Aktywność mitochondrialna komórek Cumulus jako nieinwazyjny marker jakości zarodka (FLIM)

Niniejsze badanie ma na celu zbadanie stopnia powiązania parametrów FLIM komórek wzgórka z wynikami klinicznymi (ciąża kliniczna, ciąża trwająca w 12. tygodniu i poród żywy) zarodków powstałych z zamkniętych oocytów.

Uczestnicy otrzymają zgodę i zostaną wstępnie podpisane zgodnie ze standardowymi schematami IVFMD, My Duc Hospital i IVFMD PN, My Duc Phu Nhuan Hospital. Norma dotyczy pacjentek z co najmniej 8 pęcherzykami ≥ 10 mm w badaniu ultrasonograficznym w dniu indukowanej owulacji.

Próbki wzgórka (CC) zostaną pobrane zgodnie z protokołem w dniu pobrania oocytu (OPU), opatrzone tym samym numerem co oocyt, z którego zostały pobrane, i poddane witryfikacji za pomocą zestawu Cryotech do czasu wykonania pomiarów FLIM.

Inseminacja zostanie przeprowadzona metodą ICSI, 3 - 4 godziny po pobraniu komórki jajowej. Próbka komórek CC zostanie wycięta z masy wzgórka każdego oocytu uznanego za dojrzały na podstawie rozmieszczenia masy wzgórka (brak ciasnych warstw koronowych). Pozostałe komórki wzgórka zostaną usunięte z OCC za pomocą hialuronidazy. Zapłodnione zostaną tylko dojrzałe oocyty.

Kontrola zapłodnienia zostanie przeprowadzona pod mikroskopem odwróconym przez okres 16-18 godzin po inseminacji. W dniu 3 ocena zarodków zostanie przeprowadzona w ustalonym punkcie czasowym 66 ± 2 godziny po zapłodnieniu, a w przypadku transferów dnia 5/6 odpowiednio po 116 ± 2 godzinach lub 140 ± 2 godzinach, zgodnie z konsensusem ze Stambułu. Zastosowana zostanie strategia zamrażania wszystkich zarodków w dniu 5, a pierwszym cyklem transferu zamrożonych zarodków jest transfer pojedynczego zarodka.

Z drugiej strony badacze podzielą zarodki na dwie grupy na podstawie zmierzonych parametrów FLIM z powiązanych z nimi komórek wzgórka, odpowiadających „wysokim” 35% i „niskim” 65% wyników metabolicznych.

Badacze dążą do tego, aby zarodki z grupy o „wysokiej” punktacji metabolicznej miały o 10% wyższy wskaźnik żywych urodzeń niż grupy kontrolne. Zakładając obecny wskaźnik urodzeń żywych na poziomie 32%, odpowiada to oczekiwanemu wskaźnikowi urodzeń żywych na poziomie 42% w grupie „wysokiej” (i 25% wskaźnikowi urodzeń żywych w grupie „niskiej”). Do wykrycia efektu tej wielkości potrzeba łącznie 450 pacjentów (moc 0,90, dwustronna alfa 5%).

Pierwszorzędowym punktem końcowym badania będzie wskaźnik urodzeń żywych po pierwszym transferze zarodków w rozpoczętym cyklu leczenia.