Identyfikacja czynników ochronnych i pogarszających stłuszczeniowe zapalenie wątroby (NASH).

Ostatnie badania epidemiologiczne we Francji wykazały duże rozpowszechnienie otyłości (12,4%) i jej silny wzrost w ciągu ostatnich 20 lat. Wśród wielu powikłań związanych z otyłością do najczęstszych należą powikłania wątrobowe (stłuszczenie i stłuszczeniowe zapalenie wątroby (NASH)). Nasza ostatnia praca wykazała, że ​​tkanka tłuszczowa, wzorując się na tkance wątrobowej, również wyrażała CRP, hepcydynę i IL-6 na poziomie genów i białek. Zauważyliśmy również, że 5% naszych pacjentów pomimo otyłości prezentowało prawidłową wątrobę bez stłuszczenia.

Głównym celem niniejszej pracy będzie określenie profilu ekspresji genów za pomocą mikromacierzy w wątrobie, który mógłby pozwolić na odróżnienie osób otyłych z prawidłową wątrobą od osób ze stłuszczeniowym zapaleniem lub stłuszczeniem wątroby. Badania genowe będą początkowo prowadzone u osób z otyłością olbrzymią bez cukrzycy (kobiety, wskaźnik masy ciała > 40 kg/m2). Wybierzemy próbę 10 pacjentów z prawidłową wątrobą, 10 pacjentów z NASH i 10 pacjentów z prostym stłuszczeniem. Te badania genowe zostaną przeprowadzone w wątrobie i trzewnej tkance tłuszczowej tych samych pacjentów, co pozwoli na ocenę współzależności między wątrobą a tkanką tłuszczową. Włączymy również 10 pacjentów z nadwagą i NASH (badanie dotyczy wyłącznie biopsji wątroby). Kontrole wątroby (10) zostaną dostarczone z oddziału chirurgii Pr Jeana Gugenheima i praktycznie wszystkie są dostępne. Są „zdrową” tkanką w pobliżu łagodnych guzów wątroby. Wykorzystane zostaną również komercyjne ARN (Biosciences, Stratagene). Po zidentyfikowaniu tych profili ekspresji genów u ograniczonej liczby pacjentów, zwalidujemy te profile ekspresji genów u bardziej znaczącej liczby pacjentów (30 do 45 pacjentów z NASH w porównaniu z 30 do 45 pacjentów z prostym stłuszczeniem).

Celami drugorzędnymi będą:

Aby porównać profil ekspresji genów między wątrobą a tkanką tłuszczową trzewną i podskórną osób z chorobliwą otyłością Po zidentyfikowaniu grupy interesujących genów, których ekspresja jest zmodyfikowana u niewielkiej liczby pacjentów z NASH, kontynuujemy nasze badanie z bardziej ograniczoną liczbą genów.

• Aby zweryfikować u większej liczby pacjentów modyfikacje ekspresji tych genów metodą PCR w czasie rzeczywistym
• Określenie miejsca ekspresji tych czynników w wątrobie lub tkance tłuszczowej za pomocą analizy immunohistochemicznej
• Określenie szybkości ekspresji tych czynników w wątrobie lub tkance tłuszczowej za pomocą analizy biochemicznej (Western blot)
• W końcu można by przeprowadzić dawkowanie surowicy w celu określenia, czy białka surowicy mogą stanowić wskaźnik predykcyjny NASH lub stłuszczenia.

Wykorzystamy serię otyłych pacjentów z CHU w Nicei, u których zaprogramowano chirurgiczne podejście do otyłości. Badania przedoperacyjne obejmują ocenę kliniczno-biologiczną. Podczas interwencji systematycznie będą wykonywane biopsje wątroby i tkanki tłuszczowej do celów badawczych. Wykorzystamy również biopsje wątroby wykonane u pacjentów z nadwagą i NASH.

Wykonalność pracy nie stanowi żadnego problemu. Oddział chirurgii przeprowadza miesięcznie 10 operacji otyłości. Mamy już serię 280 pacjentów. Musimy uwzględnić 150 pacjentów, aby móc pozyskać wystarczającą liczbę pacjentów z prawidłową wątrobą. Dla pozostałych pacjentów wykorzystamy bank tkanek, który jest już prowadzony, a pacjenci wyrazili na to zgodę. Wreszcie musimy stworzyć bank tkanek wątroby dla pacjentów z nadwagą. Wszystkie te podstawowe techniki są kontrolowane w zespole z INSERM U 568. Oczekiwane wyniki: Dzięki tej strategii moglibyśmy wyselekcjonować czynniki ochronne i pogarszające stłuszczeniowe zapalenie wątroby (NASH), które będą w stanie doprowadzić do zidentyfikowania predykcyjnych markerów biologicznych zmian stłuszczeniowego zapalenia wątroby, a tym samym do zidentyfikowania pacjentów zagrożonych uszkodzeniem wątroby. Czynniki te mogą również służyć jako przyszłe cele terapeutyczne.