Rotatividade de lipoproteínas em dietas de baixo e alto portfólio de MUFA

Todos os indivíduos serão submetidos a dois tratamentos paralelos de 2 fases. Em um tratamento, os indivíduos serão colocados em uma dieta com baixo teor de gordura por um mês (dieta inicial de controle) e, no segundo mês, continuarão com a dieta com baixo teor de gordura (ou seja, baixo MUFA) com a adição dos componentes do portfólio. A ordem dessas duas fases não será aleatória. O outro tratamento será semelhante ao anterior, exceto que a dieta de base da fase de portfólio será rica em gordura monoinsaturada (alto teor de MUFA). Os indivíduos serão alocados aleatoriamente para qualquer um dos tratamentos. As dietas serão controladas metabolicamente e todos os alimentos serão fornecidos em intervalos semanais.

Os indivíduos virão após um jejum noturno de 12 horas ao Centro de Modificação de Fatores de Risco no Hospital St. Michael ou no Departamento de Ciências Nutricionais da Universidade de Toronto imediatamente antes do início de cada fase de tratamento e em intervalos semanais durante o curso de cada período de estudo. Antes do início do estudo, os indivíduos serão instruídos sobre os detalhes do protocolo de dieta do estudo. Eles também serão solicitados a manter um nível constante de atividade física durante o curso do estudo. Em todas as visitas, o peso corporal (em kg) será obtido em roupas íntimas, sem sapatos, e a pressão arterial será medida duas vezes no braço dominante após os indivíduos permanecerem sentados por pelo menos 20 minutos. A altura (em cm) será registrada na primeira visita. Durante todo o período do estudo, os indivíduos manterão a dieta prescrita em sua visita inicial. A cada duas visitas de cada fase de tratamento, os indivíduos fornecerão uma amostra de sangue em jejum. Os testes cinéticos do metabolismo das lipoproteínas serão realizados durante a 4ª e 8ª semana do estudo. Na linha de base e durante a última semana de cada fase do estudo, serão concluídas as coletas de urina de 24h e de hidrogênio expirado de 12h.

A mensuração da cinética in vivo da apolipoproteína será realizada por meio de uma infusão constante de [D3]L-leucina. Este protocolo permite a determinação da cinética de todas as apolipoproteínas simultaneamente. Os estudos de cinética serão conduzidos no estado de alimentação constante, onde os participantes recebem 1/30 de suas necessidades diárias de energia a cada meia hora durante toda a duração do teste (15 horas). Esses métodos são descritos em detalhes em publicações anteriores de nosso grupo. Resumidamente, às 7h da manhã do estudo, após um jejum noturno de 12 horas, os participantes serão admitidos na Unidade de Investigação Clínica do Hospital Geral de Toronto e dois cateteres intravenosos (IVs) serão inseridos, um em cada veia do antebraço. Um IV será para infusão do isótopo estável descrito abaixo e outro para retirada de amostras de sangue. Depois de atingir um estado de equilíbrio (3 horas após as pequenas refeições a cada meia hora), os indivíduos receberão primeiro uma injeção em bolus de 10 µmol/kg de peso corporal de [D3]L-leucina ([D3]L-leucina 98%, C/ Isótopos D/N) dissolvidos em solução salina fisiológica (0,9% NaCl) e, em seguida, uma infusão constante de 10 µmol/kg/h de [D3]L-leucina por 12 horas por meio de uma linha intravenosa inserida em uma veia do antebraço esquerdo. Amostras de sangue serão coletadas em intervalos regulares (0, 1/2, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 11, 12 horas). Todas as subfrações de lipoproteínas serão separadas por ultracentrifugação sequencial e posteriormente congeladas a -80oC até serem processadas para análise.