Attività mitocondriale delle cellule del cumulo come marcatore non invasivo della qualità dell'embrione (FLIM)

Questo studio mira a testare l'entità dell'associazione dei parametri FLIM delle cellule del cumulo con gli esiti clinici (gravidanza clinica, gravidanza in corso a 12 settimane e nascita dal vivo) degli embrioni che derivano dagli ovociti racchiusi.

I partecipanti saranno acconsentiti e pre-firmati seguendo i regimi standard di IVFMD, My Duc Hospital e IVFMD PN, My Duc Phu Nhuan Hospital. Lo standard è per le pazienti con almeno 8 follicoli ≥ 10 mm all'ecografia alla data dell'ovulazione indotta.

I campioni di cumuli (CC) verranno raccolti seguendo il protocollo il giorno del prelievo degli ovociti (OPU), assegnati con lo stesso numero dell'ovocita da cui sono stati raccolti e vetrificati con un kit Cryotech fino a quando non vengono eseguite le misurazioni FLIM.

L'inseminazione sarà eseguita mediante ICSI, 3 - 4 ore dopo il prelievo degli ovociti. Un campione di CC verrà prelevato dalla massa del cumulo di ciascun ovocita giudicato maturo in base alla disposizione della massa del cumulo (assenza di strati corona stretti). Le rimanenti cellule del cumulo verranno rimosse dagli OCC utilizzando la ialuronidasi. Verranno inseminati solo gli ovociti maturi.

Il controllo della fecondazione verrà eseguito al microscopio invertito per un periodo di 16-18 ore dopo l'inseminazione. Il giorno 3, la valutazione dell'embrione verrà eseguita in un momento fisso 66 ± 2 ore dopo la fecondazione e, per i trasferimenti del giorno 5/6 a 116 ± 2 ore o 140 ± 2 ore, rispettivamente, utilizzando il consenso di Istanbul. Verrà applicata la strategia di congelamento totale per l'embrione del giorno 5 e il primo ciclo di trasferimento di embrioni congelati è il trasferimento di un singolo embrione.

D'altra parte, gli investigatori stratificheranno gli embrioni in due gruppi in base ai parametri FLIM misurati dalle cellule del cumulo associate, corrispondenti al 35% "alto" e al 65% "basso" dei punteggi metabolici.

Gli investigatori mirano agli embrioni nel gruppo con punteggio metabolico "alto" per avere un tasso di natalità vivo superiore del 10% rispetto ai controlli. Ipotizzando un tasso di natalità vivo attuale del 32%, ciò corrisponde a un tasso di natalità vivo sperato del 42% nel gruppo "alto" (e un tasso di natalità vivo del 25% nel gruppo "basso"). Sono necessari un totale di 450 pazienti per rilevare un effetto di queste dimensioni (potenza 0,90, alfa bilaterale 5%).

L'endpoint primario dello studio sarà il tasso di nati vivi dopo il primo trasferimento di embrioni del ciclo di trattamento iniziato.