Biodostępność i korzystne właściwości związków bioaktywnych kawy i kakao (P4L)

Aby osiągnąć wyżej opisane cele, przeprowadzone zostanie badanie biodostępności u ludzi. Badanie interwencyjne z udziałem ludzi będzie się składać z krótkoterminowego, randomizowanego badania krzyżowego, ukierunkowanego na pomiar średnich dziennych stężeń każdego krążącego metabolitu pochodzącego z kawy/kakao (CCDCM) dla czterech głównych grup fitochemikaliów kawy/kakaa (metyloksantyny, trygonelina , fenole, diterpeny). Na podstawie różnych wzorców konsumpcji, to badanie na wolności (chociaż pewne minimalne ograniczenia dietetyczne zostaną podane na dwa dni przed pobraniem próbek) uwzględni również wpływ powtarzanych dawek na biodostępność substancji bioaktywnych kawy/kakaa.

Badanie będzie przebiegać według schematu z powtarzaną dawką, 3-ramiennego, naprzemiennego. Ten projekt został wybrany zgodnie z wytycznymi ILSI dotyczącymi badań interwencyjnych z produktami dietetycznymi.

Badani zostali przydzieleni do spożywania następujących kuracji w losowej kolejności przez 1 miesiąc:

1. 1 filiżanka kawy espresso dziennie („mała konsumpcja”) o godzinie 9:00 rano
2. 3 filiżanki kawy espresso dziennie („wysocy konsumenci”) o godzinie 9:00, 12:00 w południe i 15:00
3. 1 filiżanka kawy espresso do śniadania o 9:00 oraz 2 produkty na bazie kakao zawierające kawę dwa razy dziennie (o godzinie 12.00 i 15.00). Grupa otrzyma nazwę „średni konsumenci” ze względu na zawartość kofeiny w produktach na bazie kakao zawierających kawę.

Minimalne zalecenia dotyczące unikania innych źródeł fitochemikaliów kawy/kakao oprócz tych, które zostały wprowadzone w ramach wyznaczonego zabiegu, oraz standaryzacji czasu spożycia kawy zostaną podane na dwa dni przed każdym dniem pobierania próbek iw dniu pobierania próbek. Czas kolacji i jej skład zostaną również ustandaryzowane na dzień przed pobraniem próbek. W nocy można było pić tylko wodę. W dniu pobierania próbek (tj. ostatniego dnia każdego okresu interwencji) badani będą kierowani rano do ambulatorium, gdzie zostaną pobrane podstawowe próbki krwi i moczu na czczo. Wtedy konsumenci o niskim i wysokim poziomie wypijają odpowiednio jedną lub trzy filiżanki kawy espresso (pierwsza kawa bez cukru, słodzików i mleka; dwie ostatnie z dodatkiem 5 g cukru), podczas gdy konsumenci średni wypiją filiżankę kawa espresso i 2 produkty na bazie kakao zawierające kawę dwa razy w ciągu dnia, zgodnie z powyższym harmonogramem. Po spożyciu pierwszej kawy wraz ze śniadaniem wolnym od fitochemii (ciasto), w wybranych punktach czasowych w ciągu kolejnych 24 godzin zostaną pobrane próbki krwi i moczu. Pięć godzin po spożyciu pierwszej kawy uczestnicy otrzymają wystandaryzowany posiłek mieszany (kanapka z szynką i serem) wolny od związków fitochemicznych związanych z kawą/kakao. Woda będzie dostępna ad libitum. Dwadzieścia cztery godziny po otrzymaniu leczenia zostaną również pobrane próbki krwi i moczu w celu oceny powrotu do wartości wyjściowych. Ponadto zostaną zmierzone cechy antropometryczne i ciśnienie krwi (BP).

Zmienne społeczno-demograficzne zostaną ocenione za pomocą ogólnego kwestionariusza wypełnianego podczas rekrutacji. Kwestionariusz będzie również zawierał pytania przydatne do określenia możliwych kryteriów wykluczenia (np. diagnostyka chorób, regularne przyjmowanie leków, alergia pokarmowa). Nawyki żywieniowe ochotników zostaną również ocenione podczas rekrutacji za pomocą półilościowego kwestionariusza częstotliwości spożywania posiłków (FFQ) w celu oceny całkowitej zdolności antyoksydacyjnej diety. Ponadto spożycie żywności przez uczestników i zgodność z wymogami badania zostaną ocenione za pomocą 3-dniowych zapisów diety, podawanych podczas każdego okresu interwencji w dwóch punktach czasowych: i) w środku każdego okresu interwencji przez dwa dni powszednie i weekend dnia, oraz ii) na koniec każdego okresu interwencji, 2 dni przed dniem pobrania próbek i dniem pobrania próbek. Nawykowy poziom aktywności fizycznej każdego uczestnika zostanie zmierzony za pomocą zatwierdzonych międzynarodowych kwestionariuszy aktywności fizycznej.

Pobieranie krwi odbywać się będzie w Oddziale Ambulatoryjnym Oddziału Lekarsko-Chirurgicznego. Pobrania krwi dokona lekarz. Cewnik żylny zostanie wprowadzony do żyły przedłokciowej, a próbki krwi od każdego pacjenta zostaną zebrane do specjalnych probówek w ciągu 24 godzin. Pobranie krwi w punkcie czasowym 24h po pierwszym spożyciu kawy zostanie wykonane przez nakłucie żyły. Próbki moczu będą pobierane w różnych okresach czasu za pomocą kolektorów moczu.

Próbki krwi zostaną odwirowane, a osocze, surowica i komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) zostaną zebrane, podzielone na porcje i przechowywane w temperaturze -80°C do dalszego przetwarzania. Próbki moczu zostaną podzielone na porcje i przechowywane w temperaturze -80°C do dalszego przetwarzania.

Głównym wybranym punktem końcowym badania jest ilościowe określenie średniego dziennego stężenia krążących metabolitów fenolowych pochodzących z kawy w osoczu, podczas gdy badanie biodostępności innych krążących bioaktywnych substancji pochodzących z kawy, biodostępności krążących fitochemikaliów pochodzących z kakao oraz ocena markerów kardiometabolicznych zostanie uznanych za drugorzędowe punkty końcowe.