Effekten af Lipoprotein (a) på arteriel stivhed, endotelfunktion og myokardial deformation (Lpa_endo)

1. Introduktion Lipoprotein(a), eller Lp(a), er en type lipoprotein, der strukturelt ligner LDL (low-density lipoprotein), men bærer et ekstra protein kaldet apolipoprotein (a). Nylige data fastslår Lp(a) som en prædisponerende risikofaktor for hjerte-kar-sygdomme, såsom koronar arteriesygdom, slagtilfælde og aortaklapsstenose. Forhøjede niveauer af Lp(a) bidrager til disse tilstande ved at fremme aterosklerose. Dets niveauer er primært genetisk bestemt, med minimal indflydelse fra kost og livsstil. Dette gør det til en væsentlig faktor for vurdering af hjerte-kar-risiko, især hos personer med en familiehistorie af koronar arteriesygdom eller patienter, der oplever tidlige hjerte-kar-problemer på trods af normale lipidniveauer.

   Mens Lp(a)-niveauer kan variere stort, er den generelt accepterede tærskel for øget hjerte-kar-risiko 50 mg/dL (eller 125 nmol/L). Personer med niveauer over denne grænse har en højere risiko for hjerte-kar-hændelser. Det estimeres, at 20-30% af den generelle befolkning har forhøjede Lp(a)-niveauer, hvilket gør det til en almindelig risikofaktor. I øjeblikket er der ikke bredt tilgængelige behandlinger specifikt rettet mod Lp(a)-niveauer, selvom PCSK9-hæmmere og inclisiran har vist lovende resultater i kliniske forsøg.

2. Formålet med undersøgelsen Der er i øjeblikket utilstrækkelig bibliografisk dokumentation vedrørende effekten af Lp(a) på arteriel stivhed, endotelfunktion og deformation af venstre atrium og venstre ventrikel.

   Det primære formål med denne undersøgelse er at undersøge effekten af Lp(a)-niveauer på arteriel stivhed, endotelfunktion og venstre atriums (LA) og venstre ventrikels (LV) deformation over en 6-måneders opfølgningsperiode.

   Sekundært vil undersøgelsen undersøge:

   • a) Forekomsten af større uønskede hjerte-kar-hændelser (MACE), herunder hjerte-kar-død, akut myokardieinfarkt og akut slagtilfælde.
   • b) Korrelationen mellem MACE-forekomst og parametre for arteriel stivhed, endotelfunktion og LA/LV-deformation.
   • c) Niveauerne af oxidative belastningsmarkører.

3. Materialer og Metoder

Denne observationsundersøgelse vil omfatte voksne i alderen 18-75 år (uanset køn), der besøger ambulatorierne på 2. Universitetskardiologiklinik på "Attikon" Generel Hospital. Alle deltagere vil underskrive et samtykkeerklæring. En fuld medicinsk historie, klinisk undersøgelse og blodprøvetagning vil blive udført for at bestemme niveauer af Total Kolesterol, LDL-C, HDL-C, triglycerider og Lp(a) ved hvert besøg. Deltagerne vil blive opdelt i tre grupper:

• Gruppe A: Lp(a) ≥50 mg/dL med Total Kolesterol<200 mg/dl
• Gruppe B: Lp(a) <50 mg/dL med Total Kolesterol>200 mg/dl
• Gruppe C (Kontrol): Lp(a) <50 mg/dL med Total Kolesterol<200 mg/dl Udelukkelseskriterierne omfatter: 1. Tidligere autoimmune/autoinflammatoriske sygdomme, 2. Alvorlig klapsygdom, 3. Alvorlig kronisk nyresygdom (eGFR<60 ml/min/1.73 m2), 4. Aktiv graviditet og 5. Alvorlig leversvigt.

I hver gruppe forventes n ≥ 100 deltagere.

Følgende målinger vil blive udført for hver gruppe ved baseline og efter 6 og 12 måneder efter tilmelding:

• Arteriel Stivhed: Bestemmelse af carotid-femoral pulsbolgehastighed (cf-PWV) ved hjælp af Complior SP-enheden og 24-timers pulsbolgeanalyse med Mobil-O-Graph-enheden. Pulsbolgehastighed er guldstandarden for evaluering af arteriel stivhed [21,22]. Forskerne vil bruge to ikke-invasive tryksensorer til at optage carotid- og femoral-bolgeformer. Forskerne vil måle afstanden mellem de to arterielle steder med et målebånd. PWV beregnes ved at dividere afstanden med overførslen mellem bolger (m/s). De passende korrektioner af PWV blev anvendt, efter at standard PWV-outputværdierne blev multipliceret med 0,8 [22]. Centralt systolisk blodtryk (cSBP, mmHg) og centralt diastolisk blodtryk (cDBP, mm Hg) vil blive målt ved hjælp af Complior.
• Endotelfunktion: Forskerne vil måle den perfunderede grænseregion (PBR) af de sublinguale arterielle mikrokarsler (interval fra 4 til 25 µm) ved hjælp af Sidestream Darkfield (SDF) billeddannelse (Microscan, Glycocheck, Microvascular Health Solutions Inc., Salt Lake City, Utah, USA) [18]. Denne teknik muliggør vurdering af endotelglycocalyx ved hjælp af en ikke-invasiv metode. PBR er det cellefattige lag, som skyldes faseadskillelsen mellem de flydende røde blodlegemer og plasma på overfladen af mikrokarslumen. PBR inkluderer den mest luminale del af glycocalyx, der tillader cellepenetration. Således er en forøget PBR i overensstemmelse med dybere penetration af erytrocytter ind i glycocalyx, hvilket indikerer et tab af glycocalyx-barrieregenskaber og er en markør for reduceret glycocalyx-tykkelse. Målingen af endotelglycocalyx-tykkelse ved hjælp af SDF-billeddannelse er let at udføre (varighed 3 minutter) og er ikke påvirket af operatørens færdigheder. Desuden har den en standardiseret metodologi, giver målinger af flere prøvesteder (>3.000 vaskulære segmenter af sublingual mikrovaskulatur), har meget god reproducerbarhed og foreslås derfor som en gyldig metode til at vurdere endotelintegritet af European Society of Cardiology Working Group on Peripheral Circulation. PBR-målingerne er uafhængige af RBC-fyldning af karsegmenterne (hematokrit), fordi softwaren kun inkluderer karsegmenter, der har en fyldningsprocent på mere end 50% [9,18]. Derfor vælges karsegmenter kun, når mindst 11 af de 21 linjemarkører har et positivt signal for tilstedeværelse af en erytrocyt. Således er PBR-værdier uafhængige af hematokrit og afspejler en beskadiget glycocalyx, der er mere tilgængelig for cirkulerende erytrocytter.
• Kardial Deformation: Hos alle deltagere vil forskerne måle longitudinal systolisk strain fra standard todimensionelle (2D) optagelser (billedhastighed: 70-80/sekund) ved hjælp af dedikeret software (EchoPac 206, GE Healthcare). Global longitudinal strain (GLS) beregnes ved hjælp af 17 LV-segmentmodellen billeddannet fra apikale kammerudsigter (4-, 2- og 3-kammerudsigt). De myokardiale deformationer ved basale, midtventrikulære og apikale segmenter blev gennemsnitligt til GLS. Alle variable repræsenterer middelværdimålinger taget i tre på hinanden følgende hjertecyklusser. Inter- og intra-observer variabilitet af GLS var henholdsvis 8 og 5%. LA-funktion vil blive evalueret ved hjælp af transthorakal ekkokardiografisk speckle-tracking strain billeddannelse. En speckle-tracking algoritme blev anvendt på LA-myokardiet i apikale 4- og 2-kammerudsigter. Interesseområdets bredde blev justeret til tykkelsen af LA-væggen, og hjertecyklussen blev afgrænset ved at angive QRS-start. LA-reservoir strain, et mål for LA-compliance, blev målt som peak longitudinal strain (gennemsnit af alle 12 segmenter i apikale 4- og 2-kammerudsigter) under ventrikulær systole, med QRS-start som referencepunkt. Efter at have defineret ved anatomisk M-mode mitral- og aortaklapsåbning og -lukning samt atrialkontraktion, vil LA longitudinal strain, opnået ved 2D strain, blive målt i alle tre atriale faser (reservoir, leder og atrialkontraktion) som følger: reservoirperiode blev defineret som intervallet mellem mitralklapslukning og mitralklapsåbning, lederperiode som intervallet mellem mitralklapsåbning og starten af atrialkontraktion, som vurderet ved anatomisk M-mode, og kontraktil periode som intervallet mellem starten af atrialkontraktion, som vurderet ved anatomisk M-mode, og mitralklapslukning. Derefter blev atriendeformationen for hver periode beregnet ved at måle den respektive forskel i strain (værdier ved slutningen minus værdier ved begyndelsen).
• Oxidativ Belastning: Bestemmelse af malondialdehyd (MDA) og proteinkarbonyler (PCs) niveauer som markører for oxidativ stress. MDA vil blive estimeret spektrofotometrisk med et kommercielt kit (Oxford Biomedical Research, Rochester Hills, MI) af kolorimetrisk test for lipidperoxidation (måleområde, 1-20 nmol/l). For bestemmelse af PCs (nmol/mL) brugte forskerne den spektrofotometriske vurdering af 2,4-dinitrophenylhydrazin-derivater af PCs.
• Statistisk Analyse: Statistisk analyse vil blive udført ved anvendelse af SPSS version 29 (IBM SPSS Statistics, Inc., Chicago, IL). Alle kontinuerte variable vil blive præsenteret som middelværdi ±SD, hvis de er normalfordelte, som angivet af Kolmogorov-Smirnov og Shapiro-Wilk normalitetstests. I tilfælde af ikke-normal fordeling vil transformation til rang blive udført. Nominelle variable præsenteres som procenter. Korrelationsanalyse vil blive udført via Spearman- eller Pearson-korrelationstests, baseret på datadistribution. Kategoriske variable analyseres via enten Chi-square-tests eller Fishers eksakte tests, som passende. ANOVA for gentagne målinger vil blive brugt til (1) målinger af ovennævnte i begyndelsen, ved 6 og ved 12 måneder (som betragtes som en within-subject faktor) og (2) også forskellene mellem forskellige grupper, som en between-subject faktor). Post-hoc sammenligninger vil blive udført med Bonferronis korrektion. F- og de respektive P-værdier mellem de forskellige tidsperioder for målinger vil blive beregnet. Desuden vil F- og P-værdierne mellem målingstidspunkt for biomarkørerne og de undersøgte grupper blive estimeret. Greenhouse-Geisser-, Huynh-Feldt- eller Lower-Bound-korrektioner vil blive brugt, når kugleformighedsantagelsen, som evalueret af Mauchlys test, ikke bliver opfyldt. Procentændringerne af de undersøgte variable efter intervention vil også blive sammenlignet ved one way ANOVA. Alle statistiske tests er to-halede, og en p-værdi < 0,05 betragtes som statistisk signifikant.