Mitochondriální aktivita cumulus jako neinvazivní marker kvality embrya (FLIM)

Tato studie si klade za cíl otestovat rozsah asociace parametrů FLIM buněk kumulu s klinickými výsledky (klinické těhotenství, probíhající těhotenství ve 12. týdnu a živý porod) embryí, která jsou výsledkem uzavřených oocytů.

Účastníci obdrží souhlas se standardními režimy IVFMD, nemocnice My Duc a IVFMD PN, nemocnice My Duc Phu Nhuan a budou je předem podepsat. Standard je pro pacientky s minimálně 8 folikuly ≥ 10 mm na ultrasonografii v den indukované ovulace.

Vzorky kumulů (CC) budou odebírány podle protokolu v den odběru oocytů (OPU), přičemž jim bude přiřazeno stejné číslo jako oocyt, ze kterého byly odebrány, a vitrifikovány pomocí soupravy Cryotech, dokud nebudou provedena měření FLIM.

Inseminace bude provedena pomocí ICSI, 3 - 4 hodiny po odběru oocytů. Vzorek CC se odřízne z hmoty kumulu každého oocytu, který se považuje za zralý na základě dispozice hmoty kumulu (absence těsných koronových vrstev). Zbývající buňky kumulu budou odstraněny z OCC pomocí hyaluronidázy. Budou inseminovány pouze zralé oocyty.

Kontrola oplodnění bude prováděna pod inverzním mikroskopem po dobu 16-18 hodin po inseminaci. V den 3 bude hodnocení embryí provedeno v pevně stanoveném časovém bodě 66±2 hodiny po oplodnění a pro přenosy 5./6. dne 116±2 hodiny nebo 140±2 hodiny, v tomto pořadí, s použitím Istanbulského konsenzu. Bude aplikována strategie zmrazení všeho pro embryo 5. dne a první cyklus přenosu zmrazeného embrya je přenos jednoho embrya.

Na druhé straně výzkumníci stratifikují embrya do dvou skupin na základě naměřených parametrů FLIM z jejich asociovaných kumulických buněk, což odpovídá „vysokým“ 35 % a „nízkým“ 65 % metabolických skóre.

Výzkumníci usilují o to, aby embrya ve skupině s „vysokým“ metabolickým skóre měla o 10 % vyšší živou porodnost než kontroly. Za předpokladu současné míry porodnosti 32 % to odpovídá očekávané 42 % porodnosti ve skupině „vysoké“ (a 25 % míře porodnosti ve skupině „nízké“). K detekci efektu této velikosti je zapotřebí celkem 450 pacientů (síla 0,90, oboustranné alfa 5 %).

Primárním cílovým parametrem studie bude míra porodnosti po prvním přenosu embrya v započatém léčebném cyklu.