Pozyskiwanie próbek tkanek do hodowli komórkowych i analiz

Tło: Obecnie jest oczywiste, że praktycznie każda ludzka tkanka pourodzeniowa zawiera pewien typ populacji komórek macierzystych/progenitorowych, który jest odpowiedzialny za obrót i naprawę tkanek. Nasze poprzednie badania zidentyfikowały podzbiór ludzkich komórek zrębowych szpiku kostnego (BMSC), które są multipotentne i zdolne do regeneracji kości, chrząstki, zrębu mielopodtrzymującego i adipocytów, podczas gdy komórki zrębowe pochodzące tylko z ludzkiej śledziony (SpSC) i grasicy (TSC) tworzą podścielisko mielopodtrzymujące. Ostatnie badania sugerują, że ludzkie komórki zrębowe pochodzące z tkanki tłuszczowej (ASC) mogą być podobne do BMSC, podczas gdy komórki zrębowe pochodzące z ludzkiej skóry właściwej (DSC) nie mają żadnej z tych właściwości (i służą jako kontrola negatywna dla większości eksperymentów in vitro i in vivo) . Nie ustalono jeszcze, jak podobne lub odmienne są te różne populacje komórek zrębowych. Potrzebne jest profilowanie molekularne, aby porównać te różne populacje i wyjaśnić czynniki, które kontrolują różnicowanie komórek zrębowych w jeden lub inny typ komórek.

Cele: Odpady chirurgiczne (kości z czerwonym szpikiem, skórą właściwą, śledzioną, grasicą i tkanką tłuszczową) pochodzące od mężczyzn i kobiet w różnym wieku poddawanych klinicznie wskazanym zabiegom chirurgicznym zostaną wykorzystane do założenia hodowli komórek zrębu w celu zbadania profilu molekularnego i zdolności różnicowania zrębu populacji komórek z różnych tkanek i dalej scharakteryzować regulację ekspresji genów i syntezę białek w tych komórkach macierzystych/progenitorowych.

Kwalifikacja: Każdy pacjent poddawany klinicznie wskazanemu zabiegowi chirurgicznemu polegającemu na usunięciu szpiku kostnego, skóry właściwej, śledziony, grasicy i tkanki tłuszczowej, który nie ma: 1) choroby metabolicznej kości w wywiadzie, 2) żadnej postaci raka lub byli leczeni chemioterapią lub napromienianiem z powodu raka i 3) nie otrzymywali środków, o których wiadomo, że wpływają na metabolizm kości.

Projekt: Normalne odpady chirurgiczne (kości z czerwonym szpikiem, skórą właściwą, śledzioną, grasicą i tkanką tłuszczową) z zabiegów wykonywanych na mężczyznach i kobietach w szpitalu podmiejskim zostaną umieszczone w pożywce (dostarczonej przez NIDCR) i wysłane do NIDCR w celu ustalenia szczepów hodowli komórkowej. Zarejestrowany zostanie tylko wiek, płeć i miejsce, z którego pobrano tkankę. Hodowle komórkowe z różnych tkanek zostaną wykorzystane do określenia ich charakteru fenotypowego i właściwości różnicowania poprzez profilowanie molekularne oraz do badań mających na celu wyjaśnienie regulacji ekspresji genów i syntezy białek. Podobnie, część próbek uzyskanych w Szpitalu Podmiejskim zostanie wykorzystana do wygenerowania skrawków histologicznych normalnych tkanek, które zostaną wykorzystane do badań przesiewowych nowo opracowanych przeciwciał i sond molekularnych. W niektórych przypadkach RNA zostanie wyekstrahowane z tkanek do analizy RT-PCR. Te próbki (komórki, skrawki, mRNA) będą również służyć jako normalne kontrole do badań przeprowadzonych na próbkach uzyskanych od pacjentów z różnymi chorobami rekrutowanych do NIH zgodnie z obowiązującymi protokołami NIH (97-D-0055, 97-D-0145, 01-D- 0184).