LRP1 i rak jelita grubego

Rak jelita grubego (CRC) jest poważnym problemem zdrowia publicznego we Francji i na świecie. CRC jest trzecim najczęstszym rakiem pod względem zachorowalności i śmiertelności we Francji. Zdecydowana większość tych nowotworów to gruczolakoraki, które pojawiają się sporadycznie i rozwijają się ze zmian prekursorowych: gruczolaka. Wszystkie CRC z tym samym stadium choroby nie mają takiego samego rokowania. Zidentyfikowano różne parametry jako czynniki wpływające na rokowanie i umożliwiające dostosowanie leczenia. Złymi czynnikami histoprognostycznymi są obecność naczyń guza i naciekanie nerwów lub podtyp gruczolakoraka śluzowego. Na poziomie molekularnym obecność niestabilności mikrosatelitarnej (MSI) poprawia rokowanie, natomiast obecność mutacji BRAF jest niezależnym złym czynnikiem rokowniczym.

Receptor białkowy 1 związany z lipoproteinami o niskiej gęstości (LRP-1) jest wielofunkcyjnym receptorem endocytarnym należącym do rodziny receptorów LDL. Bierze udział w usuwaniu enzymów odpowiedzialnych za degradację macierzy zewnątrzkomórkowej: proteaz macierzy. Ta rola modulatora proteolizy macierzy powiązana z funkcją regulatora migracji komórek nadaje temu białku rolę przeciwnowotworową. Właściwości przeciwnowotworowe LRP-1 wykazano in vitro w raku tarczycy. W badaniach tych utrata ekspresji LRP-1 lub spadek aktywności LRP-1 był skorelowany ze wzrostem migracji i inwazji komórek nowotworowych. Jednak odwrotny efekt zaobserwowano w liniach komórkowych raka prostaty.

Kliniczny wpływ poziomu ekspresji LRP-1 na całkowite przeżycie chorych na raka oceniono w dwóch badaniach: jednym na pacjentach z rakiem wątrobowokomórkowym i drugim na pacjentach z pierwotnymi gruczolakorakami płuc. W obu badaniach spadek ekspresji immunohistochemicznej i genowej LRP-1 korelował ze spadkiem przeżycia całkowitego. Do tej pory opublikowano tylko jedno badanie ekspresji immunohistochemicznej LRP-1 w CRC. To badanie pokazuje, że komórki gruczolakoraka wyrażają LRP-1, ale w prawie połowie przypadków słabiej niż w normalnych komórkach okrężnicy. Do tej pory nie badano klinicznego i prognostycznego wpływu ekspresji LRP-1 na raka okrężnicy i jej związku z określonym profilem molekularnym lub morfologicznym.

W tej pracy badacze będą badać immunohistochemiczną i genową ekspresję LRP-1 w dobrze scharakteryzowanej serii CRC.

Głównym celem tego badania jest zbadanie, metodami genetycznymi i immunohistochemicznymi, roli LRP-1 w agresywności gruczolakoraków okrężnicy.

Drugim celem pracy jest poszukiwanie związków między poziomem ekspresji LRP-1 a profilami morfologicznymi lub molekularnymi gruczolakoraków okrężnicy

To badanie będzie pierwszym, które zbada ekspresję LRP-1 w dobrze scharakteryzowanych rakach okrężnicy o różnych profilach morfologicznych i molekularnych. Badanie to pomoże poszerzyć wiedzę na temat prognostycznej roli LRP-1 w raku jelita grubego i jego możliwego związku z parametrami klinicznymi, morfologicznymi lub molekularnymi.

Przeprowadzone zostanie retrospektywne badanie kohortowe w jednym ośrodku.

Badacze najpierw opracują listę wszystkich kwalifikujących się pacjentów, korzystając z zapytania w oprogramowaniu DIAMIC oddziału patologii z kodem składnika „okrężnica”, kodem uszkodzenia „gruczolakorak” i okresem „między 2006 a 2012”. Pacjenci cierpiący na zespół Lyncha lub inny rodzinny zespół nowotworowy zostaną wykluczeni z badania. Świadoma zgoda zostanie wysłana do wszystkich wybranych pacjentów.

Po uzupełnieniu listy pacjentów:

• Dokumentacja medyczna pacjentów zostanie przeanalizowana pod kątem: danych socjodemograficznych i klinicznych lokalizacji guza okrężnicy, obecności przerzutów synchronicznych, rodzaju i czasu leczenia, obserwacji pacjenta do dnia 01.06.2014 r. (występowanie przerzutów, nawrót choroby, zgon pacjenta) , ...).
• Centralny przegląd wszystkich preparatów patologicznych zostanie przeprowadzony pod kątem następujących kryteriów: podtyp gruczolakoraka zgodnie z klasyfikacją WHO 2010, różnicowanie, związek z polipami i ich typami, stadium pTNM, przód inwazji i pączkowanie, rodzaj zrębu, obecność i ilość martwicy nowotworu).

• Przeprowadzona zostanie analiza immunohistochemiczna tkanek utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie:

  • jakościowa i półilościowa ocena immunoekspresji LRP1 przeciwciałami anty-5A6 i 8G1
  • Badania fenotypu RER (immunohistochemia MLH1, MSH2, MSH6 i PMS2) oraz immunohistochemia BRAF V600E

• Analizy molekularne:

  • analiza ekspresji genu LRP-1 na zamrożonej tkance
  • dla wybranych przypadków: poszukiwanie niestabilności mikrosatelitarnej, poszukiwanie mutacji BRAF V600E, KRAS (eksony 2, 3 i 4) i NRAS (eksony 2, 3 i 4) na tkance utrwalonej w formalinie i zatopionej w parafinie

Analiza statystyczna:

• Opis danych: średnia i odchylenie standardowe dla zmiennych ilościowych; liczba i procent dla zmiennych kategorialnych.
• Porównanie guzów wykazujących wysoką ekspresję LRP-1 i guzów niewykazujących lub wykazujących niewielką ekspresję LRP-1 za pomocą analizy jednoczynnikowej (test Studenta i test Wilcoxona, dokładny Chi2 lub Fishera) i wieloczynnikowej (regresja logistyczna).
• Wyszukaj czynniki związane z wynikami pacjentów, w tym ekspresję LRP1, za pomocą analizy jednoczynnikowej (test log-rank) i wieloczynnikowej (model Coxa).

Rak jelita grubego (CRC) jest poważnym problemem zdrowia publicznego we Francji i na świecie. CRC jest trzecim najczęstszym rakiem pod względem zachorowalności i śmiertelności we Francji. Zdecydowana większość tych nowotworów to gruczolakoraki, które pojawiają się sporadycznie i rozwijają się ze zmian prekursorowych: gruczolaka. Wszystkie CRC z tym samym stadium choroby nie mają takiego samego rokowania. Zidentyfikowano różne parametry jako czynniki wpływające na rokowanie i umożliwiające dostosowanie leczenia. Złymi czynnikami histoprognostycznymi są obecność naczyń guza i naciekanie nerwów lub podtyp gruczolakoraka śluzowego. Na poziomie molekularnym obecność niestabilności mikrosatelitarnej (MSI) poprawia rokowanie, natomiast obecność mutacji BRAF jest niezależnym złym czynnikiem rokowniczym.

Receptor białkowy 1 związany z lipoproteinami o niskiej gęstości (LRP-1) jest wielofunkcyjnym receptorem endocytarnym należącym do rodziny receptorów LDL. Bierze udział w usuwaniu enzymów odpowiedzialnych za degradację macierzy zewnątrzkomórkowej: proteaz macierzy. Ta rola modulatora proteolizy macierzy powiązana z funkcją regulatora migracji komórek nadaje temu białku rolę przeciwnowotworową. Właściwości przeciwnowotworowe LRP-1 wykazano in vitro w raku tarczycy. W badaniach tych utrata ekspresji LRP-1 lub spadek aktywności LRP-1 był skorelowany ze wzrostem migracji i inwazji komórek nowotworowych. Jednak odwrotny efekt zaobserwowano w liniach komórkowych raka prostaty.

Kliniczny wpływ poziomu ekspresji LRP-1 na całkowite przeżycie chorych na raka oceniono w dwóch badaniach: jednym na pacjentach z rakiem wątrobowokomórkowym i drugim na pacjentach z pierwotnymi gruczolakorakami płuc. W obu badaniach spadek ekspresji immunohistochemicznej i genowej LRP-1 korelował ze spadkiem przeżycia całkowitego. Do tej pory opublikowano tylko jedno badanie ekspresji immunohistochemicznej LRP-1 w CRC. To badanie pokazuje, że komórki gruczolakoraka wyrażają LRP-1, ale w prawie połowie przypadków słabiej niż w normalnych komórkach okrężnicy. Do tej pory nie badano klinicznego i prognostycznego wpływu ekspresji LRP-1 na raka okrężnicy i jej związku z określonym profilem molekularnym lub morfologicznym.

W tej pracy badacze będą badać immunohistochemiczną i genową ekspresję LRP-1 w dobrze scharakteryzowanej serii CRC.

Głównym celem tego badania jest zbadanie, metodami genetycznymi i immunohistochemicznymi, roli LRP-1 w agresywności gruczolakoraków okrężnicy.

Drugim celem pracy jest poszukiwanie związków między poziomem ekspresji LRP-1 a profilami morfologicznymi lub molekularnymi gruczolakoraków okrężnicy

To badanie będzie pierwszym, które zbada ekspresję LRP-1 w dobrze scharakteryzowanych rakach okrężnicy o różnych profilach morfologicznych i molekularnych. Badanie to pomoże poszerzyć wiedzę na temat prognostycznej roli LRP-1 w raku jelita grubego i jego możliwego związku z parametrami klinicznymi, morfologicznymi lub molekularnymi.

Przeprowadzone zostanie retrospektywne badanie kohortowe w jednym ośrodku.

Badacze najpierw opracują listę wszystkich kwalifikujących się pacjentów, korzystając z zapytania w oprogramowaniu DIAMIC oddziału patologii z kodem składnika „okrężnica”, kodem uszkodzenia „gruczolakorak” i okresem „między 2006 a 2012”. Pacjenci cierpiący na zespół Lyncha lub inny rodzinny zespół nowotworowy zostaną wykluczeni z badania. Świadoma zgoda zostanie wysłana do wszystkich wybranych pacjentów.

Po uzupełnieniu listy pacjentów:

• Dokumentacja medyczna pacjentów zostanie przeanalizowana pod kątem: danych socjodemograficznych i klinicznych lokalizacji guza okrężnicy, obecności przerzutów synchronicznych, rodzaju i czasu leczenia, obserwacji pacjenta do dnia 01.06.2014 r. (występowanie przerzutów, nawrót choroby, zgon pacjenta) , ...).
• Centralny przegląd wszystkich preparatów patologicznych zostanie przeprowadzony pod kątem następujących kryteriów: podtyp gruczolakoraka zgodnie z klasyfikacją WHO 2010, różnicowanie, związek z polipami i ich typami, stadium pTNM, przód inwazji i pączkowanie, rodzaj zrębu, obecność i ilość martwicy nowotworu).

• Przeprowadzona zostanie analiza immunohistochemiczna tkanek utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie:

  • jakościowa i półilościowa ocena immunoekspresji LRP1 przeciwciałami anty-5A6 i 8G1
  • Badania fenotypu RER (immunohistochemia MLH1, MSH2, MSH6 i PMS2) oraz immunohistochemia BRAF V600E

• Analizy molekularne:

  • analiza ekspresji genu LRP-1 na zamrożonej tkance
  • dla wybranych przypadków: poszukiwanie niestabilności mikrosatelitarnej, poszukiwanie mutacji BRAF V600E, KRAS (eksony 2, 3 i 4) i NRAS (eksony 2, 3 i 4) na tkance utrwalonej w formalinie i zatopionej w parafinie

Analiza statystyczna:

• Opis danych: średnia i odchylenie standardowe dla zmiennych ilościowych; liczba i procent dla zmiennych kategorialnych.
• Porównanie guzów wykazujących wysoką ekspresję LRP-1 i guzów niewykazujących lub wykazujących niewielką ekspresję LRP-1 za pomocą analizy jednoczynnikowej (test Studenta i test Wilcoxona, dokładny Chi2 lub Fishera) i wieloczynnikowej (regresja logistyczna).
• Wyszukaj czynniki związane z wynikami pacjentów, w tym ekspresję LRP1, za pomocą analizy jednoczynnikowej (test log-rank) i wieloczynnikowej (model Coxa).