Częstotliwość polimorfizmów genów MCP-1 i CCR2 oraz ich wpływ na ekspresję genów u pacjentów z AgP

Różnice w strukturze genu lub czynniki niegenetyczne, takie jak czynniki żywieniowe/środowiskowe, mogą zmienić funkcjonalny produkt genu: mRNA/białko, które odgrywają kluczową rolę w układzie odpornościowym. Może to prowadzić do rozwoju wadliwych odpowiedzi immunologicznych, zaostrzenia obecnego stanu zapalnego i zwiększonej podatności gospodarza na choroby zapalne. Funkcje monocytów mogą mieć kluczowe znaczenie dla podatności osób na zapalenie przyzębia. Podobnie Garrison i Nichols (1989) stwierdzili, że fenotyp hiperzapalnych monocytów może być deterministyczny w destrukcji przyzębia. Z tego powodu regulacja ekspresji MCP-1 i CCR2, które odgrywają istotną rolę w systemie obronnym, może być kluczowym krokiem w leczeniu chorób zapalnych, a także zapalenia przyzębia.

Ze względu na złożoną naturę genetyczną chorób przyzębia postawiliśmy hipotezę, że polimorfizmy genów MCP-1 i CCR2 mogą być związane z AgP i mogą zmieniać produkcję białek funkcjonalnych, w rezultacie mogą wpływać na podatność. Dlatego głównym celem tego badania było oszacowanie wpływu genetycznego MCP-1 i polimorfizmów jego receptora CCR2 na pacjentów z AgP wśród osób tureckich, a drugorzędnym wynikiem było to, czy genotyp MCP-1 wpływa na poziomy mRNA PBML.

W tym przekrojowym badaniu kliniczno-kontrolnym zrekrutowano łącznie 215 tureckich pacjentów z wewnętrznej Anatolii, w tym 108 osób z agresywnym zapaleniem przyzębia (AgP) i 107 osób z grupy kontrolnej zdrowych przyzębia (H) dobranych pod względem wieku, płci i pochodzenia etnicznego. Grupę kontrolną stanowili zdrowi pod względem przyzębia ochotnicy z personelu i innych podmiotów związanych ze Szkołą Stomatologii. Rozpoznanie badanych ustalono na podstawie badania klinicznego i radiologicznego. Grupa kontrolna periodontologiczna H (n:107) miała głębokość sondowania (PD) <3 mm, wskaźnik dziąseł (GI) <2 i brak oznak utraty przyczepu międzyzębowego oraz choroby przyzębia w wywiadzie. Pacjenci z AgP (n:108) zostali zdiagnozowani podczas Międzynarodowych Światowych Warsztatów Klasyfikacji Chorób Przyzębia w 1999 roku. Grupa AgP obejmowała osoby, u których zdiagnozowano zlokalizowaną AgP (LAgP) lub uogólnioną AgP (GAgP), które poza tym były zdrowe. Utratę przyczepu przyzębia ≥4 mm, nie obejmującą więcej niż dwóch zębów stałych, innych niż pierwsze zęby trzonowe i siekacze, rozpoznano jako LAgP (n: 43); u pacjentów z zajęciem co najmniej trzech zębów innych niż pierwsze zęby trzonowe i siekacze z utratą przyczepu ≥4 mm zdiagnozowano GAgP (n: 65) DNA genomowe wyizolowano z próbki krwi obwodowej pobranej od każdego pacjenta. Polimorfizmy genów MCP-1-2518 A/G i CCR2-190 G/A analizowano za pomocą standardowej reakcji łańcuchowej polimerazy z polimorfizmem długości fragmentów restrykcyjnych (PCR-RFLP). Poziomy ekspresji genów określono ilościowo w leukocytach krwi obwodowej z 25 AgP i 15 kontroli przyzębia H za pomocą ilościowego PCR w czasie rzeczywistym. Wartości cykli progowych (Ct) otrzymano z analizy RT-PCR w oparciu o detekcję SYBR Green i dane znormalizowano za pomocą ∆Ct.

Wielkość próby określono na podstawie analizy mocy przed badaniem. Według tego; oczekiwana różnica 20% w częstościach alleli z mocą 80% i przedziałem ufności % 95 obliczono, że w każdej grupie potrzebnych było minimum 102 pacjentów z poziomem istotności 0,05. ( ⃰ Moc G.: 3.1.2). Porównując cechy liczbowe między grupami H i AgP, nieparametryczny test U Manna-Whitneya; między grupami H, LAgP i GAgP następnie obliczono Kruskala Wallisa z poprawką Bonferroniego.

Odchylenia od równowagi Hardy'ego-Weinberga oceniano w grupach H i AgP na podstawie rozkładu genotypów dla MCP-1 -2518 i CCR2 -190 za pomocą testu chi-kwadrat. Różnice w częstościach genotypów i alleli między grupami wykryto również za pomocą testu chi-kwadrat. Zastosowaliśmy test t niezależnych próbek do porównania poziomów ekspresji genów między grupami i zastosowano jednokierunkową ANOVA do określenia wpływu genotypu MCP-1 -2518 na ekspresję genów, w oparciu o dane przekształcone logarytmicznie. Poziom istotności wynosił P = 0,05.