Frequenza dei polimorfismi del gene MCP-1 e CCR2 e suo effetto sull'espressione genica nei pazienti con AgP

Differenze nella struttura del gene o fattori non genetici come fattori nutrizionali/ambientali possono alterare il prodotto genico funzionale: mRNA/proteina che svolgono ruoli cruciali nel sistema immunitario. Ciò può portare allo sviluppo di risposte immunitarie difettose, esacerbazione dell'infiammazione in corso e aumento della suscettibilità dell'ospite alle malattie infiammatorie. Le funzioni dei monociti possono essere fondamentali per quanto riguarda la predisposizione delle persone alla parodontite. Allo stesso modo Garrison e Nichols (1989) hanno riportato che il fenotipo monocitario iper-infiammatorio può essere deterministico nella distruzione parodontale. Per questo motivo, la regolazione dell'espressione di MCP-1 e CCR2, che hanno un ruolo essenziale nel sistema di difesa, può essere un passaggio cruciale per la gestione delle malattie infiammatorie e della parodontite.

A causa della complessa natura genetica della malattia parodontale, abbiamo ipotizzato che i polimorfismi genici di MCP-1 e CCR2 potrebbero essere associati con AgP e potrebbero alterare la produzione di proteine ​​funzionali, di conseguenza potrebbero influenzare la suscettibilità. Pertanto, lo scopo principale di questo studio era stimare l'impatto genetico dell'MCP-1 e dei suoi polimorfismi del recettore CCR2 sui pazienti con AgP tra gli individui turchi e l'esito secondario era se il genotipo MCP-1 influenzasse i livelli di mRNA di PBML.

In questo studio caso-controllo trasversale sono stati reclutati un totale di 215 soggetti turchi dell'Anatolia interna, inclusi 108 controlli parodontali aggressivi (AgP) e 107 controlli per età, sesso ed etnia parodontalmente sani (H) corrispondenti. Il gruppo di controllo comprendeva volontari parodontalmente sani dello staff e altri soggetti facenti capo alla Scuola di Odontoiatria. La diagnosi dei soggetti è stata stabilita sulla base dell'esame clinico e radiografico. Il gruppo di controllo H parodontale (n:107) aveva una profondità di sondaggio (PD) <3 mm, un indice gengivale (GI) <2 e nessun segno di perdita di attacco interprossimale e una storia di malattia parodontale. I pazienti con AgP (n:108) sono stati diagnosticati dall'International World Workshop for a Classification of Periodontal Diseases and Conditions del 1999. Il gruppo AgP includeva individui con diagnosi di AgP localizzata (LAgP) o generalizzata (GAgP) che erano altrimenti sani. La perdita di attacco parodontale ≥4 mm che non coinvolgeva più di due denti permanenti, diversi dai primi molari e dagli incisivi, è stata diagnosticata con LAgP (n: 43); ai pazienti con coinvolgimento di almeno tre denti, diversi dai primi molari e dagli incisivi con una perdita di attacco ≥4 mm è stata diagnosticata la GAgP (n: 65). Il DNA genomico è stato isolato da un campione di sangue periferico ottenuto da ciascun soggetto. I polimorfismi genici di MCP-1 -2518 A/G e CCR2 -190 G/A sono stati analizzati mediante un'analisi standard del polimorfismo della lunghezza del frammento di reazione a catena della polimerasi (PCR-RFLP). I livelli di espressione genica sono stati quantificati nei leucociti del sangue periferico da 25 controlli AgP e 15 parodontalmente H mediante PCR quantitativa in tempo reale. I valori dei cicli di soglia (Ct) ottenuti dall'analisi RT-PCR basata sul rilevamento SYBR Green e i dati sono stati normalizzati tramite ΔCt.

La dimensione del campione è stata determinata mediante analisi di potenza prima dello studio. Secondo questo; una differenza prevista del 20% nelle frequenze alleliche con una potenza dell'80% e un intervallo di confidenza del 95% è stato calcolato che erano necessari almeno 102 pazienti in ciascun gruppo con un livello di significatività di 0,05. ( ⃰ G. Potenza: 3.1.2). Quando si confrontano le caratteristiche numeriche tra i gruppi H e AgP, test U di Mann-Whitney non parametrico; tra i gruppi H, LAgP e GAgP sono stati calcolati Kruskal Wallis con correzione di Bonferroni.

Le deviazioni dall'equilibrio di Hardy-Weinberg sono state valutate nei gruppi H e AgP in base alla distribuzione del genotipo per MCP-1 -2518 e CCR2 -190 utilizzando un test del chi quadrato. Le differenze nelle frequenze genotipiche e alleliche tra i gruppi sono state rilevate anche dal test chi-quadrato. Abbiamo utilizzato t-test di campioni indipendenti per il confronto dei livelli di espressione genica tra gruppi e ANOVA unidirezionale è stato utilizzato per determinare l'effetto del genotipo MCP-1 -2518 sull'espressione genica, sulla base di dati log-trasformati. Il livello di significatività era P = 0,05.