Frequentie van MCP-1- en CCR2-genpolymorfismen en het effect ervan op genexpressie bij patiënten met AgP

Verschillen in genstructuur of niet-genetische factoren zoals voeding/omgevingsfactoren kunnen het functionele genproduct veranderen: mRNA/eiwit, die een cruciale rol spelen in het immuunsysteem. Dit kan leiden tot het ontwikkelen van defecte immuunresponsen, verergering van de huidige ontsteking en verhoogde gevoeligheid van de gastheer voor ontstekingsziekten. Monocytenfuncties kunnen van cruciaal belang zijn om individuen vatbaar te maken voor parodontitis. Evenzo rapporteerden Garrison en Nichols (1989) dat het fenotype van hyperinflammatoire monocyten deterministisch kan zijn bij parodontale vernietiging. Om deze reden kan regulatie van MCP-1- en CCR2-expressie, die een essentiële rol spelen in het afweersysteem, een cruciale stap zijn voor het beheersen van ontstekingsziekten en parodontitis.

Vanwege de complexe genetische aard van parodontitis, veronderstelden we dat genpolymorfismen van MCP-1 en CCR2 geassocieerd zouden kunnen zijn met AgP en de productie van functionele eiwitten zouden kunnen veranderen, waardoor de vatbaarheid zou kunnen worden beïnvloed. Daarom was het primaire doel van deze studie het schatten van de genetische impact van MCP-1 en zijn receptor CCR2-polymorfismen op AgP-patiënten onder Turkse individuen en de secundaire uitkomst was of MCP-1-genotype de mRNA-niveaus van PBML beïnvloedt.

Een totaal van 215 Turkse proefpersonen uit binnen-Anatolië, waaronder 108 agressieve parodontitis (AgP) en 107 leeftijd, geslacht en etnisch gematchte parodontaal gezonde (H) controles werden gerekruteerd in deze cross-sectionele case-control studie. De controlegroep bestond uit parodontaal gezonde vrijwilligers van het personeel en andere proefpersonen die verwezen naar de School of Dentistry. De diagnose van proefpersonen werd vastgesteld op basis van klinisch en radiografisch onderzoek. Parodontaal H-controlegroep (n:107) had <3 mm sondediepte (PD), <2 gingivale index (GI) en geen tekenen van verlies van interproximale hechting en een voorgeschiedenis van parodontitis. Patiënten met AgP (n:108) werden gediagnosticeerd door de International World Workshop for a Classification of Parodontal Diseases and Conditions uit 1999. De AgP-groep omvatte personen met de diagnose gelokaliseerde AgP (LAgP) of gegeneraliseerde AgP (GAgP) die verder gezond waren. Parodontaal aanhechtingsverlies ≥4 mm met niet meer dan twee blijvende tanden, anders dan de eerste kiezen en snijtanden, werd gediagnosticeerd met LAgP (n: 43); patiënten met aantasting van ten minste drie tanden, anders dan de eerste kiezen en snijtanden met een aanhechtingsverlies ≥ 4 mm, werden gediagnosticeerd met GAgP (n: 65). Genomisch DNA werd geïsoleerd uit een perifeer bloedmonster verkregen van elke proefpersoon. Genpolymorfismen van MCP-1-2518 A/G en CCR2-190 G/A werden geanalyseerd door middel van een standaard polymerase kettingreactie-restrictie fragmentlengte polymorfisme (PCR-RFLP) assay. Genexpressieniveaus werden gekwantificeerd in perifere bloedleukocyten van 25 AgP- en 15 parodontale H-controles door middel van kwantitatieve real-time PCR. Threshold cycles (Ct)-waarden verkregen uit de RT-PCR-analyse op basis van SYBR Green-detectie en gegevens werden genormaliseerd via ACt.

De steekproefomvang werd voorafgaand aan de studie bepaald door middel van poweranalyse. Volgens dit; een verwacht verschil van 20% in allelfrequenties met 80% vermogen en een betrouwbaarheidsinterval van 95% werd berekend dat er minimaal 102 patiënten nodig waren in elke groep met een significantieniveau van 0,05. ( ⃰ G. Vermogen: 3.1.2). Bij het vergelijken van de numerieke kenmerken tussen H- en AgP-groepen, niet-parametrische Mann-Whitney U-test; tussen H-, LAgP- en GAgP-groepen werd vervolgens Kruskal Wallis met Bonferroni-correctie berekend.

Afwijkingen van het Hardy-Weinberg-evenwicht werden beoordeeld in de H- en AgP-groepen op basis van de genotypeverdeling voor MCP-1-2518 en CCR2-190 met behulp van een chikwadraattest. De verschillen in genotype en allelfrequenties tussen groepen werden ook gedetecteerd door de chikwadraattest. We gebruikten onafhankelijke steekproeven t-test voor vergelijking van genexpressieniveaus tussen groepen en eenrichtings-ANOVA werd gebruikt om het effect van MCP-1-2518-genotype op genexpressie te bepalen, op basis van log-getransformeerde gegevens. Significantieniveau was P = 0,05.