A HIV-1 rezervoárok jellemzése HIV-1-vel nem fertőzött serdülőknél ART-ban Kamerunban (AVIR)

Cím: Vírustárolók jellemzése a HIV-1 nem B függőlegesen fertőzött serdülők körében, akik antiretrovirális terápiában részesülnek Kamerunban.

Betűszó: AVIR-study, Adolescent viral reservoir

Fontosság és jelentősége A Szaharától délre fekvő Afrikát (SSA) aránytalanul érinti a HIV/AIDS, a globális járványok közel 70%-a. A gyermekkori HIV-fertőzések legnagyobb terhe mellett minden 10 HIV-fertőzött gyermek közül körülbelül kilencet találtak az SSA régióban (1, 2). A serdülők és a fiatalok a HIV-fertőzöttek egyre nagyobb részét teszik ki világszerte. 2019-ben mintegy 1,7 millió [1,1 millió-2,4 millió] 10 és 19 év közötti serdülő élt HIV-fertőzött világszerte, ami az összes HIV-fertőzött ember körülbelül 5%-a, körülbelül 1,5 millió [1,0-2,1 millió] vagy a HIV-fertőzött serdülők 88%-a él SSA-ban. Csak 2019-ben 460 000 [260 000-680 000] 10 és 24 év közötti fiatal fertőződött meg újonnan HIV-vel, akik közül 170 000 [53 000-340 000] 10 és 119 év közötti serdülő volt. Mindezt tovább súlyosbítja, hogy a legfrissebb adatok azt mutatják, hogy Kelet- és Dél-Afrikában – a HIV által leginkább érintett régióban – a serdülő lányok 27%-át és a 15-19 éves serdülő fiúk 16%-át végezték el HIV-teszten az elmúlt 12 hónapban. az utolsó teszt eredménye. A tesztelési arány Nyugat- és Közép-Afrikában, valamint Dél-Ázsiában még alacsonyabb. Ha a jelenlegi tendenciák folytatódnak, az elkövetkező években több százezren válnak HIV-pozitívá, és állapotuk ismerete nélkül a serdülők kimaradnak az életmentő kezelésből. Ezenkívül az elmúlt évtizedben perinatálisan HIV-fertőzött gyermekek nagy populációja serdülőkorba nő (3). A becslések szerint 2019-ben 690 000 ember halt meg AIDS-szel összefüggő betegségekben, közülük 110 000 (körülbelül 16%) 20 év alatti gyermek volt. (UNICEF globális és regionális trendek, 2020. július).

Az antiretrovirális terápia (ART) megjelenésével és skálázhatóságával globálisan csökken az AIDS-szel összefüggő halálozások száma. 2019 végén 25,4 millió ember részesült antiretrovirális kezelésben, ami a HIV-fertőzöttek 67%-a. Azonban a HIV-fertőzött gyermekeknek csak 53%-a kapott ART-t. Érdekes módon az ART-ban részesülő gyermekek körülbelül 94%-a SSA-ból származik (4). A folyamatos új HIV-fertőzések és a gyermekkori ART növekvő lefedettsége mellett a HIV-fertőzött gyermekek száma növekedni fog, ami arra utal, hogy nagyobb valószínűséggel érik el a serdülőkort, sőt a felnőttkort is, ha a kezelési rendek továbbra is teljes mértékben hatékonyak maradnak a HIV-fertőzés ellenőrzésében (3, 4). Az ADLHIV tehát olyan HIV-populációt alkot, amely növekvő egészségügyi aggályokkal rendelkezik, és nagyon korlátozott számú megállapítással rendelkezik az erre a célcsoportra jellemző általánosítható legjobb gyakorlatokra vonatkozóan, különösen az SSA-ban.

Több nyugat- és közép-afrikai országhoz hasonlóan Kamerunban is általános HIV-járvány áll fenn (2,7%-os prevalencia) (5), nagyobb a prevalencia a terhes nők (5,7%) és a HIV-fertőzött csecsemők/gyermekek (5,8%) körében [958/16 638 ] pozitivitás az első PCR-nél és 15% a PMTCT kaszkád végén) (6). 2018 júniusában az ART országos lefedettsége 51,5% volt (281 083), amelybe 12 362 15 év alatti gyermek tartozik (6). Ami az ART-re adott választ illeti Kamerunban, általánosságban 79,4%-os vírusszuppressziós arányról számoltunk be, jelentős eltérésekkel a korosztályok között: 81,1% a felnőtteknél, 75,6% a gyermekeknél és csak 53,3% a 10-19 éves serdülőknél (7). Az UNAIDS-jelentésekhez hasonlóan a HIV-fertőzött (ADLHIV) serdülők a járványokra adott válaszként a legsebezhetőbb és legkevésbé ellátott populációt jelentik (1, 5). A felnőttkor felé vezető biztonságosabb növekedés érdekében ezt a populációt prioritásként kell kezelni az olyan innovatív kezelési stratégiák keresésében, amelyek biztosítják jólétüket és hozzájárulnak az SSA fejlődéséhez.

Az ART megkérdőjelezhetetlen előnyei ellenére a jelenlegi kezelési stratégiáknak vannak korlátai. Megjegyzendő, hogy a jelenlegi ART élethosszig tartó jellege a legtöbb beteg számára kihívásokkal jár az adherenciával, az ART-hoz kapcsolódó toxicitások és a tartós immunrendszeri zavarok jelentős egészségkárosodást okoznak, és a HIV-gyógyszer-rezisztencia (HIVDR) növekszik, főleg azokban az országokban, ahol a legtöbb ART-t tapasztalták. betegek élnek (8). Fennáll a veszélye egy új HIV-járvány kialakulásának, amelyet a HIVDR a meglévő antiretrovirális szerekre irányít. Ezek a kihívások különösen igazak a gyermekpopulációra a korlátozott ART lehetőségek, a rossz gyógyszerkészítmények és a serdülőkor felé haladva egyre gyakoribb a nem-adherencia. Ezek a kihívások megkövetelik a HIV (funkcionális) gyógyulásának vagy remissziójának megközelítését, különösen a legsebezhetőbb populációk (pl. ADLHIV) (7, 9).

A projektet alátámasztó koncepciók, beleértve az ötleteket és modelleket vagy feltételezéseket A HIV-1 remissziós vagy eradikációs stratégiáinak célja a vírus remisszió elérése antiretrovirális terápia (ART) hiányában. A HIV-1 gyógymód kifejlesztése továbbra is kihívást jelent a rejtett tartályok miatt. A HIV-1 látens rezervoár (LR) úgy definiálható, mint a transzkripciósan néma provirális DNS-t tartalmazó sejtek azon frakciója, amelyek aktiválást követően képesek fertőző virionokat termelni (10). A nyugalmi memória A CD4T sejtek az LR elsődleges gazdája, de ezekben a sejtekben a HIV-1 fertőzés nem hatékony, mivel alacsony a koreceptor expressziójuk, és a reverz transzkripciót korlátozzák (11, 12). Mindazonáltal bizonyíték van arra, hogy a HIV-1 képes megfertőzni a nyugvó CD4T sejteket közvetlenül vagy sejtről sejtre történő átvitel útján, bár ezekben a sejtekben a fertőzés lassabb replikációs kinetikával jár (13). Alternatív megoldásként a látenciát akkor állapítják meg, amikor a fertőzött, aktivált CD4T-sejtek egy részhalmaza visszaáll a nyugalmi memória fenotípusba, hatékonyan elnémítva a vírusgénexpressziót, miközben hosszú távon fenntartja a provirális DNS-t (14). A provírus nyugalmi állapotban marad ezekben a sejtekben olyan gazdafaktorokon keresztül, mint az epigenetikai szuppresszió, a transzkripciós faktorok, például az NF-κB kimerülése és az expresszált génekbe történő integráció miatti transzkripciós interferencia, amelyet részletesebben áttekintenek (15). A vírus visszapattanása az LR-ből az ART abbahagyását követően gyors, ami kimutatható virémiához vezet a terápia megszakítását követő heteken belül (16). Ezenkívül a fertőzés korai szakaszában az ART megkezdése nem elegendő az LR képződésének megállításához, ami arra utal, hogy az LR korán kialakul és terjed (Chun és mtsai, 1998; Whitney et al., 2014; Colby és mtsai, 2018), vertikálisan fertőzött gyermekeknél, akik nem sokkal a születés után kezdték meg az ART-t (17). A látens rezervoár az évekig tartó szuppresszív ART ellenére stabil, és a terápia megszakítását követően a rebound virémia forrása. Ezért a látensen fertőzött sejtek jelentik a HIV-1-gyógyulás fő akadályát, ezért új kezelési és felszámolási stratégiáknak kifejezetten célba kell venniük őket.

A HIV-1 funkcionális vagy sterilizáló gyógymódjának kifejlesztése felé tett előrehaladást jelentősen hátráltatta az LR jelenléte. Jelenleg két ember gyógyult meg a HIV-1 fertőzésből, az úgynevezett berlini és londoni betegek, akik a CCR5?32/32 donoroktól származó allogén őssejt-transzplantáció óta folyamatosan 10 és 2 év feletti vírusrebound-tesztet mutattak. év, illetve ART nélkül (18). Ezekben az esetekben a fertőzött sejtkészlet jelentősen kimerült a transzplantáció előtti kondicionálás során, és olyan donorsejtekkel helyettesítették, amelyek rezisztensek az R5-tropikus vírus fertőzésére a CCR5 koreceptor nagy deléciója miatt (19). A CCR5 α32/β32 donorok relatív kevéssége és az ilyen eseteket előre meghatározó egyedi körülmények miatt ez a fajta kúra nem alkalmazható széles körben, azonban hangsúlyozza a HIV-1 gyógyítás alapelvét; elhallgattatni vagy felszámolni a HIV-1 LR-t (20). Az elmúlt évtizedben annak megértése, hogy hol és hogyan marad fenn a HIV az ART-ban részesülő egyénekben, lényegesen átalakult annak bizonyítéka alapján, hogy a vírus több sejttípusban és szöveti helyen, valamint nyugalmi és burjánzó, hosszú életű látensen fertőzött sejtekben is megmarad. Így a szuppresszív kezelés keretében a vírustároló pontos becslése elősegítené a vírusperzisztencia jobb elsajátítását, ami viszont leküzdheti a gyógyulás elérésének meglévő akadályait (21).

A teljes HIV DNS referencia biomarker, amely integrált és nem integrált HIV DNS-t egyaránt tartalmaz, és tükrözi a vírustároló globális szintjét. Fontos, hogy Buzon et al. statisztikai összefüggésről számoltak be a HIV-fertőzéstől a kezelés megkezdéséig eltelt idő és a teljes HIV DNS-szint között 10 év folyamatos kezelés után a korai fertőzéssel először kezelt felnőttek csoportjában (22). Gyermekeknél a HIV DNS-szint jelentősen alacsonyabb volt, amikor a víruskontrollt 1 éves kor előtt érték el (23). Más markerekkel összehasonlítva a teljes HIV-DNS előnye, hogy egyszerű kvantifikálást végez standardizált, érzékeny, valós idejű PCR-rel, beleértve a digitális csepp-PCR-t (ddPCR) (24).

A generalizált immunaktiváció a HIV-1 fertőzés egyik jellemzője. Ebben az állapotban számos immunsejtben fokozódik az aktiváció, a proliferáció és az apoptotikus markerek expressziója, a sejtforgalom rendellenes sejtciklus-szabályozással, a gyulladást elősegítő citokinek termelődése és a limfoid szövetek megnövekedett fibrózisa (25). Az immunaktiváció erősen összefügg a HIV-1 betegség progressziójával; például a T-sejt-aktiváció, a CD38 és a HLA-DR expressziójával mérve, jobban megjósolja a CD4+T-sejtek kimerülését és rövidebb túlélést, mint a plazma vírusterhelése (26, 27). Ezen túlmenően, a HIV-1 fertőzés korai szakaszában az immunaktiváció CD8+T-sejtaktivációval mérve előrejelzi a CD4+T-sejtek elvesztését, függetlenül a plazma HIV-1 RNS szintjétől (28). A vírusreplikáció visszaszorítása hatékony antiretrovirális kezeléssel (ART) csökkenti az immunaktivációt, de még a hatékony ART-sémák sem képesek csökkenteni az immunaktiváció szintjét HIV-fertőzött egyénekben az egészséges egyéneknél tapasztalt szintre (25). A HIV-fertőzött gyermekek még akkor is, ha sikeresen kezelik őket ART-val, egy életen át megnövekedett immunaktivációval szembesülnek. Így különösen fontos a krónikus immunaktiváció és gyulladás potenciális hatásának értékelése a fejlődő immunrendszerre és a betegség kimenetelére gyermekkori HIV-fertőzésben. A legújabb vizsgálatok kimutatták, hogy az immunaktiváció (HLA-DR, CD38) és a kimerülési markerek (Tim-3, PD-1, Lag-3) erősen összefüggnek a tartály méretével ART-kezelt felnőtteknél, így várható, hogy a vírus minimálisra csökkentése A korai ART-val végzett tartály ugyanígy minimalizálhatja az immunaktiváció szintjét és a tartós immunaktivációval összefüggő nem AIDS-es „öregedési” betegségeket.

Korlátozott bizonyíték áll rendelkezésre a nyugat- és közép-afrikai régióban található HIV-rezervoárok jellemzésére, ahol a földrajzi környezetben a legnagyobb a variabilitás a keringő HIV-1 és HIV-2 törzsek között (29, 30). Például Kamerunban, a HIV-1 zoonózisos epicentrumában a CRF02_AG rekombináns által vezérelt HIV rendkívül változatos tája található, beleértve az M csoport (al-) altípusainak többségét, az URF-ek és CRF-ek széles skáláját, valamint az N csoportot, O, P és HIV-2 vírusok (31-33). Így a vírusrezervoár genotípusos és mennyiségi profiljára vonatkozó kiindulási adatok generálása több HIV-kládon, például Kamerunban hozzájárulna a HIV-gyógyítás optimális stratégiáinak megtervezéséhez. Figyelembe véve a vertikális fertőzésben szenvedő serdülők fent említett sérülékenységét, valamint a vírustárolókról és az immunaktivációról/gyulladásos reakcióról szóló korlátozott ismereteket ebben a populációban, az e célból származó bizonyítékok nagymértékben kiegészítik a jelenlegi globális erőfeszítéseket. Az ilyen bizonyítékok, amelyeket az egyidejű fertőzések nagy terhe mellett hoztak létre (34, 35), a HIV-perzisztencia eltérő mechanizmusait mutathatják be, amelyek távol állnak a világ más részein bejelentettektől.

Előzetes munka:

A folyamatban lévő EDCTP READY-tanulmány keretében 292 vertikálisan fertőzött serdülőből (10-19 éves) álló kohortot állítottunk fel, akik Kamerunban ART-ban részesültek. Ebben a kohorszban 40%-os kimutathatatlan vírusterhelésről (<40 kópia/ml) számoltunk be átlagosan 8 éves ART után, körülbelül 20%-os immunológiai kudarcról (CD4<250 sejt/mm3) és kevesebb, mint 10%-os klinikai arányról. kudarc (pl. WHO III/IV. szakasz) (36). Ez a populáció egyedülálló lehetőséget kínál a rezervoár méretének és természetének, az immunválasz/citokinprofilok variabilitásának, valamint a vírus altípusának, a kezelési előzményeknek (ART-sémának és időtartamának), a nemek közötti egyenlőtlenségeknek és az adherencia szintjének a kontrollra gyakorolt ​​hatásának megértésére. vírustároló.

CÉL:

E tanulmány célja, hogy jellemezze a HIV-rezervoárokat és azok variabilitását a Kamerunban antiretrovirális terápiában részesülő, vertikálisan fertőzött serdülők virológiai és immunológiai profilja szerint, és ezáltal javítsa a vírustárolók megértését, és pontos és megbízható adatokat biztosítson a HIV gyógyítására irányuló kutatásokhoz.

Konkrét célok:

Ebben a tanulmányban a következőket fogjuk végezni: 1. Meghatározzuk a HIV-1 genetikai variabilitását és a gyógyszerrezisztenciát a sejttárolókban; 2- Jellemezze az immunaktivációt/gyulladást HIV-1-gyel vertikálisan fertőzött serdülőknél; 3- Értékelje a HIV tartály méretét; 4- Értékelje az antiretrovirális terápia és az immunválasz hatását a vírustároló profilra.

Anyagok és módszerek A vizsgálat tervezése Megfigyeléses és összehasonlító vizsgálatot tervezünk HIV-fertőzött és ART-ban részesülő serdülők körében Kamerunban. A résztvevőket egy közel 300, vertikálisan fertőzött serdülőből álló, az EDCTP-READY vizsgálathoz toborzott meglévő kohorszból választják ki és írják be.

Az EDCTP-READY-tanulmány fő célja a kezelésre adott válasz, a gyógyszerrezisztencia és a HIV-1 variabilitás értékelése volt Kamerunban az első és második vonalbeli antiretrovirális terápiában részesülő serdülők körében (7). Ebben a vizsgálatban 296 HIV+ serdülőt vettünk fel, és összehasonlítottuk a HIV-1 genotípus profilját a keringő RNS-ben. 30%-a (89/296) APHI virológiai kudarcot szenved (VL>1000 kópia/ml).

Mintavételi módszer:

Az EDCTP-READY vizsgálat résztvevőitől vérmintákat vesznek a jogosultsági kritériumok szerint.

Jogosultsági kritériumok:

Bevonási kritériumok: Bekerülnek a vizsgálatba, 10-19 éves, vertikálisan fertőzött HIV+ serdülők, akik legalább 12 hónapja ART-ban részesültek, írásos hozzájárulásukat adják és törvényes képviselője írásos meghatalmazotti hozzájárulását adja.

Nem felvételi kritériumok: Nem veszik figyelembe a beiratkozáskor, HIV+ serdülőkorúak, akiknek a kórelőzménye hiányos ART, HBV/HCV és malária egyidejű fertőzés.

Kizárási kritériumok: A vizsgálatból kizártnak minősül minden olyan résztvevő, aki úgy dönt, hogy beleegyezése után szabadon kilép, vagy nem tud vérmintát adni.

Mintanagyság: A vizsgálat minimális mintalétszáma (N) 90 résztvevő, a következő képlet alapján számítva: N=p (1-p) (Zα2/α2); N = 0,02 (1-0,02) (1,962/0,052) = 30 karonként (A kar: VL<40 kópia/ml; B kar: VL 40-999 kópia/ml; C kar: vírusterhelés ≥1000 kópia/ml). P a HIV-fertőzött serdülők prevalenciája Kamerunban, P=2% [3]; α a kockázat megegyezik α = 5%-kal; Zα a kis rés, ahol Zα = 1,96.

Megjegyzés: Az immunológiai profilalkotás kontrolljaként egy 30 HIV-negatív serdülőből álló csoport fog szolgálni.

Minden résztvevő új azonosító számot kap, és az adatokat a Chantal Biya Nemzetközi Referenciaközpont (CIRCB) jelszóval védett számítógépén központosítják a HIV/AIDS megelőzésével és kezelésével kapcsolatos kutatások céljából.

Vizsgálati eljárások és változók Eljárások és ütemtervek A jelen tanulmány elkészítéséhez 18 hónap szükséges: 3 hónap (1-3. hónap) az adminisztráció és etikai jóváhagyás, 12 hónap (4-15. hónap) a résztvevők felvétele, mintavétel és laboratóriumi elemzések elvégzése, 3 hónapban (16. és 18. hónap között) az adatfeldolgozás és a jelentéskészítés tekintetében lásd a Gantt-diagramot további részletekért.

A felvételi kritériumok alapján a HIV+ serdülők esetjelentési űrlapjait kiválasztják az EDCTP-READY vizsgálatból, és felveszik a kapcsolatot törvényes gyámjukkal. A serdülőktől, illetve a törvényes gyámtól be kell szerezni a hozzájárulást, illetve a meghatalmazotti hozzájárulást. A szocio-demográfiai, klinikai adatokat és az ART-történetet ismételten értékelik az EDCTP-READY vizsgálatba való beiratkozás időszakában. Ezután 90 vagy több HIV+ serdülőt vesznek fel [karonként 30 (A kar: VL<40 kópia/ml; B kar: VL 40-999 kópia/ml; C kar: vírusterhelés ≥1000 kópia/ml)]. . 30 HIV-negatív serdülőből álló csoportot vesznek fel az immunológiai profilalkotás kontrolljaként. Az intravénás vért (5 ml x 2) egy képzett phlebotomist fogja gyűjteni laboratóriumi elemzésekhez, beleértve a PBMC-k izolálását, a plazma és a buffy coat izolálását, a CD4/CD8-számot, a plazmatikus vírusterhelést (PVL), az immunaktiváció / gyulladásos markerek értékelését, a HIV-RNS-t és HIV-DNS genotipizálás, vírusrezervoárok mennyiségi meghatározása.

A HIV-negatív résztvevőket a CIRCB-ben veszik fel, ez az intézmény 2006 óta a HIV-fertőzöttek kezelésének referenciaközpontja, és mint ilyen, a HIV-tesztelés elismert referenciaközpontja. Ezen előny alapján a CIRCB évente több intézményben és közösségben ingyenes HIV/HBV/HCV szűrővizsgálatot szervez, ezért a közeli középiskolában hasonló ingyenes szűrési kampányt szerveznek, és a jelen tanulmányt bemutatják a befogadási kritériumoknak megfelelőknek. . A potenciális résztvevőket a CIRCB-ben hívják meg törvényes gyámjukkal együtt.

A mintákat csak egyszer gyűjtik a beiratkozáskor, valamint minden releváns szocio-demográfiai és klinikai adatot. A mintákat ugyanazon a napon szállítják a CIRCB-be a PBMC-k izolálása, a DNS, a plazma és a buffy coat izolálása, a CD4/CD8-számlálás és az aktiválási/gyulladásos markerek áramlási citometria segítségével történő értékelése céljából. A plazmát összegyűjtik és -80 oC-on tárolják a plazmatikus vírusterhelés (PVL), a genotipizálás, az immunaktiváció/gyulladásos markerek ELISA tesztekkel (vagy áramlási citometriával) történő értékeléséhez. Ezt követően a HIV-DNS-t kivonják a PBMC-kből, és -80 oC-on tárolják; A HIV-DNS-t háromhavonta szállítják a Római Tor Vergata Egyetem Kísérleti Orvostudományi Tanszékére, a Róma, Olaszország, a HIV-vírus rezervoár mennyiségi meghatározására (lásd az együttműködési levelet a mellékletben).

Laboratóriumi eljárások CD4/CD8 szám: A CD4/CD8 méréseket áramlási citometriás gép segítségével határozzuk meg a korábban leírtak szerint (37).

Plazma vírusterhelés: A plazma vírusterhelést m 2000rt Abbott valós idejű rendszerrel határozzuk meg a korábban leírtak szerint (38).

HIV-RNS extrakció: Az ARN-t a plazmamintákból a Qiamp viral RNA Mini Kit (Qiagen) segítségével vonják ki a gyártó által leírtak szerint.

Pro-vírus DNS-kinyerés a buffy coat-ból: A pro-vírus DNS-t DNeasy vér- és szövetkivonó készlettel (Qiagen) vonják ki a gyártó által leírtak szerint.

PBMC-k izolálása: A PBMC-ket sűrűséggradiens centrifugálással izoláljuk Ficoll használatával, házon belüli protokollt használva.

HIV-DNS extrakció PBMC-kből: A HIV-DNS-t a QIAmp DNA Mini Kit (Qiagen) segítségével vonják ki a gyártó által leírtak szerint.

HIV-1 gének amplifikációja és szekvenálása: A HIV-1 gyógyszerrezisztencia tesztelésére szolgáló Sanger szekvenálást a virológiai kudarcban szenvedő serdülőknél egy házon belüli protokoll szerint végezzük, amint azt kutatócsoportunk korábban leírta (39). A reverz transzkriptáz DNS-szekvenciákat a Stanford Egyetem adatbázisának genotípusos rezisztencia értelmező algoritmusa (www.stanford.edu) segítségével elemezzük gyógyszerrezisztencia-mutációkra.

Filogenetikai elemzés: A Neighbor Joining filogenetikai fák létrehozása MEGA szoftver (Kimura 2-paraméteres modell, 200 bootstrap replikáció) és FigTree (40, 41) segítségével történik.

Immunprofilalkotás: Mindkét immunaktiváló/gyulladásos citokint (IL-1, IL2, IL4, IL6, IL10, IL12 és TNF-alfa) kereskedelmi ELISA kitekkel és áramlási citometriával értékeljük.

A HIV vírustárolók számszerűsítése: a vírustárolók mennyiségi meghatározása cseppecske digitális PCR (ddPCR) segítségével történik, a korábban leírtak szerint. Megjegyzendő, hogy ezt a számszerűsítést a Római Tor Vergata Egyetem Kísérleti Orvostudományi Tanszékén végzik el, amint az a jelen javaslat mellékletében található együttműködési levélben szerepel. A CIRCB és az UTV között anyagátadási és adatmegosztási megállapodást írnak alá az UTV-nek történő mintaszállítás előtt. Ez egy házon belüli protokoll a HIV-1 B altípushoz, és a kameruni mintákból várható HIV-1 nem B altípusokhoz lesz igazítva.

Adatelemzés A vizsgálat során gyűjtött adatokat SPSS szoftverrel elemezzük. A kapcsolódó tényezőket többváltozós logisztikus regresszióval értékeljük, a különböző paraméterek torzítatlan hatásának becslésével. Az adatok mediánként jelennek meg. A normálisan el nem oszló adatokhoz nem-paraméteres teszteket használnak, a különböző csoportok mediánjainak összehasonlítását (virológiai siker vs. virológiai kudarc) az U-Mann-Whitney teszt végzi. A korrelációkat Spearman teszttel végezzük, és a 0,05-nél kisebb p értékeket statisztikailag szignifikánsnak tekintjük.

Etikai megfontolások Ezt a tanulmányt Helsinki nyilatkozatának megfelelően, az emberi alanyok bevonásával végzett orvosi kutatások etikai alapelveiről szóló nyilatkozatával összhangban végezzük. Az etikai engedélyt a kameruni nemzeti etikai bizottságtól kell beszerezni az emberi egészséggel kapcsolatos kutatásokért. A vizsgálattal kapcsolatos tájékoztatást követően írásos meghatalmazottat kell beszerezni a törvényes gyámtól, és a részt vevő HIV+ serdülőtől is írásbeli hozzájárulást kell beszerezni, minden kényszer nélkül. Az adatvédelmet és a bizalmas kezelést egyedi azonosítók és jelszóval védett adatbázis használatával biztosítjuk, és csak az arra jogosult személyzet férhet hozzá. A résztvevők bármikor szándékosan elhagyhatják a vizsgálatot anélkül, hogy ez bármilyen hatással lenne a vizsgálati klinikán végzett rutin megfigyelésükre. A phlebotomia nem invazív (vénapunkció) lesz, és képzett nővér végzi.

Minőségbiztosítás:

Vizsgálati csoportunkban lesz egy minőségbiztosítási tiszt, aki a vizsgálati protokoll minden SOP-jáért lesz felelős, és a teljes vizsgálat során kezeli a jártassági tesztelést és az adatok validálását.

Potenciális kockázatok kezelése: A betegeket érintő kockázatok minimálisak, mivel az egyetlen olyan eljárás, amelynek az önkéntest vetik alá, az a phlebotomis vagy orvos által végzett vénapunkció. A vénapunkció enyhén fájdalmas lehet, de gyakorlatilag nem áll fenn a szövődmények kockázata. Az alanyokat érintő lehetséges kockázatok, amelyek egyike sem valószínű, hogy előfordulhat, a pillanatnyi fájdalom, a véraláfutás a helyszínen vagy az esetleges (de rendkívül valószínűtlen) fertőzés. Ha ilyen szövődmények lépnek fel, a résztvevő sürgősségi orvosi ellátásban részesül.