzoeksprogramma's.