Rotación de lipoproteínas en dietas de cartera bajas y altas en MUFA

Todos los sujetos se someterán a dos tratamientos paralelos de 2 fases. En un tratamiento, los sujetos se pondrán en una dieta baja en grasas durante un mes (dieta inicial de control) y luego durante el segundo mes continuarán con la dieta baja en grasas (es decir, low-MUFA) con la adición de los componentes de la cartera. El orden de estas dos fases no será aleatorio. El otro tratamiento será similar al anterior excepto que la dieta de fondo de la fase de cartera será alta en grasas monoinsaturadas (alta en MUFA). Los sujetos se asignarán al azar a cualquiera de los tratamientos. Las dietas se controlarán metabólicamente y todos los alimentos se proporcionarán a intervalos semanales.

Los sujetos vendrán después de un ayuno nocturno de 12 horas al Centro de Modificación de Factores de Riesgo en el Hospital St. Michael o al Departamento de Ciencias Nutricionales de la Universidad de Toronto inmediatamente antes del comienzo de cada fase de tratamiento y en intervalos semanales durante el transcurso de cada período de estudio. Antes del inicio del estudio, se instruirá a los sujetos sobre los detalles del protocolo dietético del estudio. También se les pedirá que mantengan un nivel constante de actividad física durante el transcurso del estudio. En todas las visitas, se obtendrá el peso corporal (en kg) con ropa interior, sin zapatos, y se tomará la presión arterial dos veces en el brazo dominante después de que los sujetos hayan estado sentados durante al menos 20 minutos. La altura (en cm) se registrará en la primera visita. A lo largo del período de estudio, los sujetos mantendrán la dieta prescrita en su visita inicial. En cada visita alterna de cada fase de tratamiento, los sujetos proporcionarán una muestra de sangre en ayunas. Las pruebas cinéticas del metabolismo de las lipoproteínas se realizarán durante la 4ª y 8ª semana del estudio. Al inicio del estudio y durante la última semana de cada fase del estudio, se completará la recolección de orina de 24 h y de hidrógeno de aliento de 12 h.

La medida de la cinética de la apolipoproteína in vivo se realizará mediante una infusión constante cebada de [D3]L-leucina. Este protocolo permite la determinación de la cinética de todas las apolipoproteínas simultáneamente. Los estudios de cinética se llevarán a cabo en un estado de alimentación constante en el que los participantes reciben 1/30 de sus necesidades energéticas diarias cada media hora durante toda la duración de la prueba (15 horas). Estos métodos se describen en detalle en publicaciones anteriores de nuestro grupo. Brevemente, a las 7 am de la mañana del estudio, después de un ayuno nocturno de 12 horas, los participantes serán admitidos en la Unidad de Investigación Clínica del Hospital General de Toronto y se insertarán dos catéteres intravenosos (IV), uno en cada vena del antebrazo. Una IV será para la infusión del isótopo estable que se describe a continuación y otra para la extracción de muestras de sangre. Después de alcanzar un estado estacionario (3 horas después de las comidas pequeñas de media hora), los sujetos recibirán primero una inyección en bolo de 10 µmol/kg de peso corporal de [D3]L-leucina ([D3]L-leucina 98%, C/ D/N Isotopes) disueltos en solución salina fisiológica (0,9% NaCl) y luego una infusión constante de 10 µmol/kg/h de [D3]L-leucina durante 12 horas a través de una vía intravenosa insertada en una vena del antebrazo izquierdo. Las muestras de sangre se recogerán a intervalos regulares (0, 1/2, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 11, 12 horas). Todas las subfracciones de lipoproteínas se separarán mediante ultracentrifugación secuencial y, posteriormente, se congelarán a -80 °C hasta que se procesen para su análisis.