Proteínas ligadas aos vírions do HCV

O surgimento do carcinoma hepatocelular (CHC) estimulou a busca pelo conhecimento aprofundado da biologia de um de seus principais agentes causadores, o vírus da hepatite C (HCV). As partículas de HCV adquirem proteínas celulares por brotamento e encapsidação. Há evidências crescentes em várias espécies virais de que as proteínas ligadas ao vírion são propensas a estarem envolvidas nas etapas de replicação, brotamento/saída ou entrada/liberação do ciclo viral.

A identificação de tais alvos pode render candidatos ideais para obter informações sobre a dependência do HCV de um subconjunto restrito de proteínas hospedeiras, fornecendo, portanto, conjuntos refinados de alvos geneticamente estáveis ​​para terapia. Os objetivos deste projeto são estabelecer condições adequadas para purificação robusta e reprodutível de virions HCV em amostras clínicas, seguida pela identificação de suas proteínas hospedeiras ligadas ao HCV e caracterização de suas funções. O perfil proteômico de partículas de HCV purificadas de amostras clínicas será sobreposto com proteínas identificadas e caracterizadas em partículas de HCV cultivadas em cultura de células durante meu treinamento de pós-doutorado, usando critérios de grau de descoberta de biomarcadores clínicos. Os alvos identificados em ambos os conjuntos de amostras serão submetidos a investigações in vitro usando células replicantes do HCV. Métodos bioquímicos e de imagem convencionais serão utilizados para: (i) averiguar sua associação física com os vírions do HCV; (ii) definir as modalidades de sua interação com as proteínas do HCV; (iii) decifrar a topologia e localização subcelular da sua associação com as proteínas e viriões do HCV; (iv) avaliar quantitativamente o seu envolvimento funcional no brotamento, saída ou secreção de partículas e infecciosidade. Um candidato que obtiver resultados satisfatórios nesses experimentos será divulgado e investigado em nível de biologia estrutural, em programas de pesquisa colaborativa.