Caratterizzazione dei serbatoi di HIV-1 negli adolescenti infetti da HIV-1 non B in terapia ART in Camerun (AVIR)

Titolo: Caratterizzazione dei serbatoi virali tra gli adolescenti con infezione verticale da HIV-1 non-B sottoposti a terapia antiretrovirale in Camerun.

Acronimo: Studio AVIR, Serbatoio virale adolescenziale

Importanza e rilevanza L'Africa subsahariana (SSA) è colpita in modo sproporzionato dall'HIV/AIDS, con quasi il 70% delle epidemie globali. Con il più alto tasso di infezioni pediatriche da HIV, circa nove bambini su dieci affetti da HIV si trovano nella regione SSA(1, 2). Gli adolescenti e i giovani rappresentano una quota crescente di persone che vivono con l’HIV in tutto il mondo. Nel 2019 circa 1,7 milioni [1,1 milioni-2,4 milioni] di adolescenti di età compresa tra 10 e 19 anni vivevano con l'HIV in tutto il mondo, rappresentando circa il 5% di tutte le persone che vivevano con l'HIV, circa 1,5 milioni [1,0 - 2,1 milioni] o l'88% degli adolescenti infetti da HIV vivono in SSA. Solo nel 2019, 460.000 [260.000-680.000] giovani di età compresa tra 10 e 24 anni hanno contratto il virus dell’HIV, di cui 170.000 [53.000-340.000] erano adolescenti di età compresa tra 10 e 19 anni. In aggiunta a ciò, i dati più recenti indicano che solo il 27% delle ragazze adolescenti e il 16% dei ragazzi adolescenti di età compresa tra 15 e 19 anni nell’Africa orientale e meridionale – la regione più colpita dall’HIV – sono stati sottoposti al test HIV negli ultimi 12 mesi e hanno ricevuto il risultato dell'ultimo test. I tassi di test nell’Africa occidentale e centrale e nell’Asia meridionale sono ancora più bassi. Se le tendenze attuali continueranno, centinaia di migliaia di persone diventeranno positive all’HIV nei prossimi anni e, senza conoscere il loro stato, gli adolescenti perderanno cure salvavita. Inoltre, un’ampia popolazione di bambini infettati dall’HIV per via perinatale negli ultimi dieci anni sta raggiungendo l’adolescenza (3). Delle circa 690.000 persone morte per malattie legate all’AIDS nel 2019, 110.000 (o circa il 16%) erano bambini di età inferiore ai 20 anni. (Tendenze globali e regionali dell’UNICEF, luglio 2020).

Con l’avvento e la scalabilità della terapia antiretrovirale (ART), si registra una diminuzione globale dei decessi legati all’AIDS. Alla fine del 2019, 25,4 milioni di persone avevano accesso alla terapia antiretrovirale, ovvero il 67% di tutte le persone che vivono con l’HIV. Tuttavia, solo il 53% dei bambini affetti da HIV ricevevano la terapia antiretrovirale. È interessante notare che circa il 94% di tutti i bambini che ricevono ART provengono dalla SSA (4). In questo contesto di continue nuove infezioni pediatriche da HIV e di crescente copertura della terapia antiretrovirale pediatrica, il numero di bambini che vivono con l’HIV aumenterà, suggerendo una maggiore probabilità di raggiungere l’età adolescenziale e persino l’età adulta se i regimi terapeutici rimangono pienamente efficaci nel controllare l’infezione da HIV (3, 4). L’ADLHIV costituisce quindi una popolazione HIV con crescenti preoccupazioni per la salute e con risultati molto limitati per le migliori pratiche generalizzabili specifiche per questa popolazione target, soprattutto in SSA.

Come diversi paesi dell’Africa centrale e occidentale, il Camerun deve ancora far fronte a un’epidemiologia generalizzata dell’HIV (prevalenza del 2,7%) (5), con una prevalenza più elevata tra le donne incinte (5,7%) e i neonati/bambini esposti all’HIV (5,8% [958/16.638 ] positività alla prima PCR e 15% alla fine della cascata PMTCT) (6). A giugno 2018, la copertura nazionale dell’ART era del 51,5% (281.083), che comprende 12.362 bambini di età inferiore a 15 anni (6). Per quanto riguarda la risposta all’ART in Camerun, abbiamo riportato un tasso complessivo di soppressione virale del 79,4%, con disparità significative tra le fasce di età: 81,1% negli adulti, 75,6% nei bambini e solo 53,3% negli adolescenti di età compresa tra 10 e 19 anni (7). Analogamente ai rapporti dell’UNAIDS, gli adolescenti che vivono con l’HIV (ADLHIV) rappresentano la popolazione più vulnerabile e svantaggiata in risposta alle epidemie(1, 5). Per una crescita più sicura verso l’età adulta, è necessario dare priorità a questa popolazione nella ricerca di strategie terapeutiche innovative che garantiscano il loro benessere e il loro contributo allo sviluppo della SSA.

Nonostante gli indiscussi benefici dell’ART, ci sono dei limiti con le attuali strategie di trattamento. Da notare che la natura permanente dell’attuale ART si accompagna a sfide legate all’adesione per la maggior parte dei pazienti, le tossicità attribuite all’ART e la persistente disfunzione immunitaria hanno significativi danni alla salute, e la resistenza ai farmaci per l’HIV (HIVDR) è in aumento, soprattutto nei paesi SSA dove la maggior parte dei pazienti con esperienza ART i pazienti vivono (8). Esiste la minaccia di una nuova epidemia di HIV emergente, guidata dall’HIVDR agli antiretrovirali esistenti. Queste sfide sono particolarmente vere per le popolazioni pediatriche a causa delle limitate opzioni ART, delle formulazioni farmacologiche inadeguate e dei crescenti casi di non aderenza man mano che si avvicina l’adolescenza. Queste sfide richiedono approcci verso la cura (funzionale) o la remissione dell’HIV, soprattutto per le popolazioni più vulnerabili (ad es. ADLHIV) (7, 9).

I concetti alla base del progetto, comprese idee, modelli o ipotesi, le strategie di remissione o eradicazione dell'HIV-1 mirano a raggiungere la remissione virale in assenza di terapia antiretrovirale (ART). Lo sviluppo di una cura per l’HIV-1 rimane difficile a causa dei serbatoi latenti. Il serbatoio latente (LR) dell'HIV-1 può essere definito come la frazione di cellule che ospitano DNA provirale trascrizionalmente silenzioso e che sono in grado di produrre virioni infettivi dopo l'attivazione(10). Le cellule CD4T della memoria a riposo sono l'ospite primario del LR, ma l'infezione da HIV-1 in queste cellule è inefficiente a causa della loro bassa espressione di co-recettori e delle restrizioni intrinseche alla trascrizione inversa (11, 12). Tuttavia, esistono prove che l'HIV-1 può infettare le cellule CD4T quiescenti direttamente o tramite trasmissione da cellula a cellula, sebbene l'infezione in queste cellule sia associata a una cinetica di replicazione più lenta (13). In alternativa, la latenza viene stabilita quando un sottogruppo di cellule CD4T infette e attivate ritorna a un fenotipo di memoria a riposo, silenziando efficacemente l'espressione genica virale e sostenendo al tempo stesso il DNA provirale a lungo termine(14). Il provirus viene mantenuto in uno stato quiescente in queste cellule attraverso fattori dell'ospite come la soppressione epigenetica, la deplezione di fattori di trascrizione come NF-κB e l'interferenza trascrizionale dovuta all'integrazione nei geni espressi, esaminati in maggiore dettaglio (15). Il rimbalzo virale dal LR dopo la cessazione dell’ART è rapido, portando a viremia rilevabile entro poche settimane dall’interruzione della terapia (16). Inoltre, l’avvio precoce dell’ART nell’infezione non è sufficiente per fermare la formazione del LR, suggerendo che il LR si stabilisce e si diffonde precocemente (Chun et al., 1998; Whitney et al., 2014; Colby et al., 2018), anche nei bambini con infezione verticale che hanno iniziato la ART subito dopo la nascita (17). Il serbatoio latente è stabile nonostante anni di ART soppressiva ed è la fonte della viremia di rimbalzo dopo l’interruzione della terapia. Le cellule latentemente infette rappresentano quindi la principale barriera alla cura dell’HIV-1 e dovrebbero essere specificamente prese di mira da nuove strategie di trattamento ed eradicazione.

Il progresso verso lo sviluppo di una cura funzionale o sterilizzante per l’HIV-1 è stato significativamente ostacolato dalla presenza della LR. Attualmente, due persone sono guarite dall'infezione da HIV-1, i cosiddetti pazienti di Berlino e Londra, che da quando hanno ricevuto trapianti di cellule staminali allogeniche da donatori CCR5?32/?32, sono risultati costantemente negativi al rimbalzo virale per oltre 10 e 2 anni, rispettivamente, senza ART (18). In questi casi, il pool di cellule infette è stato significativamente impoverito durante il condizionamento pre-trapianto e sostituito con cellule donatrici resistenti all'infezione con il virus R5-tropico a causa di un'ampia delezione nel co-recettore CCR5 (19). A causa della relativa scarsità di donatori di CCR5 ?32/?32 e delle circostanze uniche che predeterminano questi casi, questo tipo di cura non è fattibile per un uso diffuso, tuttavia sottolinea il principio di base della cura dell'HIV-1; silenziare o sradicare l’HIV-1 LR (20). Negli ultimi dieci anni, la comprensione di dove e come l’HIV persiste negli individui sottoposti a terapia ART si è trasformata sostanzialmente con l’evidenza che il virus persiste in più tipi di cellule e siti di tessuti, e nelle cellule infette latenti a lunga vita, sia quiescenti che proliferanti. Pertanto, nel quadro di un trattamento soppressivo, stime accurate del serbatoio virale aiuterebbero a controllare meglio la persistenza virale, che a sua volta potrebbe superare le barriere esistenti per ottenere una cura(21).

Il DNA dell’HIV totale è un biomarcatore di riferimento che include il DNA dell’HIV sia integrato che non integrato e riflette il livello globale del serbatoio virale. È importante sottolineare che Buzon et al. hanno riportato una correlazione statistica tra il tempo trascorso dall'infezione da HIV all'inizio del trattamento e il livello totale di DNA dell'HIV dopo 10 anni di trattamento continuo in una coorte di adulti trattati per la prima volta con infezione precoce (22). Nei bambini, il livello di HIV DNA era marcatamente più basso quando il controllo virale veniva raggiunto prima dell’età di 1 anno (23). Rispetto ad altri marcatori, il DNA totale dell’HIV presenta il vantaggio di una facile quantificazione mediante PCR standardizzata, sensibile e in tempo reale, inclusa la PCR con gocce digitali (ddPCR) (24).

L’attivazione immunitaria generalizzata è un segno distintivo dell’infezione da HIV-1. In questo stato, una varietà di cellule immunitarie mostrano un aumento dell'espressione di marcatori di attivazione, proliferazione e apoptosi, turnover cellulare con regolazione aberrante del ciclo cellulare, produzione di citochine proinfiammatorie e aumento della fibrosi del tessuto linfoide (25). L’attivazione immunitaria è fortemente associata alla progressione della malattia da HIV-1; ad esempio, l'attivazione delle cellule T, misurata dall'espressione di CD38 e HLA-DR, è più predittiva della deplezione delle cellule T CD4+ e di una sopravvivenza più breve rispetto alla carica virale plasmatica (26, 27). Inoltre, il livello di attivazione immunitaria precoce nell'infezione da HIV-1, misurato dall'attivazione delle cellule T CD8+, predice la perdita di cellule T CD4+ indipendentemente dai livelli plasmatici di HIV-1 RNA (28). La soppressione della replicazione virale con un efficace trattamento antiretrovirale (ART) riduce l’attivazione immunitaria, ma anche i regimi ART efficaci non sono in grado di ridurre i livelli di attivazione immunitaria negli individui con infezione da HIV ai livelli osservati negli individui sani (25). I bambini affetti da HIV, anche se trattati con successo con la terapia antiretrovirale, devono affrontare per tutta la vita un’elevata attivazione immunitaria. Pertanto, valutare il potenziale impatto dell’attivazione immunitaria cronica e dell’infiammazione sullo sviluppo del sistema immunitario e sull’esito della malattia nell’infezione da HIV pediatrica è di particolare importanza. Studi recenti hanno dimostrato che l’attivazione immunitaria (HLA-DR, CD38) e i marcatori di esaurimento (Tim-3, PD-1, Lag-3) sono fortemente associati alla dimensione del serbatoio negli adulti trattati con ART, quindi si potrebbe anticipare che riducendo al minimo la quantità virale Il serbatoio con l'ART precoce potrebbe, allo stesso modo, ridurre al minimo il livello di attivazione immunitaria e le malattie "dell'invecchiamento" non legate all'AIDS associate all'attivazione immunitaria persistente.

Esistono prove limitate nella caratterizzazione dei serbatoi di HIV nella regione dell’Africa centrale e occidentale, un ambiente geografico con la più alta variabilità nei ceppi circolanti di HIV-1 e HIV-2 (29, 30). Ad esempio, il Camerun, un epicentro zoonotico dell’HIV-1, ospita un panorama ampiamente diversificato di HIV guidato dal ricombinante CRF02_AG, inclusa la maggior parte dei sottotipi (sottotipi) del gruppo M, una vasta gamma di URF e CRF e il gruppo N, Virus O, P e HIV-2(31-33). Pertanto, la generazione di dati di base sul profilo genotipico e quantitativo del serbatoio virale in diversi cladi di HIV in contesti come il Camerun contribuirebbe alla progettazione di strategie ottimali per la cura dell’HIV. Considerando la suddetta vulnerabilità degli adolescenti con infezione verticale e la conoscenza limitata sui serbatoi virali e sull’attivazione immunitaria/reazione infiammatoria in questa popolazione, le prove generate da questo obiettivo saranno altamente complementari agli attuali sforzi globali. Tali prove, generate in un contesto di elevato carico di coinfezioni (34, 35), potrebbero rappresentare meccanismi differenziali di persistenza dell’HIV lontani da quelli riportati in altre parti del mondo.

Lavoro preliminare:

Nell'ambito dello studio EDCTP READY in corso, abbiamo creato una coorte di 292 adolescenti con infezione verticale (10-19 anni) trattati con ART in Camerun. In questa coorte, abbiamo riportato un tasso del 40% di carica virale non rilevabile (<40 copie/mL) dopo una media di 8 anni di ART, un tasso di fallimento immunologico di circa il 20% (CD4<250 cellule/mm3) e un tasso di fallimento clinico inferiore al 10% fallimento (es. Stadi III/IV dell'OMS) (36). Questa popolazione offre un'opportunità unica per comprendere le dimensioni e la natura del serbatoio, la variabilità della risposta immunitaria/profilo delle citochine e l'effetto del sottotipo virale, della storia del trattamento (regime ART e durata), delle disparità di genere e del livello di aderenza al controllo della malattia. serbatoio virale.

SCOPO:

Lo scopo di questo studio è caratterizzare i serbatoi dell’HIV e la loro variabilità in base ai profili virologici e immunologici degli adolescenti con infezione verticale che ricevono terapia antiretrovirale in Camerun e, quindi, migliorare la comprensione dei serbatoi virali e fornire dati accurati e affidabili per la ricerca sulla cura dell’HIV.

Obiettivi specifici:

In questo studio: 1- Determinare la variabilità genetica dell'HIV-1 e la resistenza ai farmaci nei serbatoi cellulari; 2- Caratterizzare l'attivazione/infiammazione immunitaria negli adolescenti verticalmente infetti da HIV-1; 3- Valutare la dimensione del serbatoio dell'HIV; 4- Valutare l'effetto della terapia antiretrovirale e della risposta immunitaria sul profilo del serbatoio virale.

Materiali e metodi Disegno dello studio Abbiamo in programma di condurre uno studio osservazionale e comparativo tra gli adolescenti che vivono con l'HIV e ricevono ART in Camerun. I partecipanti saranno selezionati e arruolati da una coorte esistente di quasi 300 adolescenti con infezione verticale reclutati per lo studio EDCTP-READY.

L'obiettivo principale dello studio EDCTP-READY era valutare la risposta al trattamento, la resistenza ai farmaci e la variabilità dell'HIV-1 tra gli adolescenti in terapia antiretrovirale di prima e seconda linea in Camerun (7). In questo studio, abbiamo reclutato 296 adolescenti HIV+ e abbiamo confrontato il profilo genotipico dell'HIV-1 nell'RNA circolante. Sul 30% (89/296) di APHI che hanno manifestato fallimento virologico (VL>1000 copie/ml).

Metodo di campionamento:

I campioni di sangue verranno raccolti dai partecipanti allo studio EDCTP-READY secondo i criteri di ammissibilità.

Criteri di ammissibilità:

Criteri di inclusione: Verranno arruolati nello studio adolescenti HIV+ di età compresa tra 10 e 19 anni, infetti verticalmente, in terapia ART da almeno 12 mesi, che forniscano il loro consenso scritto e il cui tutore legale fornisca delega-consenso scritto.

Criteri di non inclusione: non saranno presi in considerazione per l'arruolamento, adolescenti HIV+ con storia ART incompleta, HBV/HCV e coinfezioni malariche.

Criteri di esclusione: Sarà considerato escluso dallo studio qualsiasi partecipante che decida liberamente di ritirarsi dopo aver dato il consenso o impossibilitato a donare il campione di sangue.

Dimensione del campione: la dimensione minima del campione (N) dello studio è di 90 partecipanti, calcolata in base alla seguente formula: N=p (1-p) (Zα2/α2); N = 0,02(1-0,02) (1,962/0,052) = 30 per braccio (braccio A: VL <40 copie/ml; braccio B: VL 40-999 copie/ml; braccio C: carica virale ≥ 1000 copie/ml). P è la prevalenza degli adolescenti che vivono con l'HIV in Camerun con P=2% [3]; essendo α il rischio concorda con α = 5%; Zα è il piccolo divario con Zα = 1,96.

NB: Un gruppo di 30 adolescenti HIV negativi servirà da controllo per la profilazione immunologica.

A tutti i partecipanti verrà assegnato un nuovo numero di identificazione e i dati saranno centralizzati in un computer protetto da password presso il Centro di riferimento internazionale Chantal Biya (CIRCB) per la ricerca sulla prevenzione e la gestione dell'HIV/AIDS.

Procedure e variabili dello studio Procedure e tempistiche Il presente studio richiede 18 mesi per essere completato: 3 mesi (mesi 1-3) per l'amministrazione e l'approvazione etica, 12 mesi (mesi da 4 a 15) per l'arruolamento dei partecipanti, il campionamento e le analisi di laboratorio, 3 mesi (mese da 16 a 18) per l'elaborazione dei dati e il reporting, vedere il diagramma di Gantt per maggiori dettagli.

Sulla base dei criteri di inclusione, i moduli di segnalazione dei casi di adolescenti HIV+ verranno selezionati dallo studio EDCTP-READY e il loro tutore legale verrà contattato. Il consenso e il consenso informato per delega saranno ottenuti rispettivamente dagli adolescenti e dal tutore legale. I dati socio-demografici, clinici e la storia della ART saranno valutati nuovamente per il periodo durante l'arruolamento nello studio EDCTP-READY. Quindi verranno arruolati 90 o più adolescenti HIV+ [30 per braccio (braccio A: VL <40 copie/ml; braccio B: VL 40-999 copie/ml; braccio C: carica virale ≥ 1000 copie/ml)] . Verrà arruolato un gruppo di 30 adolescenti HIV-negativi che fungeranno da controllo per la profilazione immunologica. Il sangue endovenoso (5 ml x 2) verrà raccolto da un prelievo esperto per analisi di laboratorio tra cui isolamento di PBMC, isolamento di plasma e buffy coat, conta di CD4/CD8, carica virale plasmatica (PVL), attivazione immunitaria/valutazione dei marcatori infiammatori, HIV-RNA e Genotipizzazione dell'HIV-DNA, quantificazione dei serbatoi virali.

I partecipanti negativi all'HIV verranno reclutati presso il CIRCB, questa istituzione è un centro di riferimento per la gestione delle persone infette da HIV dal 2006 e come tale è un rinomato centro di riferimento per i test HIV. Sulla base di questo vantaggio, il CIRCB organizza ogni anno test di screening gratuiti per HIV/HBV/HCV per diverse istituzioni e comunità, pertanto, una simile campagna di test gratuiti sarà organizzata in una scuola secondaria vicina e il presente studio sarà presentato a coloro che soddisfano i criteri di inclusione . I potenziali partecipanti saranno invitati al CIRCB con il loro tutore legale per l'iscrizione.

I campioni verranno raccolti una sola volta al momento dell'arruolamento, così come tutti i dati socio-demografici e clinici rilevanti. I campioni verranno trasportati al CIRCB lo stesso giorno per l'isolamento delle PBMC, l'isolamento del DNA, del plasma e del buffy coat, la conta dei CD4/CD8 e la valutazione dei marcatori di attivazione/infiammatori mediante citometria a flusso. Il plasma verrà raccolto e conservato a -80°C per la carica virale plasmatica (PVL), la genotipizzazione, l'attivazione immunitaria/la valutazione dei marcatori infiammatori utilizzando test ELISA (o citometria a flusso). Il DNA dell'HIV verrà successivamente estratto dalle PBMC e conservato a -80°C; L'HIV-DNA verrà spedito ogni tre mesi al dipartimento di medicina sperimentale, Università di Roma Tor Vergata, Roma, Italia, per la quantificazione del serbatoio virale dell'HIV (vedere lettera di collaborazione nella sezione allegata).

Procedure di laboratorio Conta dei CD4/CD8: le misurazioni dei CD4/CD8 saranno determinate utilizzando una macchina per citometria a flusso come precedentemente descritto (37).

Carica virale plasmatica: la carica virale plasmatica sarà determinata utilizzando il sistema in tempo reale m 2000rt Abbott come precedentemente descritto (38).

Estrazione dell'HIV-RNA: l'ARN verrà estratto dai campioni di plasma utilizzando il kit Qiamp viral RNA Mini Kit (Qiagen) come descritto dal produttore.

Estrazione del DNA pro-virale dal buffy coat: il DNA pro-virale verrà estratto utilizzando il kit di estrazione di sangue e tessuti DNeasy (Qiagen) come descritto dal produttore.

Isolamento dei PBMC: i PBMC saranno isolati mediante centrifugazione in gradiente di densità utilizzando Ficoll utilizzando un protocollo interno.

Estrazione del DNA dell'HIV dalle PBMC: il DNA dell'HIV verrà estratto utilizzando il QIAmp DNA Mini Kit (Qiagen) come descritto dal produttore.

Amplificazione e sequenziamento dei geni dell'HIV-1: il sequenziamento di Sanger per il test di resistenza ai farmaci HIV-1 sarà eseguito per gli adolescenti che hanno riscontrato un fallimento virologico secondo un protocollo interno, come precedentemente descritto dal nostro gruppo di ricerca (39). Le sequenze di DNA della trascrittasi inversa verranno analizzate per individuare mutazioni legate alla resistenza ai farmaci utilizzando l'algoritmo di interpretazione della resistenza genotipica del database dell'Università di Stanford (www.stanford.edu).

Analisi filogenetica: gli alberi filogenetici Neighbor Joining verranno creati utilizzando il software MEGA (modello Kimura a 2 parametri, 200 repliche bootstrap) e FigTree (40, 41).

Profili immunitari: entrambe le citochine infiammatorie/di attivazione immunitaria (IL-1, IL2, IL4, IL6, IL10, IL12 e TNF-alfa) saranno valutate utilizzando kit ELISA commerciali e citometria a flusso.

Quantificazione dei serbatoi virali dell'HIV: i serbatoi virali saranno quantificati utilizzando la droplet digital PCR (ddPCR) come descritto in precedenza. Da notare che questa quantificazione sarà eseguita presso il dipartimento di medicina sperimentale dell'Università di Roma Tor Vergata, Roma, Italia, come indicato nella lettera di collaborazione contenuta nell'allegato della presente proposta. Un trasferimento di materiale e un accordo di condivisione dei dati saranno firmati tra CIRCB e UTV prima della spedizione del campione a UTV. È un protocollo interno per il sottotipo HIV-1 B e sarà adattato per i sottotipi HIV-1 non B attesi dai campioni camerunesi.

Analisi dei dati I dati raccolti durante lo studio verranno analizzati utilizzando il software SPSS. I fattori associati verranno valutati utilizzando la regressione logistica multivariata, con un approccio di stima dell'effetto imparziale dei diversi parametri. I dati verranno riportati come mediana. Per i dati non distribuiti normalmente verranno utilizzati test non parametrici, i confronti delle mediane tra i diversi gruppi (successo virologico vs fallimento virologico) saranno eseguiti mediante il test U-Mann-Whitney. Verranno effettuate correlazioni con il test di Spearman e valori p inferiori a 0,05 saranno considerati statisticamente significativi.

Considerazioni etiche Questo studio sarà condotto secondo la dichiarazione di Helsinki sui principi etici per la ricerca medica che coinvolge soggetti umani. L'autorizzazione etica sarà ottenuta dal comitato etico nazionale del Camerun per la ricerca sulla salute umana. dopo un avviso informato sullo studio, sarà ottenuta una delega scritta informata dal tutore legale e sarà ottenuto anche un assenso scritto dall'adolescente HIV+ partecipante, senza alcuna coercizione. La privacy e la riservatezza saranno garantite, attraverso l'utilizzo di identificatori univoci e di un database protetto da password e l'accesso sarà consentito solo al personale autorizzato. I partecipanti saranno liberi di lasciare deliberatamente lo studio in qualsiasi momento, senza alcun effetto sul monitoraggio di routine presso la clinica dello studio. Il salasso sarà non invasivo (puntura venosa) e sarà eseguito da un infermiere qualificato.

Garanzia di qualità:

Il nostro team di studio includerà un responsabile del controllo qualità che sarà responsabile di tutte le SOP per il protocollo di studio e gestirà i test valutativi e la convalida dei dati durante l'intero studio.

Gestione dei rischi potenziali: i rischi per i pazienti sono minimi poiché l'unica procedura a cui è sottoposto il volontario è la venipuntura da parte di un flebotomista o di un medico. La venipuntura può essere leggermente dolorosa, ma è praticamente priva di rischio di complicanze. I rischi potenziali per i soggetti, nessuno dei quali è probabile che si verifichi, possono includere dolore momentaneo, lividi nella sede o possibile (ma estremamente improbabile) infezione. Se si verificano tali complicazioni, al partecipante verrà fornito un trattamento medico di emergenza.