Słaba reakcja na stymulację jajników w programie zapłodnienia pozaustrojowego (IVF).

Bezpieczeństwo leczenia zapłodnieniem in vitro jest w dużym stopniu kwestionowane przez nieregularną indywidualną zmienność kontrolowanej hiperstymulacji jajników (COH). Jednym z różnorodnych czynników predykcyjnych jest AMH, który jest uważany za najbardziej czuły marker. Obecnie praktyki farmakogenetyki mogą przewidywać powodzenie stymulacji, a tym samym dostosowywać leczenie osiągając postęp w opiece nad pacjentem. Ponieważ skuteczność dawki hormonu folikulotropowego (FSH) jest silnie związana z powodzeniem COH, gen FSHR jest traktowany jako główny kandydat do wyjaśnienia różnic w wynikach COH. Ponadto receptory estrogenowe są ważnymi genami dla poprawy diagnostyka i leczenie niepłodności.

Materiały i metody: Począwszy od czerwca 2013 r. pary z niewyjaśnioną niepłodnością, poszukujące pierwszego cyklu leczenia IVF/ICSI, będą rekrutowane w „centrum płodności AL shark Al-Awsat”. W tym prospektywnym badaniu 216 par spełniających nasze kryteria włączenia zostanie zapisanych do tego badania po uzyskaniu świadomej zgody. Stymulacja jajników zostanie przeprowadzona zgodnie z protokołem antagonisty GnRH z ustaloną dzienną poranną dawką ludzkiej gonadotropiny menopauzalnej (HMG) [ampułki Merional® 75 IU, IBSA institut] we wstrzyknięciu domięśniowym rozpoczynającym się w 2. dniu cyklu. Na podstawie masy ciała pacjentki wskaźnika i profilu hormonalnego, dzienna dawka HMG zostanie dostosowana do (225 j.m.) dla uczestników z poziomem AMH > 1,5 ng/ml i/lub poziomem FSH ≤ 8 mIU/ml oraz do (300 j.m.) dla uczestników z poziomem AMH < 1,5 ng/ml i/lub poziom FSH > 8 mIU/ml, dawki zostaną zwiększone o 75 IU w przypadku BMI > 30 kg/m2. W 2. dniu cyklu miesiączkowego u wszystkich pacjentek rozpocznie się podawanie HMG i będzie ono utrzymywane przez 9-11 dni, w zależności od indywidualnej odpowiedzi jajników każdej uczestniczki ocenianej za pomocą przezpochwowej folikulometrii ultrasonograficznej rozpoczynającej się w 7. dniu cyklu i kontynuowanej co drugi dzień dnia do dnia wstrzyknięcia ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej (hCG). W 7. dniu cyklu, antagonista GnRH Cetrorelix 0,25 mg [Cetrotide® 0,25 mg strzykawki, Merck Serono] zostanie wprowadzony jako codzienne wstrzyknięcia podskórne i będzie kontynuowany do dnia wywołania owulacji. Wreszcie, gdy co najmniej 3 pęcherzyki osiągną średnicę 17 mm, owulacja zostanie wywołana przez pojedyncze domięśniowe wstrzyknięcie 10 000 IU hCG [Choriomon® 5000 IU ampułek, IBSA institut]. 36 godzin później zostanie przeprowadzone pobranie oocytów pod kontrolą ultrasonografii przezpochwowej. Zgodnie z naszym głównym wynikiem, liczbą zebranych oocytów, pacjenci zostaną sklasyfikowani jako słabo reagujący (4 oocyty lub mniej) i zostaną uznani za dobrze reagujących, jeśli wytworzyli 5 lub więcej oocytów. Grupa dobrze reagujących będzie służyć jako grupa kontrolna.

Genotypowanie: Krew obwodowa zostanie pobrana od każdego pacjenta do probówki zawierającej EDTA. Genomowy DNA zostanie wyekstrahowany z limfocytów krwi obwodowej przez w pełni zautomatyzowany system QIAcube przy użyciu zestawu QIAamp DNA Blood Mini Kit (250) oraz QIAamp DNA Blood Mini Accessory Set B, nr kat. nie. 1043369. Detekcja polimorfizmów SNP ESR2 (+1730G>A) (rs4986938), FSHR p.Thr307Ala (c.919A>G, rs6165) i FSHR p.Asn680Ser (c.2039A>G, rs6166) zostanie przeprowadzona przy użyciu systemu TaqMan metodą łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) w czasie rzeczywistym. Startery i sondy zostaną dostarczone przez zastosowany biosystem, firmę Life Technologies. Testy zostaną przeprowadzone z TaqMan Universal Master Mix.

Analiza statystyczna: Dane zostaną opisane statystycznie w kategoriach średniej i odchylenia standardowego, w przypadku danych ilościowych i częstości (liczba przypadków) oraz częstości względnych (w procentach) w przypadku danych jakościowych. Równowaga Hardy'ego-Weinberga (H-W) dla każdego polimorfizmu zostanie przetestowana przy użyciu testu chi-kwadrat. Porównanie zmiennych ilościowych zostanie przeprowadzone przy użyciu testu t dla nieparzystych przy porównywaniu 2 kategorii oraz jednokierunkowej analizy wariancji (ANOVA) z testem post hoc przy porównywaniu więcej niż 2 kategorii.

W celu porównania danych kategorycznych zostanie przeprowadzony test chi-kwadrat. Dokładny test zostanie użyty zamiast tego, gdy oczekiwana częstotliwość jest mniejsza niż 5.

Częstotliwości genotypów i alleli zostaną porównane między grupami chorobowymi i kontrolnymi za pomocą testów chi-kwadrat. Zostanie obliczony iloraz szans (OR) z 95% przedziałami ufności. Wartość prawdopodobieństwa (wartość P) mniejsza niż 0,05 zostanie uznana za istotną statystycznie. Wszystkie obliczenia statystyczne zostaną wykonane przy użyciu oprogramowania SPSS (Statistical Package for the Social Science; SPSS Inc., Chicago, IL, USA) w wersji 22.