Ocena poziomu ErbB4/neureguliny-4 w płynie dziąsłowym i surowicy w chorobie przyzębia i stanie zdrowia

W sumie 80 osób, w tym 20 pacjentów z zapaleniem przyzębia stopnia II stopnia B (grupa P1), 20 pacjentów z zapaleniem przyzębia stopnia III stopnia B (grupa P2), 20 pacjentów z zapaleniem dziąseł (grupa G) i 20 zdrowych przyzębia osób kontrolnych (grupa H ) brały udział w badaniu.

Uczestnicy zostali podzieleni na cztery grupy w zależności od stanu zdrowia przyzębia zgodnie z raportami konsensusu Światowych Warsztatów 2017:

1. grupa zdrowych przyzębia (H): brak utraty przyczepu międzyzębowego (AL), głębokość sondowania (PD) ≤3 mm, wyniki krwawienia przy sondowaniu (BOP) <10%;
2. grupa zapalenia dziąseł (G): brak AL międzyzębowego, PD ≤3 mm i BOP ≥10%;
3. grupa II stopnia B zapalenia przyzębia (P1): 3 <PD ≤5 mm i 3 ≤ kliniczna utrata przyczepu przyczepu (CAL) <5 mm w jednym lub więcej miejscach z 2 niesąsiadujących zębów w co najmniej dwóch ćwiartkach jamy ustnej, pełna BOP w jamie ustnej ≥ 10% i brak utraty zębów z powodu zapalenia przyzębia
4. grupa III stopnia B zapalenia przyzębia (P2): PD >5 mm i CAL ≥ 5 mm w jednym lub kilku miejscach z 2 niesąsiadujących zębów w co najmniej dwóch ćwiartkach jamy ustnej, pełne BOP jamy ustnej >10% i utrata zębów spowodowana do zapalenia przyzębia ≤4 zębów.

Kryteria włączenia były następujące:

1. w wieku >18 lat,
2. posiadanie co najmniej 16 zębów naturalnych (nie licząc trzeciego trzonowca),
3. brak zdiagnozowanej choroby lub przyjmowania leków, które mogłyby mieć wpływ na stan przyzębia.

Kryteria wykluczenia były następujące:

1. Pacjenci, którzy przyjmowali antybiotyki, niesteroidowe leki przeciwzapalne lub inne leki w ciągu ostatnich 3 miesięcy,
2. przeszedł niechirurgiczne lub chirurgiczne leczenie periodontologiczne,
3. konieczność leczenia zachowawczego i endodontycznego,
4. ruchomą protezę częściową i/lub leczenie ortodontyczne
5. Obecna ciąża lub laktacja, otyłość, nałogowe palenie tytoniu i stężenie białka C-reaktywnego (CRP) w surowicy > 3 mg/l.

Wszystkie osoby zostały zbadane na początku badania i cztery tygodnie po niechirurgicznym leczeniu periodontologicznym, w tym głębokość sondowania całej jamy ustnej (PD), CAL, obecność krwawienia podczas sondowania (BOP), wskaźnik krwawienia brodawkowego (PBI), wskaźnik dziąseł (GI) i płytkę nazębną indeks (PI) z wyjątkiem trzecich zębów trzonowych. PD i CAL mierzono w sześciu miejscach na ząb za pomocą ręcznej sondy periodontologicznej.

Niechirurgiczne leczenie periodontologiczne grup P1 i P2 obejmowało skaling nad- i poddziąsłowy, wygładzanie korzeni oraz instruktaż higieny jamy ustnej. Skaling poddziąsłowy i wygładzanie korzeni przeprowadzono w znieczuleniu miejscowym w dwóch sesjach w ciągu 48-72 godzin. W grupie zapalenia dziąseł przeprowadzono instruktaż skalingu nad- i poddziąsłowego, polerowania oraz higieny jamy ustnej. Leczenie pacjentów z zapaleniem dziąseł i przyzębia przeprowadzał lekarz periodontolog (BM) przy użyciu narzędzi ręcznych i ultradźwiękowych. Wszystkie pomiary zostały wykonane przez tego samego wykalibrowanego egzaminatora (BM).

Pobieranie próbek płynu dziąsłowego (GCF).

Próbki GCF uzyskano z czterech niesąsiadujących miejsc międzyzębowych w dwóch zębach wielokorzeniowych szczęki i dwóch żuchwy za pomocą standaryzowanych pasków bibuły filtracyjnej. Próbki GCF pobrano z czterech miejsc z GI <1, PD ≤ 3, PBI = 0 i CAL = 0 w grupie H; z czterech ośrodków z GI ≥2, PD ≤3, PBI >2 i CAL=0 w grupie G; z czterech lokalizacji (najgłębsze kieszonki 3 <PD ≤5) z GI ≥2, PBI >2 i 3 ≤CAL <5 mm w grupie P1; oraz z czterech miejsc (najgłębsze kieszonki PD ≥5) z GI ≥2, PBI >2 i CAL ≥5 mm w grupie P2 zgodnie z wyjściowymi pomiarami klinicznymi.

Pobieranie próbek surowicy

Próbki surowicy pobierano po pobraniu GCF przed leczeniem periodontologicznym. Sześć mililitrów krwi żylnej uzyskano standardową metodą nakłucia żyły i surowicę oddzielono od krwi przez wirowanie przy 1500 g przez 20 minut.

Testy biochemiczne

Poziomy GCF ErbB4, Nrg4, IL-6, IL-10 oraz poziomy ErbB4, Nrg4 w surowicy, syntazy tlenku azotu (NOS)2 i Arg1 mierzono za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA) przy użyciu komercyjnych zestawów zgodnie z zaleceniami producenta wytyczne.

Analiza statystyczna

Wszystkie analizy danych przeprowadzono przy użyciu pakietu oprogramowania statystycznego. Porównania parametrów klinicznych i biochemicznych pomiędzy badanymi grupami przeprowadzono za pomocą testu U Kruskala-Wallisa i Manna Whitneya z poprawką Bonferroniego. Porównania wewnątrzgrupowe (początkowo iw pierwszym miesiącu) przeprowadzono za pomocą testu Wilcoxona dla sparowanych próbek. Zbadano również związki między poziomami GCF i biomarkerów surowicy oraz parametrami klinicznymi, stosując analizę korelacji rang Spearmana.