Frekvence polymorfismů genů MCP-1 a CCR2 a jejich vliv na genovou expresi u pacientů s AgP

Rozdíly ve struktuře genu nebo negenetické faktory, jako jsou nutriční/environmentální faktory, mohou změnit funkční genový produkt: mRNA/protein, který hraje zásadní roli v imunitním systému. To může vést k rozvoji defektních imunitních reakcí, exacerbaci současného zánětu a zvýšené náchylnosti hostitele k zánětlivým onemocněním. Funkce monocytů mohou být kritické, pokud jde o získání jedinců náchylných k paradentóze. Podobně Garrison a Nichols (1989) uvedli, že hyperzánětlivý fenotyp monocytů může být deterministický při destrukci parodontu. Z tohoto důvodu může být regulace exprese MCP-1 a CCR2, které mají zásadní roli v obranném systému, zásadním krokem při zvládání zánětlivých onemocnění i parodontitidy.

Vzhledem ke komplexní genetické povaze periodontálního onemocnění jsme předpokládali, že genové polymorfismy MCP-1 a CCR2 by mohly být spojeny s AgP a mohly by změnit produkci funkčních proteinů, v důsledku čehož by mohly ovlivnit citlivost. Primárním cílem této studie tedy bylo odhadnout genetický dopad MCP-1 a jeho receptorových CCR2 polymorfismů na AgP pacienty mezi tureckými jednotlivci a sekundárním výsledkem bylo, zda genotyp MCP-1 ovlivňuje hladiny mRNA PBML.

Do této průřezové případové kontrolní studie bylo přijato celkem 215 tureckých subjektů z vnitřní Anatolie, včetně 108 agresivní parodontitidy (AgP) a 107 věkově, genderově a etnicky odpovídajících periodontálně zdravých (H) kontrol. Kontrolní skupina zahrnovala periodontálně zdravé dobrovolníky z řad zaměstnanců a dalších subjektů spadajících do školy zubního lékařství. Diagnóza subjektů byla stanovena na základě klinického a radiografického vyšetření. Periodontálně H kontrolní skupina (n:107) měla <3mm hloubku sondy (PD), <2 gingivální index (GI) a žádné známky ztráty interproximálního úponu a anamnézu periodontálního onemocnění. Pacienti s AgP (n:108) byli diagnostikováni na Mezinárodním světovém workshopu pro klasifikaci parodontálních onemocnění a stavů v roce 1999. Skupina AgP zahrnovala jedince s diagnózou lokalizovaného AgP (LAgP) nebo generalizovaného AgP (GAgP), kteří byli jinak zdraví. Ztráta parodontálního úponu ≥4 mm nezahrnující více než dva stálé zuby, jiné než první stoličky a řezáky byly diagnostikovány s LAgP (n: 43); pacientům s postižením alespoň tří zubů jiných než prvních molárů a řezáků se ztrátou úponu ≥4 mm byla diagnostikována GAgP (n: 65). Ze vzorku periferní krve získaného od každého subjektu byla izolována genomová DNA. Genové polymorfismy MCP-1 -2518 A/G a CCR2 -190 G/A byly analyzovány standardním testem polymorfismu délky fragmentu restrikční polymerázové řetězové reakce (PCR-RFLP). Hladiny genové exprese byly kvantifikovány v leukocytech periferní krve z 25 AgP a 15 periodontálně H kontrol pomocí kvantitativní PCR v reálném čase. Hodnoty prahových cyklů (Ct) získané z analýzy RT-PCR na základě detekce SYBR Green a dat byly normalizovány prostřednictvím ACt.

Velikost vzorku byla určena analýzou síly před studií. Podle tohoto; při očekávaném rozdílu 20 % ve frekvencích alel s 80 % silou a % 95 intervalem spolehlivosti bylo vypočteno, že v každé skupině bylo zapotřebí minimálně 102 pacientů s hladinou významnosti 0,05. ( ⃰ G. Výkon: 3.1.2). Při porovnávání numerických charakteristik mezi skupinami H a AgP, neparametrický Mann-Whitney U test; mezi skupinami H, LAgP a GAgP pak byly vypočteny Kruskal Wallis s Bonferroniho korekcí.

Odchylky od Hardy-Weinbergovy rovnováhy byly hodnoceny ve skupinách H a AgP na základě distribuce genotypů pro MCP-1 -2518 a CCR2 -190 pomocí testu chí-kvadrát. Rozdíly v genotypu a četnosti alel mezi skupinami byly také detekovány chí-kvadrát testem. Použili jsme t-test nezávislých vzorků pro srovnání úrovní genové exprese mezi skupinami a jednosměrná ANOVA byla použita ke stanovení účinku genotypu MCP-1 -2518 na genovou expresi na základě log-transformovaných dat. Hladina významnosti byla P = 0,05.