- ICH GCP
- Rejestr badań klinicznych w USA
- Badanie kliniczne NCT05690763
Ilościowa ocena skuteczności dwóch systemów aktywacji nawadniania
Ilościowa ocena skuteczności dwóch systemów aktywacji irygacji w zmniejszaniu obciążenia bakteryjnego zębów z zapaleniem przyzębia wierzchołkowego po leczeniu: badanie kliniczne
Przegląd badań
Status
Warunki
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
Kryteria kwalifikacyjne Badana populacja składała się z 20 pacjentów (9 kobiet i 11 mężczyzn, w wieku 19-66 lat) zgłaszających się do kliniki endodontycznej w Stambule Medipol University Dental School w celu niechirurgicznego ponownego leczenia endodontycznego zębów ze zmianami zapalnymi przywierzchołków. Do badania włączono 20 zębów wcześniej leczonych kanałowo, wykazujących kliniczne i radiologiczne objawy przewlekłego zapalenia przyzębia w wierzchołku. Radiologicznie średnica przezierności okołowierzchołkowej wahała się od 2 do 7 mm. Zęby z pozabiegowym zapaleniem przyzębia wierzchołka miały leczenie endodontyczne zakończone ponad 2 lata wcześniej i wymagały ponownego leczenia. Końce wypełnień kanałów korzeniowych znajdowały się w odległości 0-4 mm od wierzchołka radiologicznego, bez przepełnienia. Zęby miały nienaruszone uzupełnienia koronowe, bez widocznej ekspozycji materiału wypełniającego korzenie na kontakt z jamą ustną. Wybrane zęby miały wystarczającą strukturę korony do odpowiedniej izolacji koferdamem i wykazywały brak kieszonek przyzębnych lub poziomu przyczepu głębszego niż 4 mm. Zastosowano również następujące kryteria wykluczenia: zęby pacjentów, którzy otrzymywali antybiotyki w ciągu ostatnich 3 miesięcy lub którzy mieli jakąkolwiek chorobę ogólną, zęby, których nie można było odpowiednio zaizolować koferdamem, zęby bez uszczelnienia wieńcowego, zęby z kieszonką przyzębną głębokość >4 mm; oraz zęby ze złamaniem korony/korzeni. Od każdego pacjenta uwzględniono tylko jeden ząb.
Procedury leczenia kanałowego i pobieranie próbek Koferdam i technika aseptyczna były stosowane przez cały czas ponownego leczenia endodontycznego. Po usunięciu płytki nazębnej i izolacji koferdamu pole operacyjne oczyszczono 3% nadtlenkiem wodoru i zdezynfekowano 2,5% roztworem NaOCl. Następnie usunięto wszystkie uzupełnienia koronowe, wkłady i ubytki próchnicowe oraz zakończono preparację dostępu po prawidłowym odsłonięciu wypełnienia kanału korzeniowego. Następnie ząb (wraz z komorą miazgi), klamrę i przylegający koferdam ponownie zdezynfekowano 2,5% NaOCl, a następnie inaktywowano 10% tiosiarczanem sodu, aby uniknąć interferencji z pobieraniem próbek bakteriologicznych. Próbki kontrolne sterylności (SR1) pobrano z powierzchni zęba sterylnym wacikiem Omni Swab (Whatman FTA, Sigma-Aldrich) z wysuwaną główką. Papierowe ćwieki przeniesiono do krioprobówek zawierających roztwór soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) przechowywany w temperaturze -20°C. W każdym przypadku pobrano próbkę z pojedynczego kanału korzeniowego, aby ograniczyć ocenę mikrobiologiczną do jednego środowiska ekologicznego. W zębach wielokorzeniowych wybrano korzeń ze zmianą okołowierzchołkową. Jeśli we wszystkich korzeniach występowały zmiany okołowierzchołkowe, wybierano szerszy kanał. Dwa kanały uwzględnione w tym badaniu pochodziły z zębów jednokorzeniowych, 3 kanały policzkowe w zębach przedtrzonowych szczęki, 1 kanał podniebienny w zębach trzonowych szczęki i 10 kanałów dystalnych w zębach trzonowych żuchwy.
Stare wypełnienia korzeni usunięto wiertłami Gates-Glidden (Dentsply Maillefer, Ballaigues, Szwajcaria) oraz pilnikami endodontycznymi bez użycia rozpuszczalników chemicznych. Długość roboczą (WL) ustalono w odległości 1 mm od otworu wierzchołkowego za pomocą lokalizatora wierzchołka (Raypex6; VDW GmbH, Monachium, Niemcy), a następnie wykonano radiogramy okołowierzchołkowe, aby upewnić się, że usunięto cały materiał wypełniający. Płukanie sterylnym roztworem soli wykonano w celu usunięcia wszelkich pozostałości materiału i zwilżenia kanału przed pobraniem próbki. Następnie kanał pozostawiono wypełniony solą fizjologiczną, a mały instrument ręczny umieszczono w WL i delikatnie opiłowano ściany kanału. Z kanału korzeniowego pobrano wstępną próbkę mikrobiologiczną (S1) sterylnymi bibułkami umieszczanymi kolejno w WL. Do kanału korzeniowego wprowadzono trzy sterylne sączki papierowe w celu pobrania próbki. Każdy papierowy punkt pozostawiano w kanale na około 1 minutę. Zarówno sączki papierowe, jak i ręczny instrument endodontyczny, bez rękojeści, przeniesiono do krioprobówek zawierających 300 μl roztworu PBS, przechowywanych w temperaturze -20°C. Próbki zostały przekazane do laboratorium analiz genetycznych w celu dalszej analizy w łańcuchu chłodniczym.
Kanały korzeniowe opracowano pilnikami Revo S i przepłukano 2,5% NaOCl. Kanały powiększono wierzchołkowo do rozmiaru 35 (AS35) na długości roboczej. Pomiędzy każdą zmianą narzędzi kanał korzeniowy przepłukiwano 5 ml 2,5% roztworu NaOCl za pomocą igły 30 G z wentylacją boczną, którą umieszczano 1 do 2 mm przed długością roboczą. W sumie zużyto więc 30 ml roztworu do irygacji. Po zakończeniu instrumentacji warstwę mazistą usunięto za pomocą 2 ml 17% EDTA, który pozostawiono w kanale na 3 minuty, a następnie 2,5% NaOCl. Kanał korzeniowy osuszono jałowymi sączkami papierowymi i przepłukano 2 ml 10% tiosiarczanu sodu przez 1 min w celu inaktywacji roztworu NaOCl. Następnie z kanałów pobrano próbkę (S2), jak opisano dla S1. Następnie NaOCl mieszano/aktywowano jak opisano poniżej.
Grupa XPF: Instrument XP-Endo Finisher (FKG Dentaire, rozmiar #25, stożek 0,00) został schłodzony (Endo-Frost; Roeko, Langenau, Niemcy) w celu utrzymania go prosto i zmierzenia WL. Kanały przepłukano 2,5 ml 2,5% NaOCl przez 30 s i aktywowano instrumentem XPF, który umieszczono w kanale 1 mm przed WL i napędzano silnikiem przy 800 obr./min (moment obrotowy 1 N-cm) przez 30 s zgodnie z zaleceniami producenta (powolnymi ruchami w górę iw dół z amplitudą około 7 mm przy ciągłym obrocie). Następnie kanały przepłukano 2,5 ml 2,5% NaOCl, a następnie aktywowano substancję aparatem XPF na 30 sekund, analogicznie jak powyżej. Do każdego kanału zastosowano nowy pilnik XP-endo Finisher.
Grupa EA: Kanały korzeniowe płukano 2,5 ml 2,5% NaOCl przez 30 s, a następnie aktywowano dźwiękowo ten roztwór za pomocą czerwonej końcówki EndoActivator rozmiar #25/0,04 (EA; Dentsply Tulsa Dental Specialties, Tulsa, OK), wprowadzone do kanału korzeniowego 1 mm przed WL, przy 10 000 cykli/min. przez 30 sekund. Końcówka polimerowa EA przesuwała się pionowo z części wierzchołkowej do koronowej kanału podczas aktywacji. Następnie tę samą procedurę powtórzono jeszcze raz (aktywacja dźwiękowa 2,5 ml 2,5% NaOCl przez 30 sekund) tak, aby całkowite przepłukanie NaOCl i czas mieszania irygacji za pomocą urządzeń testowych wynosiły 1 min. Całkowita objętość NaOCl użytego na kanał w obu grupach wynosiła 35 ml. W obu grupach użyto 5 ml NaOCl i aktywowano przez jedną minutę.
Na koniec kanały w obu grupach osuszono i przepłukano 2 ml 10% tiosiarczanu sodu przez 1 min. Próbkę po aktywacji (S3) otrzymano w ten sam sposób, w jaki zebrano próbkę przed aktywacją i wysłano do analizy PCR. Zakończenie leczenia kanałowego poprzedzone zostało wypełnieniem korzenia metodą kondensacji bocznej gutaperki. Ubytki dostępowe uzupełniono żywicą kompozytową i wykonano końcowe zdjęcie rentgenowskie. Wszystkie procedury pobierania próbek kanałów korzeniowych i drobnoustrojów zostały przeprowadzone przez jednego doświadczonego endodontę. Całkowite obciążenie bakteryjne, jak również ilość Enterococcus faecalis określono przed oprzyrządowaniem, po oprzyrządowaniu i zastosowaniu systemów aktywacji irygacji, za pomocą cyfrowej reakcji łańcuchowej polimerazy kropelkowej (ddPCR).
Całkowite obciążenie bakteryjne, a także ilość Enterococcus faecalis określono przed instrumentacją, po instrumentacji i zastosowaniu leków dokanałowych za pomocą ddPCR.
Izolacja genomowego DNA i pomiar stężenia DNA DNA ekstrahowano przy użyciu zestawu QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Niemcy) zgodnie z protokołem zalecanym przez producenta. Przed izolacją DNA próbki (probówki z sączkami papierowymi) trawiono w temperaturze 50-60°C przez vortexING przez 30 sekund co 10 minut, aby zapewnić dezagregację wszystkich bakterii do roztworu PBS. Następnie z zawiesiny aseptycznie usunięto sączki papierowe i zawiesinę bakteryjną osadzono przez wirowanie przez 10 minut przy 5000 g. Następnie osad ponownie zawieszono w 180 ul buforu ATL dostarczonego przez QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN GmbH, Hilden, Niemcy) i dodano 20 ul proteinazy K (20 mg/ml). Próbki inkubowano przez 3 godziny w temperaturze 56°C. Następnie wyizolowano całkowity bakteryjny genomowy DNA zgodnie z protokołem zestawu QIAamp DNA Mini Kit. Końcowa objętość roztworu DNA każdej próbki wynosiła 150 μl i została uwzględniona podczas obliczeń. Stężenie DNA (absorbancję przy 260 nm) określono za pomocą spektrofotometru (Promega Quantifluor).
Amplifikacja genów 16S rRNA W tym badaniu zaprojektowano startery dla genów Universal i Enterococcus 16S rRNA. Po ekstrakcji DNA z próbek za pomocą zestawu QIAamp DNA Mini Kit sekwencje 16S rRNA o długości 700–800 pz zamplifikowano przy użyciu uniwersalnego startera do przodu E8F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') i uniwersalnego startera do tyłu E1115R (5'-AGGGTTGCGCTCGTTG-3') 59. Końcową objętość reakcji PCR dla każdego wyizolowanego szczepu bakteryjnego doprowadzono do 25 µl. Reakcje amplifikacji genów 16S rRNA przeprowadzono w następujących warunkach. 1 cykl wstępnej denaturacji w 95°C przez 3 minuty, 35 cykli w 95°C przez 30 sekund, 55°C przez 30 sekund i 72°C przez 30 sekund, które są kontynuowane z końcowym etapem wydłużania w 72°C przez 10 minut .
Produkty PCR analizowano metodą elektroforezy z użyciem 2% żelu agarozowego (zawierającego bromek etydyny) w buforze Tris/BoratE/EDTA (TBE), przy czym żele analizowano w świetle ultrafioletowym (przy 140 V przez 20 minut). Ich obrazy wizualizowano w świetle ultrafioletowym. Ponadto kontrolę i optymalizację starterów do ddPCR przeprowadzono również w konwencjonalnym PCR.
Oczyszczanie i sekwencjonowanie genu 16S rRNA Po reakcjach PCR oczyszczanie produktów PCR odbywa się poprzez hydrolizę nadmiaru starterów i nukleotydów za pomocą ExoSap-IT (Thermo, PN: 78201.1.ML) zawierającego enzymy egzonukleazy I i fosfatazy alkalicznej. 2 µl ExoSap-IT zmieszano z 5 µl produktu PCR dla każdej próbki. Reakcję ExoSap przeprowadza się w temperaturze 37°C przez 15 minut (aktywacja enzymu), a następnie przez 15 minut (inaktywacja) w temperaturze 80°C. Reakcje sekwencjonowania przeprowadzono stosując zestaw do cyklicznego sekwencjonowania Bigdye™ Terminator v3.1 (Thermo). Reakcje przeprowadzono zgodnie z instrukcją zestawu dla wszystkich wyizolowanych szczepów.
Po oczyszczeniu produktów za pomocą Exosap, reakcję sekwencyjną przeprowadzono za pomocą zestawu do sekwencjonowania BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Thermo) w następujących warunkach. Po sekwencji PCR produkty BigDye oczyszczono metodą okrężnicy. Do tego procesu użyto zestawu Zymo ZR DNA Sequencing Clean-up Kit (Zymo Research, USA). Wszystkie próbki oczyszczono zgodnie z protokołem podanym w zestawie i wykonano na analizatorze genetycznym 3130XL.
Droplet Digital PCR (ddPCR) Droplet Digital PCR (ddPCR) przeprowadzono stosując startery zaprojektowane zgodnie z regionem 16S rRNA specyficznym dla wszystkich bakterii i gatunków Enterococcus faecalis, po zsekwencjonowaniu, bezwzględnym oznaczeniu ilościowym gatunków bakterii znalezionych w próbce papierowej. Pary starterów to 16S-F-5'-AGGGAATCTTCSGCAATGGG-3' i 16S-R-5'-ACGCCCAATAAATCCGGACA-'3 dla wszystkich bakterii oraz ENT-F-5'-CGCTTCTTTCCTCCCGAGT-3' i ENT-R-5'-GCCATGCGGCATAAACTG Pary starterów -3' dla Enterococcus Faecalis. W reakcji PCR amplikony zamplifikowane z nieoznakowanymi parami starterów analizowano przez znakowanie barwnikiem Eva-Green. W celu bezwzględnego oznaczenia ilościowego Enterococcus i całkowitego rRNA 16S przeprowadzono PCR z dwiema parami starterów z tej samej próbki. 20 µl mieszaniny PCR zawierającej 10 µl 2X ddPCR EvaGreen Supermix (Bio-Rad, nr kat. nie. 1864034), 9 µl wody wolnej od nukleaz, 0,25 µl startera przedniego i wstecznego oraz 2 ng DNA z każdej próbki Warunki cykli termicznych były następujące: 95◦C przez 5 min, następnie 40 cykli w 95◦C przez 30 s i 60°C przez 1 min i dwa końcowe etapy w 4°C przez 5 minut i 90°C przez 5 minut z nieskończonym utrzymywaniem w 4°C. Po zakończeniu PCR szczelnie zamkniętą płytkę przeniesiono do uchwytu płytki czytnika kropli QX200 (Bio-Rad, nr kat. nie. 1864003).
Typ studiów
Zapisy (Rzeczywisty)
Faza
- Nie dotyczy
Kontakty i lokalizacje
Lokalizacje studiów
-
-
Esenler
-
Istanbul, Esenler, Indyk
- Istanbul Medipol University, Faculty of Dentistry
-
-
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
Akceptuje zdrowych ochotników
Opis
Kryteria przyjęcia:
- zęby leczone kanałowo wykazujące kliniczne i radiologiczne objawy przewlekłego zapalenia przyzębia wierzchołkowego.
- Zęby z pozabiegowym zapaleniem przyzębia wierzchołka miały leczenie endodontyczne zakończone ponad 2 lata wcześniej i wymagały ponownego leczenia.
- Radiologicznie średnica przezierności okołowierzchołkowej wahała się od 2 do 7 mm.
- Końce wypełnień kanałów korzeniowych znajdowały się w odległości 0-4 mm od wierzchołka radiologicznego, bez przepełnienia.
- Zęby miały nienaruszone uzupełnienia koronowe, bez widocznej ekspozycji materiału wypełniającego korzenie na kontakt z jamą ustną.
- Wybrane zęby miały wystarczającą strukturę korony do odpowiedniej izolacji koferdamem i wykazywały brak kieszonek przyzębnych lub poziomu przyczepu głębszego niż 4 mm.
Kryteria wyłączenia:
- zęby pacjentów, którzy otrzymywali antybiotyki w ciągu ostatnich 3 miesięcy lub cierpieli na jakąkolwiek chorobę ogólną, zęby, których nie można było prawidłowo odizolować koferdamem, zęby bez uszczelnienia wieńcowego, zęby z kieszonkami przyzębnymi o głębokości >4 mm; oraz zęby ze złamaniem korony/korzeni. Od każdego pacjenta uwzględniono tylko jeden ząb.
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
- Główny cel: Leczenie
- Przydział: Randomizowane
- Model interwencyjny: Przydział równoległy
- Maskowanie: Podwójnie
Broń i interwencje
Grupa uczestników / Arm |
Interwencja / Leczenie |
---|---|
Eksperymentalny: Finiszer XP-endo
użycie XP-endo Finisher
|
XPF: Kanały płukano 2,5 ml 2,5% NaOCl przez 30 s i aktywowano instrumentem XPF, który umieszczono w kanale na odległość 1 mm od WL i napędzano silnikiem z prędkością 800 obr./min (moment obrotowy 1 N-cm) przez 30 s zgodnie z zaleceniami producenta.
Następnie kanały przepłukano 2,5 ml 2,5% NaOCl, a następnie aktywowano substancję aparatem XPF na 30 sekund, analogicznie jak powyżej.
Do każdego kanału zastosowano nowy pilnik XP-endo Finisher.
|
Eksperymentalny: Endoaktywator
stosowanie EndoActivatora
|
Kanały korzeniowe płukano 2,5 ml 2,5% NaOCl przez 30 s, a następnie aktywowano dźwiękowo ten roztwór za pomocą czerwonej końcówki EndoActivator rozmiar #25/0,04,
wprowadzić do kanału korzeniowego 1 mm przed WL, przy 10 000 cpm/min.
przez 30 sekund.
Końcówka polimerowa EA przesuwała się pionowo z części wierzchołkowej do koronowej kanału podczas aktywacji.
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Ramy czasowe |
---|---|
analiza sekwencji genów 16S rRNA metodą sekwencjonowania Sangera
Ramy czasowe: do ukończenia studiów, średnio 1 rok
|
do ukończenia studiów, średnio 1 rok
|
Współpracownicy i badacze
Sponsor
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
Zakończenie podstawowe (Rzeczywisty)
Ukończenie studiów (Rzeczywisty)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Oszacować)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- Microbial analysis
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .
Badania kliniczne na XP-endo Finisher do aktywacji irygacji
-
Federal University of PelotasNieznany
-
Afyonkarahisar Health Sciences UniversityJeszcze nie rekrutacjaZęby leczone endodontycznie
-
Minia UniversityNieznany
-
Minia UniversityNieznany