Identificação de fatores de proteção e agravamento da esteatohepatite (NASH)

Estudos epidemiológicos recentes na França mostraram uma forte prevalência de obesidade (12,4%) e seu forte aumento nos últimos 20 anos. Dentre as múltiplas complicações relacionadas à obesidade, as hepáticas (esteatose e esteato-hepatite (NASH)) estão entre as mais frequentes. Nosso trabalho recente mostrou que o tecido adiposo, a exemplo do tecido hepático, também expressa a PCR, a hepcidina e a IL-6 em nível gênico e proteico. Observamos também que 5% dos nossos pacientes, apesar da obesidade, apresentavam fígado normal sem esteatose.

O principal objetivo deste trabalho será identificar um perfil de expressão gênica por microarray no fígado que permita diferenciar os indivíduos obesos com fígado normal daqueles com esteato-hepatite ou esteatose. Os estudos genéticos serão realizados inicialmente em obesos mórbidos sem diabetes (mulheres, índice de massa corporal > 40 kg/m2). Selecionaremos uma amostra de 10 pacientes com fígado normal, 10 pacientes com NASH e 10 pacientes com esteatose simples. Esses estudos gênicos serão realizados no fígado e no tecido adiposo visceral desses mesmos pacientes o que permitirá avaliar a inter-relação entre o fígado e o tecido adiposo. Também incluiremos 10 pacientes com sobrepeso e NASH (estudo apenas na biópsia hepática). Os controles de fígados (10) serão fornecidos pelo departamento de cirurgia do Pr Jean Gugenheim e estão praticamente todos disponíveis. São tecidos "saudáveis" próximos a tumores benignos hepáticos. ARN comercial (Biosciences, Stratagene) também será usado. Após a identificação desses perfis de expressão gênica em um número restrito de pacientes, iremos validar esses perfis de expressão gênica em um número mais significativo de pacientes (30 a 45 pacientes com NASH em comparação com 30 a 45 pacientes com esteatose simples).

Os objetivos secundários serão:

Comparar o perfil de expressão gênica entre o fígado e o tecido adiposo visceral e subcutâneo de obesos mórbidos com um número mais restrito de genes.

• Validar num número mais significativo de doentes as modificações de expressão destes genes por uma abordagem por PCR em tempo real
• Determinar o local de expressão desses fatores no fígado ou tecido adiposo por análise imuno-histoquímica
• Determinar a taxa de expressão desses fatores no fígado ou tecido adiposo por análise bioquímica (Western blot)
• Uma dosagem sérica poderia finalmente ser realizada para determinar se as proteínas séricas poderiam constituir um índice preditivo de NASH ou esteatose.

Utilizaremos a série de pacientes obesos do CHU de Nice, cuja abordagem cirúrgica da obesidade foi programada. As explorações pré-operatórias incluem avaliações clínico-biológicas. Durante a intervenção, as biópsias de fígado e tecido adiposo serão sistematicamente realizadas para pesquisa. Também usaremos as biópsias hepáticas realizadas em pacientes com sobrepeso e NASH.

A viabilidade do trabalho não representa nenhum problema. O departamento de cirurgia realiza 10 cirurgias de obesidade por mês. Já temos uma série de 280 pacientes. Devemos incluir 150 pacientes para podermos obter um número suficiente de pacientes com fígado normal. Para os demais pacientes, usaremos o banco de tecidos que já está realizado e os pacientes já deram o consentimento. Finalmente, devemos constituir um banco de tecidos hepáticos para pacientes com excesso de peso. Todas estas técnicas fundamentais são controladas dentro da equipe do INSERM U 568 Resultados esperados: Poderíamos por esta estratégia selecionar fatores protetores e agravantes da esteato-hepatite (NASH) que poderão levar a identificar marcadores biológicos preditivos das lesões da esteato-hepatite e assim identificar pacientes com risco de lesões hepáticas. Esses fatores também podem servir como futuros alvos terapêuticos.