Frequência dos polimorfismos dos genes MCP-1 e CCR2 e seu efeito na expressão gênica em pacientes com AgP

Diferenças na estrutura do gene ou fatores não genéticos, como nutrição/fatores ambientais, podem alterar o produto gênico funcional: mRNA/proteína que desempenham papéis cruciais no sistema imunológico. Isso pode levar ao desenvolvimento de respostas imunes defeituosas, exacerbação da inflamação atual e aumento da suscetibilidade do hospedeiro a doenças inflamatórias. As funções dos monócitos podem ser críticas no que diz respeito a tornar os indivíduos suscetíveis à periodontite. Da mesma forma, Garrison e Nichols (1989) relataram que o fenótipo de monócitos hiperinflamatórios pode ser determinístico na destruição periodontal. Por esta razão, a regulação da expressão de MCP-1 e CCR2, que têm um papel essencial no sistema de defesa, pode ser um passo crucial para o manejo de doenças inflamatórias, bem como da periodontite.

Devido à natureza genética complexa da doença periodontal, levantamos a hipótese de que os polimorfismos dos genes MCP-1 e CCR2 poderiam estar associados ao AgP e alterar a produção de proteínas funcionais, como resultado, influenciar a suscetibilidade. Portanto, o objetivo principal deste estudo foi estimar o impacto genético de MCP-1 e seus polimorfismos de receptor CCR2 em pacientes AgP entre indivíduos turcos e o resultado secundário foi se o genótipo MCP-1 afeta os níveis de mRNA de PBML.

Um total de 215 indivíduos turcos do interior da Anatólia, incluindo 108 periodontite agressiva (AgP) e 107 controles periodontais saudáveis ​​(H) pareados por idade, sexo e etnia, foram recrutados neste estudo de caso-controle transversal. O grupo controle incluiu voluntários periodontais saudáveis ​​da equipe e outros sujeitos referentes à Faculdade de Odontologia. O diagnóstico dos indivíduos foi estabelecido com base no exame clínico e radiográfico. Periodontalmente, o grupo controle H (n:107) tinha <3mm de profundidade de sondagem (PD), <2 índice gengival (GI) e nenhum sinal de perda de inserção interproximal e história de doença periodontal. Pacientes com AgP (n:108) foram diagnosticados pelo International World Workshop for a Classification of Periodontal Diseases and Conditions de 1999. O grupo AgP incluiu indivíduos diagnosticados com AgP localizada (LAgP) ou AgP generalizada (GAgP) que eram saudáveis. Perda de inserção periodontal ≥4 mm não envolvendo mais de dois dentes permanentes, além dos primeiros molares e incisivos foram diagnosticados com LAgP (n: 43); pacientes com envolvimento de pelo menos três dentes, além dos primeiros molares e incisivos com perda de inserção ≥4 mm foram diagnosticados com GAgP (n: 65). O DNA genômico foi isolado de uma amostra de sangue periférico obtida de cada indivíduo. Os polimorfismos gênicos de MCP-1 -2518 A/G e CCR2 -190 G/A foram analisados ​​por um ensaio padrão de polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição de reação em cadeia da polimerase (PCR-RFLP). Os níveis de expressão gênica foram quantificados em leucócitos do sangue periférico de 25 AgP e 15 controles periodontais H por PCR quantitativo em tempo real. Os valores dos ciclos limiares (Ct ) obtidos a partir da análise RT-PCR com base na detecção SYBR Green e os dados foram normalizados via ΔC t .

O tamanho da amostra foi determinado por análise de poder antes do estudo. De acordo com isso; uma diferença esperada de 20% nas frequências alélicas com poder de 80% e intervalo de confiança de % 95 foi calculado que um mínimo de 102 pacientes eram necessários em cada grupo com um nível de significância de 0,05. ( ⃰ G. Potência: 3.1.2). Na comparação das características numéricas entre os grupos H e AgP, teste não paramétrico U de Mann-Whitney; entre os grupos H, LAgP e GAgP, então Kruskal Wallis com correção de Bonferroni foram calculados.

Desvios do equilíbrio de Hardy-Weinberg foram avaliados nos grupos H e AgP com base na distribuição de genótipos para MCP-1 -2518 e CCR2 -190 usando um teste qui-quadrado. As diferenças nas frequências genotípicas e alélicas entre os grupos também foram detectadas pelo teste qui-quadrado. Usamos o teste t de amostras independentes para comparação dos níveis de expressão gênica entre os grupos e ANOVA de uma via foi usada para determinar o efeito do genótipo MCP-1 -2518 na expressão gênica, com base nos dados transformados em log. O nível de significância foi P = 0,05.