Het effect van Lipoproteïne (a) op arteriële stijfheid, endotheliale functie en myocardiale deformatie (Lpa_endo)

1. Introductie Lipoproteïne(a), of Lp(a), is een type lipoproteïne dat structureel vergelijkbaar is met LDL (low-density lipoproteïne) maar een extra eiwit draagt genaamd apolipoproteïne (a). Recente gegevens stellen Lp(a) vast als een predisponerende risicofactor voor cardiovasculaire ziekten, zoals coronairlijden, beroerte en aortaklepstenose. Verhoogde niveaus van Lp(a) dragen bij aan deze aandoeningen door atherosclerose te bevorderen. De niveaus worden voornamelijk genetisch bepaald, met minimale invloed van voeding en levensstijl. Dit maakt het een belangrijke factor voor het beoordelen van cardiovasculair risico, vooral bij personen met een familiegeschiedenis van coronairlijden of patiënten die vroegtijdige cardiovasculaire problemen ervaren ondanks normale lipideniveaus.

   Hoewel Lp(a)-niveaus sterk kunnen variëren, is de algemeen geaccepteerde drempel voor verhoogd cardiovasculair risico 50 mg/dL (of 125 nmol/L). Personen met niveaus boven deze limiet hebben een hoger risico op cardiovasculaire incidenten. Geschat wordt dat 20-30% van de algemene bevolking verhoogde Lp(a)-niveaus heeft, wat het een veelvoorkomende risicofactor maakt. Momenteel zijn er geen breed beschikbare behandelingen die specifiek gericht zijn op Lp(a)-niveaus, hoewel PCSK9-remmers en inclisiran veelbelovende resultaten hebben getoond in klinische onderzoeken.

2. Doel van de studie Er is momenteel onvoldoende bibliografische documentatie over het effect van Lp(a) op arteriële stijfheid, endotheelfunctie en de vervorming van het linker atrium en de linker ventrikel.

   Het primaire doel van deze studie is om het effect van Lp(a)-niveaus op arteriële stijfheid, endotheelfunctie en linker atrium (LA) en linker ventrikel (LV) vervorming te onderzoeken over een follow-upperiode van 6 maanden.

   Secundair zal de studie onderzoeken:

   • a) De incidentie van belangrijke nadelige cardiovasculaire gebeurtenissen (MACE), inclusief cardiovasculaire sterfte, acuut myocardinfarct en acute beroerte.
   • b) De correlatie tussen MACE-incidentie en parameters van arteriële stijfheid, endotheelfunctie en LA/LV-vervorming.
   • c) De niveaus van oxidatieve belasting markers.

3. Materialen en Methoden

Deze observationele studie zal volwassenen van 18-75 jaar (ongeacht geslacht) omvatten die de poliklinieken van de 2e Universitaire Cardiologiekliniek in het "Attikon" Algemeen Ziekenhuis bezoeken. Alle deelnemers zullen een toestemmingsformulier ondertekenen. Een volledige medische geschiedenis, klinisch onderzoek en bloedafname zullen worden uitgevoerd om de niveaus van totaal cholesterol, LDL-C, HDL-C, triglyceriden en Lp(a) bij elk bezoek te bepalen. Deelnemers worden verdeeld in drie groepen:

• Groep A: Lp(a) ≥50 mg/dL met totaal cholesterol <200 mg/dL
• Groep B: Lp(a) <50 mg/dL met totaal cholesterol >200 mg/dL
• Groep C (Controle): Lp(a) <50 mg/dL met totaal cholesterol <200 mg/dL De exclusiecriteria omvatten: 1. Geschiedenis van auto-immuun/auto-inflammatoire ziekte, 2. Ernstige klephartaandoening, 3. Ernstige chronische nierziekte (eGFR <60 ml/min/1.73 m²), 4. Actieve zwangerschap en 5. Ernstige leverinsufficiëntie.

In elke groep worden n ≥ 100 deelnemers verwacht.

De volgende metingen zullen voor elke groep worden uitgevoerd bij aanvang en na 6 en 12 maanden na inschrijving:

• Arteriële Stijfheid: Bepaling van de carotis-femorale pulsgolfsnelheid (cf-PWV) met behulp van het Complior SP-apparaat en 24-uurs pulsgolfanalyse met het Mobil-O-Graph-apparaat. Pulsgolfsnelheid is de gouden standaard voor de evaluatie van arteriële stijfheid [21,22]. De onderzoekers zullen twee niet-invasieve druksensoren gebruiken om de carotis- en femorale golfvormen te registreren. De onderzoekers zullen de afstand tussen de twee arteriële locaties meten met een meetlint. PWV wordt berekend door de afstand te delen door de transittijd tussen golven (m/s). De juiste correcties van de PWV werden toegepast, na vermenigvuldiging van de standaard PWV-uitgangswaarden met 0,8 [22]. Centrale systolische bloeddruk (cSBP, mmHg) en centrale diastolische bloeddruk (cDBP, mmHg) worden gemeten met Complior.
• Endotheelfunctie: De onderzoekers zullen de geperfundeerde grenszone (PBR) van de sublinguale arteriële microvaten (bereik 4 tot 25 µm) meten met behulp van Sidestream Darkfield (SDF) beeldvorming (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, Utah, Verenigde Staten) [18]. Deze techniek maakt de beoordeling van het endotheelglycocalyx mogelijk met een niet-invasieve methode. De PBR is de celarme laag, die ontstaat uit de fasenscheiding tussen de stromende erytrocyten en plasma op het oppervlak van het microvat lumen. De PBR omvat het meest luminale deel van glycocalyx dat celpenetratie mogelijk maakt. Een verhoogde PBR komt overeen met diepere penetratie van erytrocyten in glycocalyx, wat wijst op verlies van glycocalyx barrière-eigenschappen en is een marker van verminderde glycocalyxdikte. De meting van endotheelglycocalyxdikte met SDF-beeldvorming is eenvoudig uit te voeren (duur van 3 minuten) en wordt niet beïnvloed door vaardigheden van de operator. Bovendien heeft het een gestandaardiseerde methodologie, biedt het metingen van meerdere steekproeflocaties (>3.000 vasculaire segmenten van sublinguale microvasculatuur), heeft het zeer goede reproduceerbaarheid en wordt het daarom voorgesteld als een geldige methode om endotheelintegriteit te beoordelen door de European Society of Cardiology Working Group on Peripheral Circulation. De PBR-metingen zijn onafhankelijk van RBC-vulling van de vatsegmenten (hematocriet), omdat de software alleen vatsegmenten omvat die een vulfpercentage van meer dan 50% hebben [9,18]. Vatsegmenten worden dus alleen geselecteerd wanneer ten minste 11 van de 21-lijnmarkers een positief signaal hebben voor de aanwezigheid van een erytrocyt. PBR-waarden zijn dus onafhankelijk van hematocriet, wat een beschadigd glycocalyx weerspiegelt dat toegankelijker is voor circulerende erytrocyten.
• Cardiale Vervorming: Bij alle deelnemers zullen de onderzoekers longitudinale systolische strain meten van standaard tweedimensionale (2D) acquisities (beeldfrequentie: 70-80/seconde) met behulp van gespecialiseerde software (EchoPac 206, GE Healthcare). Globale longitudinale strain (GLS) wordt berekend met het 17 LV-segmentmodel, verkregen uit apicale kamerbeelden (4-, 2- en 3-kamerbeeld). De myocardiale vervormingen in de basale, mid-ventriculaire en apicale segmenten werden gemiddeld tot GLS. Alle variabelen vertegenwoordigen de gemiddelde waardemetingen genomen in drie opeenvolgende hartcycli. Inter- en intra-observer variabiliteit van GLS was respectievelijk 8 en 5%. LA-functie wordt geëvalueerd met transthoracale echocardiografische speckle-tracking strain beeldvorming. Een speckle-tracking algoritme werd toegepast op het LA-myocard in apicale 4- en 2-kamerbeelden. De breedte van het interessegebied werd aangepast aan de dikte van de LA-wand, en de hartcyclus werd afgebakend door QRS-onset aan te geven. LA-reservoir strain, een maat voor LA-compliantie, werd gemeten als piek longitudinale strain (gemiddelde van alle 12 segmenten in de apicale 4- en 2-kamerbeelden) tijdens ventriculaire systole, waarbij QRS-onset als referentiepunt werd genomen. Na het definiëren van mitralis- en aortaklepopenings- en sluitingstijden door anatomische M-mode, evenals atriale contractie, zal LA longitudinale strain, verkregen door 2D strain, worden gemeten in alle drie atriale fasen (reservoir, conduit en atriale contractie) als volgt: reservoirperiode werd gedefinieerd als het interval tussen mitralisklepsluiting en mitralisklepopenings, conduitperiode als het interval tussen mitralisklepopenings en het begin van atriale contractie, zoals beoordeeld door anatomische M-mode, en contractiele periode als het interval tussen het begin van atriale contractie, zoals beoordeeld door anatomische M-mode, en mitralisklepsluiting. Vervolgens werd de atriale vervorming van elke periode berekend door het respectieve verschil in strain te meten (waarden aan het einde minus waarden aan het begin).
• Oxidatieve Belasting: Bepaling van malondialdehyde (MDA) en proteïne carbonyl (PC) niveaus als markers van oxidatieve stress. MDA wordt spectrofotometrisch geschat met een commercieel kit (Oxford Biomedical Research, Rochester Hills, MI) van colorimetrische assay voor lipideperoxidatie (meetbereik, 1-20 nmol/L). Voor de bepaling van PC's (nmol/mL) gebruikten de onderzoekers de spectrofotometrische beoordeling van 2,4-dinitrofenylhydrazinederivaten van PC's.
• Statistische Analyse: Statistische analyse wordt uitgevoerd met SPSS versie 29 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL). Alle continue variabelen worden gepresenteerd als gemiddelde ±SD als ze normaal verdeeld zijn, zoals aangegeven door de Kolmogorov-Smirnov- en Shapiro-Wilk-normaliteitstests. In geval van niet-normale verdeling wordt transformatie naar rangen uitgevoerd. Nominale variabelen worden gepresenteerd als percentages. Correlatieanalyse wordt uitgevoerd via Spearman- of Pearson-correlatietests, gebaseerd op gegevensverdeling. Categorische variabelen worden geanalyseerd via Chi-kwadraattests of Fisher's exact tests, waar van toepassing. ANOVA voor herhaalde metingen wordt gebruikt voor (1) metingen van bovengenoemde variabelen bij aanvang, na 6 en na 12 maanden (wat wordt beschouwd als een within-subject factor) en (2) ook de verschillen tussen verschillende groepen, als een between-subject factor). Post-hoc vergelijkingen worden uitgevoerd met Bonferroni's correctie. De F- en respectievelijke P-waarden tussen de verschillende meetperioden worden berekend. Verder worden de F- en P-waarden tussen meetmoment van de biomarkers en de onderzochte groepen geschat. De Greenhouse-Geisser-, Huynh-Feldt- of Lower-Bound-correcties worden gebruikt wanneer de sfericiteitsaanname, zoals geëvalueerd door Mauchly's test, niet wordt voldaan. De procentuele veranderingen van de onderzochte variabelen na interventie worden ook vergeleken door one-way ANOVA. Alle statistische tests zijn tweezijdig en een p-waarde < 0,05 wordt als statistisch significant beschouwd.