Proteine legate ai virioni dell'HCV
Proteine umane legate alle particelle del virus dell'epatite C: identificazione in campioni clinici e implicazione nel ciclo di vita virale
L'emergere del carcinoma epatocellulare (HCC) ha spinto a cercare una comprensione approfondita della biologia di uno dei suoi principali agenti causali, il virus dell'epatite C (HCV). Le particelle di HCV acquisiscono tramite proteine cellulari in erba e incapsulamento. Esistono prove crescenti su diverse specie virali che le proteine legate al virione tendono a essere coinvolte nelle fasi di replicazione, germogliamento/uscita o ingresso/rilascio del ciclo virale.
L'identificazione di tali bersagli può produrre candidati ideali per ottenere informazioni sulla dipendenza dell'HCV da un sottoinsieme ristretto di proteine dell'ospite, fornendo quindi insiemi raffinati di bersagli geneticamente stabili per la terapia. Gli obiettivi di questo progetto sono la creazione di condizioni adeguate per una purificazione robusta e riproducibile dei virioni dell'HCV in campioni clinici, seguita dall'identificazione delle loro proteine ospiti legate all'HCV e dalla caratterizzazione delle loro funzioni. La profilazione proteomica delle particelle di HCV purificate da campioni clinici sarà sovrapposta a proteine identificate e caratterizzate in particelle di HCV cresciute in coltura cellulare durante la mia formazione post-dottorato, utilizzando criteri di grado di scoperta di biomarcatori clinici. I bersagli identificati in entrambi i set di campioni saranno sottoposti a indagini in vitro utilizzando cellule replicanti l'HCV. Verranno utilizzati metodi convenzionali biochimici e di imaging per: (i) accertare la loro associazione fisica con i virioni dell'HCV; (ii) definire le modalità della loro interazione con le proteine dell'HCV; (iii) decifrare la topologia e la localizzazione subcellulare della loro associazione con proteine e virioni dell'HCV; (iv) valutare quantitativamente il loro coinvolgimento funzionale nella gemmazione, uscita o secrezione di particelle e nell'infettività. Un candidato che ha prodotto risultati soddisfacenti in questi esperimenti sarà divulgato e ulteriormente studiato a livello di biologia strutturale, in programmi di ricerca collaborativa.
Panoramica dello studio
Stato
Condizioni
Intervento / Trattamento
Tipo di studio
Iscrizione (Effettivo)
Fase
- Non applicabile
Contatti e Sedi
Luoghi di studio
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Lyon, Francia, 69004
- Service d'Hépato-Gastroentérologie Lyon Croix-Rousse Hospices Civils de Lyon
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Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Sessi ammissibili allo studio
Descrizione
Criterio di inclusione:
- Adulti > 18 e <60 anni
- Infettato con HCV genotipo 1 anticorpo HCV positivo.
- viremia positiva da più di 6 mesi
- Viremia > 106 UI/ml.
- non responder al trattamento precedente e senza trattamento antivirale per 2 mesi.
- Per i campioni di controllo: pazienti che hanno risposto al trattamento precedente e senza trattamento antivirale per 2 mesi.
Criteri di esclusione:
- Paziente che riceve o ha ricevuto un trattamento antivirale entro due mesi.
- paziente con controindicazione per un prelievo di sangue di 150 ml
- paziente in terapia immunosoppressiva
- Paziente con malattia epatica diversa dall'epatite C.
- Pazienti con cirrosi.
- paziente con carcinoma epatocellulare.
- Pazienti con una o più gravi comorbilità definite come:
- Co-infezione da HIV o HBV.
- neoplasie ematologiche che cambiano o aplasia
- Diabete insulino-dipendente
- insufficienza renale cronica dializzata
- Insufficienza cardiaca
- Persone soggette a protezione giuridica o oggetto di una misura di salvaguardia della giustizia non iscritte a un regime di previdenza sociale o non beneficiari di tale regime
- Donne incinte
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Scopo principale: Scienza basilare
- Assegnazione: Non randomizzato
- Modello interventistico: Assegnazione parallela
- Mascheramento: Separare
Armi e interventi
Gruppo di partecipanti / Arm |
Intervento / Trattamento |
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Sperimentale: Viremico
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Sperimentale: gruppo di risponditori
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Identificazione qualitativa (unità utilizzata: punteggio Protein Prophet) di una data proteina legata al virione in preparati di virioni purificati
Lasso di tempo: Da uno a due anni dopo l'identificazione mediante spettrometria di massa del candidato
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I punteggi del profeta proteico consentono di stimare la robustezza dell'identificazione di una data proteina negli approcci alla SM.
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Da uno a due anni dopo l'identificazione mediante spettrometria di massa del candidato
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Valutazione quantitativa della sua implicazione nella morfogenesi virale (unità utilizzata: TCID50).
Lasso di tempo: Da uno a due anni dopo l'identificazione mediante spettrometria di massa del candidato
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Le unità TCID50 sono unità di infettività abitualmente utilizzate nella ricerca sull'HCV per la quantificazione dell'infettività virale.
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Da uno a due anni dopo l'identificazione mediante spettrometria di massa del candidato
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Valutazione quantitativa dell'ingresso virale (unità utilizzata: rapporti di copia di HCV RNA/GUS mRNA).
Lasso di tempo: Da uno a due anni dopo l'identificazione mediante spettrometria di massa del candidato
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I rapporti di copia dell'mRNA di HCV RNA/GUS sono derivati dal metodo 2^delta(delta Ct).
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Da uno a due anni dopo l'identificazione mediante spettrometria di massa del candidato
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Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Confronto di set di dati di virioni clinici con set di dati di virioni cresciuti in vitro
Lasso di tempo: Da uno a due anni dopo l'identificazione mediante spettrometria di massa del candidato
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Le proteine identificate da particelle virali purificate da campioni clinici saranno confrontate con le proteine identificate in particelle virali da cellule di epatocarcinoma umano (Huh7.5)
infetti da HCV e di cui sono pubblicati i dati.
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Da uno a due anni dopo l'identificazione mediante spettrometria di massa del candidato
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Collaboratori e investigatori
Sponsor
Investigatori
- Investigatore principale: Fabien ZOULIM, MD, Service d'Hépato-Gastroentérologie Lyon Croix-Rousse Hospices Civils de Lyon
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Studia le date principali
Inizio studio
Completamento primario (Effettivo)
Completamento dello studio (Effettivo)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Stima)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Stima)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
Altri numeri di identificazione dello studio
- 2009-596
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