Karakterisering van HIV-1-reservoirs bij HIV-1 niet-B-geïnfecteerde adolescenten met ART in Kameroen (AVIR)

Titel: Karakterisering van virale reservoirs onder met HIV-1 niet-B verticaal geïnfecteerde adolescenten die antiretrovirale therapie krijgen in Kameroen.

Acroniem: AVIR-studie, Adolescent viral reservoir

Belang en relevantie Sub-Sahara-Afrika (SSA) wordt onevenredig getroffen door HIV/AIDS, met bijna 70% van de mondiale epidemieën. Met de hoogste last van hiv-infecties bij kinderen worden ongeveer negen op de tien kinderen met hiv aangetroffen in de SSA-regio(1, 2). Adolescenten en jongeren vertegenwoordigen wereldwijd een groeiend deel van de mensen met HIV. In 2019 ongeveer 1,7 miljoen [1,1 miljoen-2,4 miljoen] adolescenten tussen de 10 en 19 jaar wereldwijd leven met HIV, wat neerkomt op ongeveer 5% van alle mensen met HIV, en ongeveer 1,5 miljoen [1,0 - 2,1 miljoen] of 88% van de HIV-geïnfecteerde adolescenten woont in SSA. Alleen al in 2019 raakten 460.000 [260.000-680.000] jongeren tussen de 10 en 24 jaar nieuw besmet met HIV, van wie 170.000 [53.000-340.000] adolescenten tussen de 10 en 19 jaar waren. Om dit nog verder te verergeren geven de meest recente gegevens aan dat slechts 27% van de adolescente meisjes en 16% van de adolescente jongens tussen 15 en 19 jaar in Oostelijk en Zuidelijk Afrika – de regio die het meest getroffen is door HIV – de afgelopen twaalf maanden op HIV is getest en ontvangen het resultaat van de laatste test. De testpercentages in West- en Centraal-Afrika en Zuid-Azië zijn zelfs nog lager. Als de huidige trends zich voortzetten, zullen de komende jaren honderdduizenden mensen HIV-positief worden, en zonder hun status te kennen, zullen adolescenten een levensreddende behandeling mislopen. Bovendien groeit een grote populatie kinderen die de afgelopen tien jaar perinataal met HIV zijn geïnfecteerd, op tot de adolescentie (3). Van de naar schatting 690.000 mensen die in 2019 stierven aan AIDS-gerelateerde ziekten, waren 110.000 (of ongeveer 16%) kinderen onder de 20 jaar. (UNICEF mondiale en regionale trends, juli 2020).

Met de komst en schaalbaarheid van antiretrovirale therapie (ART) is er een wereldwijde afname van het aantal AIDS-gerelateerde sterfgevallen. Eind 2019 hadden 25,4 miljoen mensen toegang tot antiretrovirale therapie, wat neerkomt op 67% van alle mensen met hiv. Slechts 53% van de kinderen met hiv ontving echter ART. Interessant is dat ongeveer 94% van alle kinderen die ART krijgen, afkomstig zijn uit SSA (4). In deze context van voortdurend nieuwe HIV-infecties bij kinderen en de toenemende dekking in pediatrische ART zal het aantal kinderen met HIV toenemen, wat erop wijst dat de kans groter is dat zij de adolescentieleeftijd en zelfs de volwassenheid bereiken als de behandelingsregimes volledig effectief blijven in het beheersen van HIV-infecties (3, 4). ADLHIV vormt daarom een ​​HIV-populatie met toenemende gezondheidsproblemen en met zeer beperkte bevindingen voor generaliseerbare beste praktijken die specifiek zijn voor deze doelgroep, vooral in SSA.

Net als verschillende West- en Centraal-Afrikaanse landen wordt Kameroen nog steeds geconfronteerd met een algemene hiv-epidemiologie (prevalentie van 2,7%) (5), met een hogere prevalentie onder zwangere vrouwen (5,7%) en aan hiv blootgestelde zuigelingen/kinderen (5,8% [958/16.638 ] positiviteit bij de eerste PCR en 15% aan het einde van de PMTCT-cascade) (6). Vanaf juni 2018 bedroeg de nationale dekking van ART 51,5% (281.083), waaronder 12.362 kinderen onder de 15 jaar (6). Met betrekking tot de respons op ART in Kameroen rapporteerden we een totaalpercentage van virale onderdrukking van 79,4%, met aanzienlijke verschillen tussen de leeftijdscategorieën: 81,1% bij volwassenen, 75,6% bij kinderen en slechts 53,3% bij adolescenten in de leeftijd van 10-19 jaar (7). Net als bij UNAIDS-rapporten vertegenwoordigen adolescenten met HIV (ADLHIV) de meest kwetsbare en onderbedeelde bevolking als reactie op de epidemieën(1, 5). Voor een veiligere groei naar volwassenheid is het nodig om deze populatie prioriteit te geven bij het zoeken naar innovatieve behandelstrategieën die hun welzijn en hun bijdrage aan de ontwikkeling van SSA garanderen.

Ondanks de onbetwiste voordelen van ART zijn er beperkingen aan de huidige behandelstrategieën. Merk op dat het levenslange karakter van de huidige ART voor de meeste patiënten gepaard gaat met uitdagingen op het gebied van therapietrouw, dat aan ART toegeschreven toxiciteiten en aanhoudende immuundysfunctie aanzienlijke gezondheidsproblemen veroorzaken, en dat de resistentie tegen HIV-geneesmiddelen (HIVDR) toeneemt, vooral in de SSA-landen waar de meeste ART-ervaringen voorkomen. patiënten leven (8). Er bestaat een dreiging van een opkomende nieuwe HIV-epidemie, veroorzaakt door HIVDR en bestaande antiretrovirale middelen. Deze uitdagingen gelden vooral voor pediatrische populaties als gevolg van beperkte ART-opties, slechte medicijnformuleringen en toenemende gevallen van niet-naleving naarmate ze dichter bij de adolescentie komen. Deze uitdagingen vragen om benaderingen van (functionele) genezing of remissie van HIV, vooral voor de meest kwetsbare bevolkingsgroepen (d.w.z. ADLHIV) (7, 9).

De concepten die aan het project ten grondslag liggen, waaronder ideeën, modellen en veronderstellingen, zijn gericht op het bereiken van virale remissie bij afwezigheid van antiretrovirale therapie (ART). De ontwikkeling van een geneesmiddel tegen HIV-1 blijft een uitdaging vanwege de latente reservoirs. Het HIV-1 Latent Reservoir (LR) kan worden gedefinieerd als de fractie cellen die transcriptioneel stil proviraal DNA herbergt en na activering in staat zijn infectieuze virionen te produceren(10). CD4T-cellen in rustgeheugen zijn de primaire gastheer van de LR, maar HIV-1-infectie in deze cellen is inefficiënt vanwege hun lage co-receptorexpressie en inherente beperkingen voor omgekeerde transcriptie (11, 12). Niettemin zijn er aanwijzingen dat HIV-1 rustende CD4T-cellen rechtstreeks of via overdracht van cel naar cel kan infecteren, hoewel infectie in deze cellen gepaard gaat met langzamere replicatiekinetiek (13). Als alternatief wordt latentie tot stand gebracht wanneer een subset van geïnfecteerde, geactiveerde CD4T-cellen terugkeert naar een rustend geheugenfenotype, waardoor de virale genexpressie effectief tot zwijgen wordt gebracht terwijl het provirale DNA op de lange termijn behouden blijft (14). Het provirus wordt in deze cellen in een rusttoestand gehouden via gastheerfactoren zoals epigenetische onderdrukking, uitputting van transcriptiefactoren zoals NF-KB en transcriptionele interferentie als gevolg van integratie in tot expressie gebrachte genen, nader besproken (15). De virale rebound van de LR na stopzetting van de ART is snel, wat leidt tot detecteerbare viremie binnen enkele weken na onderbreking van de therapie (16). Bovendien is het vroeg in de infectie starten van ART niet voldoende om de vorming van de LR te stoppen, wat erop wijst dat de LR vroeg wordt gevestigd en verspreid (Chun et al., 1998; Whitney et al., 2014; Colby et al., 2018), zelfs als bij verticaal geïnfecteerde kinderen die kort na de geboorte met ART begonnen (17). Het latente reservoir is stabiel ondanks jaren van onderdrukkende ART en is de bron van rebound-viremie na onderbreking van de therapie. Latent geïnfecteerde cellen vormen daarom de belangrijkste barrière voor een HIV-1-genezing en zouden specifiek het doelwit moeten zijn van nieuwe behandelings- en uitroeiingsstrategieën.

De vooruitgang in de richting van de ontwikkeling van een functioneel of steriliserend geneesmiddel voor HIV-1 wordt aanzienlijk belemmerd door de aanwezigheid van LR. Momenteel zijn twee mensen genezen van een HIV-1-infectie, de zogenaamde Berlijnse en Londense patiënten, die sinds ze allogene stamceltransplantaties van CCR5-32/-32 donoren hebben gekregen, al meer dan 10 en 2 jaar consequent negatief zijn getest op virale rebound. jaar respectievelijk zonder ART (18). In deze gevallen was de geïnfecteerde celpool aanzienlijk uitgeput tijdens de conditionering voorafgaand aan de transplantatie en vervangen door donorcellen die resistent zijn tegen infectie met het R5-troop virus als gevolg van een grote deletie in de CCR5-coreceptor (19). Vanwege de relatieve schaarste aan CCR5 ?32/?32 donoren en de unieke omstandigheden die deze gevallen vooraf bepaalden, is dit soort genezing niet haalbaar voor wijdverbreid gebruik; het benadrukt echter wel het basisprincipe van HIV-1-genezing; het zwijgen opleggen of uitroeien van de HIV-1 LR (20). In de afgelopen tien jaar is het inzicht in waar en hoe HIV blijft bestaan ​​bij individuen die ART gebruiken aanzienlijk veranderd, met bewijs dat het virus in meerdere celtypen en weefselplaatsen blijft bestaan, en in zowel rustende als prolifererende, langlevende, latent geïnfecteerde cellen. In het kader van een onderdrukkende behandeling zouden nauwkeurige schattingen van het virale reservoir dus helpen bij het beter beheersen van de virale persistentie, wat op zijn beurt bestaande barrières voor het bereiken van genezing zou kunnen overwinnen(21).

Totaal HIV-DNA is een referentiebiomarker die zowel geïntegreerd als niet-geïntegreerd HIV-DNA omvat en het mondiale niveau van het virale reservoir weerspiegelt. Belangrijk is dat Buzon et al. rapporteerden een statistische correlatie tussen de tijd vanaf de HIV-infectie tot het begin van de behandeling en het totale HIV-DNA-niveau na 10 jaar ononderbroken behandeling in een cohort volwassenen die voor het eerst werden behandeld met een vroege infectie (22). Bij kinderen was het HIV-DNA-niveau aanzienlijk lager als de viruscontrole vóór de leeftijd van 1 jaar werd bereikt (23). In vergelijking met andere markers heeft totaal HIV-DNA het voordeel dat het gemakkelijk kan worden gekwantificeerd door gestandaardiseerde, gevoelige, real-time PCR, inclusief digitale druppel-PCR (ddPCR) (24).

Gegeneraliseerde immuunactivatie is een kenmerk van HIV-1-infectie. In deze toestand vertoont een verscheidenheid aan immuuncellen een toename in de expressie van activatie, proliferatie en apoptotische markers, cellulaire vernieuwing met afwijkende celcyclusregulatie, productie van pro-inflammatoire cytokines en verhoogde lymfoïde weefselfibrose (25). Immuunactivatie is sterk geassocieerd met de progressie van de HIV-1-ziekte; T-celactivatie, zoals gemeten aan de hand van de expressie van CD38 en HLA-DR, is bijvoorbeeld voorspellender voor de uitputting van CD4+T-cellen en een kortere overleving dan de virale lading in het plasma (26, 27). Bovendien voorspelt het niveau van immuunactivatie vroeg in de HIV-1-infectie, zoals gemeten aan de hand van CD8+T-celactivatie, het verlies van CD4+T-cellen onafhankelijk van de plasma-HIV-1 RNA-niveaus (28). Onderdrukking van de virale replicatie met effectieve antiretrovirale behandeling (ART) vermindert de immuunactivatie, maar zelfs effectieve ART-regimes zijn niet in staat de niveaus van immuunactivatie bij HIV-geïnfecteerde individuen te verlagen tot niveaus die worden gezien bij gezonde individuen (25). Met HIV geïnfecteerde kinderen worden, zelfs als ze met succes met ART worden behandeld, geconfronteerd met een leven lang verhoogde immuunactivatie. Het evalueren van de potentiële impact van chronische immuunactivatie en -ontsteking op het zich ontwikkelende immuunsysteem en op de ziekteresultaten bij HIV-infecties bij kinderen is dus van bijzonder belang. Recente onderzoeken hebben aangetoond dat immuunactivatie (HLA-DR, CD38) en uitputtingsmarkers (Tim-3, PD-1, Lag-3) sterk geassocieerd zijn met de reservoirgrootte bij met ART behandelde volwassenen. reservoir met vroege ART zou op gelijke wijze het niveau van immuunactivatie en de niet-AIDS 'verouderingsziekten' die gepaard gaan met aanhoudende immuunactivatie kunnen minimaliseren.

Er is beperkt bewijs voor het karakteriseren van HIV-reservoirs in de West- en Centraal-Afrikaanse regio, een geografische omgeving met de grootste variabiliteit in circulerende HIV-1- en HIV-2-stammen (29, 30). Kameroen, een zoönotisch epicentrum van HIV-1, herbergt bijvoorbeeld een zeer divers HIV-landschap, aangedreven door de CRF02_AG-recombinant, inclusief de meeste groep M (sub-)subtypen, een breed scala aan URF's en CRF's, en groep N, O-, P- en HIV-2-virussen(31-33). Het genereren van basisgegevens over het genotypische en kwantitatieve profiel van het virale reservoir over verschillende HIV-clades in een omgeving zoals Kameroen zou dus het ontwerp van optimale strategieën voor HIV-genezing kunnen informeren. Gezien de bovengenoemde kwetsbaarheid van adolescenten met verticale infectie en de beperkte kennis over virale reservoirs en immuunactivatie/ontstekingsreacties in deze populatie, zal het bewijsmateriaal dat op basis van dit doel is gegenereerd, zeer complementair zijn aan de huidige mondiale inspanningen. Dergelijk bewijsmateriaal, gegenereerd in een context van hoge co-infecties (34, 35), zou verschillende mechanismen van HIV-persistentie kunnen aantonen die ver verwijderd zijn van de mechanismen die in andere delen van de wereld worden gerapporteerd.

Voorbereidend werk:

In het kader van de lopende EDCTP READY-studie hebben we een cohort van 292 verticaal geïnfecteerde adolescenten (10-19 jaar) opgezet die ART kregen in Kameroen. In dit cohort rapporteerden we een percentage van 40% niet-detecteerbare virale last (<40 kopieën/ml) na een mediaan van 8 jaar ART, ongeveer 20% immunologisch falen (CD4<250 cellen/mm3) en minder dan 10% klinische mislukking (bijv. WHO-stadia III/IV) (36). Deze populatie biedt een unieke kans om de omvang en aard van het reservoir te begrijpen, de variabiliteit van de immuunrespons/cytokineprofilering, en het effect van het virale subtype, de behandelgeschiedenis (ART-regime en duur), genderverschillen en het therapietrouwniveau op de controle van viraal reservoir.

DOEL:

Het doel van deze studie is om HIV-reservoirs en hun variabiliteit te karakteriseren op basis van virologische en immunologische profielen van verticaal geïnfecteerde adolescenten die antiretrovirale therapie krijgen in Kameroen, en daardoor het begrip van virale reservoirs te verbeteren en nauwkeurige en betrouwbare gegevens te verschaffen voor onderzoek naar HIV-genezing.

Specifieke doelen:

In deze studie zullen we: 1- De genetische variabiliteit en geneesmiddelresistentie van HIV-1 in cellulaire reservoirs bepalen; 2- Karakteriseren van immuunactivatie/-ontsteking bij adolescenten die verticaal geïnfecteerd zijn met HIV-1; 3- Evalueer de grootte van het HIV-reservoir; 4- Evalueer het effect van antiretrovirale therapie en immuunrespons op het virale reservoirprofiel.

Materialen en methoden Onderzoeksopzet We zijn van plan een observationeel en vergelijkend onderzoek uit te voeren onder adolescenten die met HIV leven en ART ontvangen in Kameroen. Deelnemers zullen worden geselecteerd en ingeschreven uit een bestaand cohort van bijna 300 verticaal geïnfecteerde adolescenten die zijn gerekruteerd voor het EDCTP-READY-onderzoek.

Het hoofddoel van de EDCTP-READY-studie was het evalueren van de respons op de behandeling, de resistentie tegen geneesmiddelen en de variabiliteit van HIV-1 onder adolescenten die eerste- en tweedelijns antiretrovirale therapie kregen in Kameroen (7). In deze studie hebben we 296 hiv-+ adolescenten gerecruteerd en het genotypische profiel van hiv-1 in circulerend RNA vergeleken. Van de 30% (89/296) APHI ondervond virologisch falen (VL>1000 kopieën/ml).

Bemonsteringsmethode:

Er zullen bloedmonsters worden afgenomen van deelnemers aan het EDCTP-READY-onderzoek volgens de geschiktheidscriteria.

Geschiktheidscriteria:

Inclusiecriteria: Worden opgenomen in het onderzoek, HIV+ adolescenten van 10-19 jaar oud, verticaal geïnfecteerd, gebruiken ART al minstens 12 maanden, die hun schriftelijke toestemming geven en wiens wettelijke voogd schriftelijke volmacht geeft.

Niet-inclusiecriteria: komen niet in aanmerking voor inschrijving, HIV+ adolescent met onvolledige ART-geschiedenis, HBV/HCV- en malaria-co-infecties.

Uitsluitingscriteria: Elke deelnemer die besluit zich vrijelijk terug te trekken nadat hij toestemming heeft gegeven of niet in staat is een bloedmonster af te geven, wordt als uitgesloten van het onderzoek beschouwd.

Steekproefgrootte: De minimale steekproefomvang (N) van het onderzoek bedraagt ​​90 deelnemers, berekend op basis van de volgende formule: N=p (1-p) (Zα2/α2); N = 0,02(1-0,02) (1,962/0,052) = 30 per arm (arm-A: VL<40 kopieën/ml; arm-B: VL 40-999 kopieën/ml; arm-C: virale belasting ≥1000 kopieën/ml). P is de prevalentie van adolescenten met hiv in Kameroen, waarbij P=2% [3]; waarbij α het risico is, komt overeen met α = 5%; Zα is het kleine gat met Zα = 1,96.

NB: Een groep van 30 HIV-negatieve adolescenten zal dienen als controle voor immunologische profilering.

Alle deelnemers krijgen een nieuw identificatienummer toegewezen en de gegevens worden gecentraliseerd op een met een wachtwoord beveiligde computer in het International Reference Centre Chantal Biya (CIRCB) voor onderzoek naar de preventie en het beheer van HIV/AIDS.

Onderzoeksprocedures en variabelen Procedures en tijdlijnen Voor het voltooien van dit onderzoek zijn 18 maanden nodig: 3 maanden (maand 1-3) voor goedkeuring door administratie en ethische kwesties, 12 maanden (maanden 4 tot 15) voor inschrijving van deelnemers, bemonstering en laboratoriumanalyses, 3 maanden (maand 16 tot 18) voor gegevensverwerking en rapportage, zie Gantt-diagram voor meer details.

Op basis van de inclusiecriteria zullen uit het EDCTP-READY-onderzoek formulieren voor het rapporteren van gevallen van HIV+-adolescenten worden geselecteerd en zal er contact worden opgenomen met hun wettelijke voogd. Instemming en op proxy gebaseerde toestemming worden verkregen van respectievelijk de adolescent en de wettelijke voogd. Sociaal-demografische, klinische gegevens en ART-geschiedenis zullen opnieuw worden beoordeeld voor de periode tijdens deelname aan het EDCTP-READY-onderzoek. Vervolgens zullen 90 of meer HIV+ adolescenten [30 per arm (arm-A: VL<40 kopieën/ml; arm-B: VL 40-999 kopieën/ml; arm-C: virale belasting ≥1000 kopieën/ml)] worden geïncludeerd . Een groep van 30 HIV-negatieve adolescenten zal worden ingeschreven om als controle te dienen voor immunologische profilering. Intraveneus bloed (5 ml x 2) zal worden verzameld door een getrainde flebotomist voor laboratoriumanalyses, waaronder PBMC-isolatie, plasma- en buffy coat-isolatie, CD4/CD8-tellingen, plasmatische virale belasting (PVL), beoordeling van immuunactivatie/inflammatoire markers, HIV-RNA en HIV-DNA-genotypering, kwantificering van virale reservoirs.

HIV-negatieve deelnemers zullen worden gerekruteerd bij het CIRCB, deze instelling is sinds 2006 een referentiecentrum voor de behandeling van HIV-geïnfecteerde personen en is als zodanig een gerenommeerd referentiecentrum voor HIV-tests. Op basis van dit voordeel organiseert CIRCB gratis HIV/HBV/HCV-screeningstests voor verschillende instellingen en gemeenschappen per jaar. Daarom zal een soortgelijke gratis testcampagne worden georganiseerd in een nabijgelegen middelbare school en zal het huidige onderzoek worden gepresenteerd aan degenen die aan de inclusiecriteria voldoen. . Potentiële deelnemers worden samen met hun wettelijke voogd uitgenodigd bij CIRCB voor inschrijving.

Er worden slechts één keer monsters verzameld bij inschrijving, evenals alle relevante sociaal-demografische en klinische gegevens. De monsters worden dezelfde dag naar CIRCB vervoerd voor isolatie van PBMC's, DNA-, plasma- en buffy coat-isolatie, CD4/CD8-tellingen en beoordeling van activatie-/inflammatoire markers met behulp van flowcytometrie. Plasma zal worden verzameld en opgeslagen bij -80oC voor plasmatische virale belasting (PVL), genotypering, beoordeling van immuunactivatie/inflammatoire markers met behulp van ELISA-tests (of flowcytometrie). HIV-DNA zal vervolgens uit PBMC's worden geëxtraheerd en bij -80oC worden bewaard; HIV-DNA wordt elke drie maanden verzonden naar de afdeling experimentele geneeskunde van de Universiteit van Rome Tor Vergata, Rome, Italië, voor kwantificering van het HIV-virale reservoir (zie de samenwerkingsbrief in de bijlage).

Laboratoriumprocedures CD4/CD8-telling: CD4/CD8-metingen zullen worden bepaald met behulp van een flowcytometriemachine zoals eerder beschreven (37).

Plasma virale lading: De plasma virale lading zal worden bepaald met behulp van het m2000rt Abbott real-time systeem zoals eerder beschreven (38).

HIV-RNA-extractie: ARN zal uit plasmamonsters worden geëxtraheerd met behulp van de Qiamp virale RNA Mini Kit (Qiagen), zoals beschreven door de fabrikant.

Provirale DNA-extractie uit buffy coat: Proviraal DNA zal worden geëxtraheerd met behulp van de DNeasy bloed- en weefselextractiekit (Qiagen), zoals beschreven door de fabrikant.

Isolatie van PBMC's: PBMC's zullen worden geïsoleerd door dichtheidsgradiëntcentrifugatie met behulp van Ficoll met behulp van een intern protocol.

HIV-DNA-extractie uit PBMC's: HIV-DNA zal worden geëxtraheerd met behulp van de QIAmp DNA Mini Kit (Qiagen), zoals beschreven door de fabrikant.

Versterking en sequencing van HIV-1-genen: Sanger-sequencing voor het testen van de resistentie tegen HIV-1-geneesmiddelen zal worden uitgevoerd bij adolescenten die virologisch falen ervaren, volgens een intern protocol, zoals eerder beschreven door onze onderzoeksgroep(39). DNA-sequenties van reverse transcriptase zullen worden geanalyseerd op geneesmiddelresistentiemutaties met behulp van het algoritme voor genotypische resistentie-interpretatie van de Stanford University-database (www.stanford.edu).

Fylogenetische analyse: Fylogenetische bomen van buurlanden zullen worden gemaakt met behulp van MEGA-software (Kimura 2-parametermodel, 200 bootstrap-replicaties) en FigTree (40, 41).

Immuunprofilering: Zowel immuunactiverende/inflammatoire cytokines (IL-1, IL2,IL4, IL6, IL10, IL12 en TNF-alfa) zullen worden beoordeeld met behulp van commerciële ELISA-kits en flowcytometrie.

Kwantificering van HIV-virale reservoirs: virale reservoirs zullen worden gekwantificeerd met behulp van droplet digital PCR (ddPCR), zoals eerder beschreven. Merk op dat deze kwantificering zal worden uitgevoerd op de afdeling experimentele geneeskunde van de Universiteit van Rome Tor Vergata, Rome, Italië, zoals vermeld in de samenwerkingsbrief in de bijlage bij dit voorstel. Er zal een materiaaloverdracht en een overeenkomst voor het delen van gegevens worden ondertekend tussen CIRCB en UTV voordat het monster naar UTV wordt verzonden. Het is een intern protocol voor HIV-1 B-subtype en zal worden aangepast voor HIV-1 niet-B-subtypes die worden verwacht uit Kameroense monsters.

Data-analyse De tijdens het onderzoek verzamelde gegevens worden geanalyseerd met behulp van SPSS-software. Bijbehorende factoren zullen worden geëvalueerd met behulp van multivariate logistische regressie, met een schattingsbenadering voor het onbevooroordeelde effect van verschillende parameters. De gegevens worden als mediaan gerapporteerd. Er zullen niet-parametrische tests worden gebruikt voor gegevens die niet normaal verdeeld zijn; vergelijkingen van medianen tussen verschillende groepen (virologisch succes versus virologisch falen) zullen worden uitgevoerd met behulp van de U-Mann-Whitney-test. Er zullen correlaties worden gemaakt met de Spearman-test en p-waarden kleiner dan 0,05 zullen als statistisch significant worden beschouwd.

Ethische overwegingen Dit onderzoek zal worden uitgevoerd in overeenstemming met de verklaring van Helsinki over ethische principes voor medisch onderzoek waarbij menselijke proefpersonen betrokken zijn. Ethische goedkeuring zal worden verkregen van de Nationale Ethische Commissie van Kameroen voor onderzoek naar de menselijke gezondheid. Na een geïnformeerde kennisgeving over het onderzoek zal een schriftelijke volmacht worden verkregen van de wettelijke voogd, en zal er ook een schriftelijke toestemming worden verkregen van de deelnemende HIV+ adolescent, zonder enige dwang. Privacy en vertrouwelijkheid zullen worden gewaarborgd door het gebruik van unieke identificatiegegevens en een met een wachtwoord beveiligde database, en zullen alleen toegankelijk zijn voor geautoriseerd personeel. Deelnemers zijn vrij om het onderzoek op elk moment opzettelijk te verlaten, zonder enig effect op hun routinematige controle in de onderzoekskliniek. De aderlating zal niet-invasief zijn (venapunctie) en zal worden uitgevoerd door een opgeleide verpleegkundige.

Kwaliteitsverzekering:

Ons onderzoeksteam zal bestaan ​​uit een kwaliteitsborgingsfunctionaris die verantwoordelijk is voor alle SOP's voor het onderzoeksprotocol en die de bekwaamheidstesten en gegevensvalidatie gedurende het gehele onderzoek zal beheren.

Beheersing van potentiële risico's: De risico's voor de patiënten zijn minimaal, aangezien de enige procedure waaraan de vrijwilliger wordt onderworpen een venapunctie door een flebotomist of arts is. De venapunctie kan enigszins pijnlijk zijn, maar is vrijwel zonder risico op complicaties. De potentiële risico's voor proefpersonen, die zich waarschijnlijk niet zullen voordoen, kunnen bestaan ​​uit tijdelijke pijn, blauwe plekken op de plaats of een mogelijke (maar uiterst onwaarschijnlijke) infectie. Als dergelijke complicaties zich voordoen, krijgt de deelnemer medische spoedbehandeling.