Descoberta de novos biomarcadores circulantes de aterosclerose coronária

Hipótese: Nossa hipótese é que a aterosclerose coronariana induz modificações quantitativas e qualitativas das proteínas circulantes, que podem ser capturadas por uma abordagem proteômica diferencial aplicada a amostras de soro ou plasma. A identificação de tais modificações no sangue circulante de pacientes com doença arterial coronariana (versus pacientes sem doença arterial coronariana) e/ou de pacientes com síndromes coronarianas agudas (versus doença arterial coronariana estável) pode levar à descoberta de novos biomarcadores de aterosclerose coronariana e de vulnerabilidade da placa aterosclerótica.

Objetivos.

Objetivo primário: Identificação de novos biomarcadores circulantes de doença arterial coronariana estável e instável usando uma nova abordagem de proteômica diferencial.

Objetivos secundários:

• Avaliação do valor diagnóstico desses novos biomarcadores para o diagnóstico de doença arterial coronariana estável e instável.
• Comparação do valor diagnóstico destes novos biomarcadores com o valor diagnóstico de 1) outros biomarcadores validados de aterosclerose (por exemplo, PCR, IL-6, CD40L, marcadores de ativação leucocitária, …); e 2) de medidas não invasivas da função arterial (por exemplo, espessura média-intimal da artéria carótida, velocidade da onda de pulso, índice tornozelo/braquial, …)
• Descrição da relação entre esses novos biomarcadores e eventos coronarianos adversos maiores (morte, infarto do miocárdio, revascularização) durante um seguimento de 12 meses.

Métodos:

Centro Uniq, estudo prospectivo. Três grupos de pacientes serão estudados. Grupo 1: Infarto agudo do miocárdio sem supradesnivelamento do segmento ST; Grupo 2: Doença arterial coronariana estável; Grupo 3: artérias coronárias normais e ausência de outras lesões ateroscleróticas detectáveis.

Uma nova abordagem proteômica será aplicada às amostras de soro e plasma obtidas 1 mês após a internação índice. Esta abordagem inclui 3 etapas: 1) equalização de proteínas circulantes (exposição de proteínas de baixa concentração pertencentes ao "proteoma profundo"); 2) Cromatografia de retenção; e 3) separação de proteínas usando eletroforese 2D e tempo de voo de dessorção/ionização de laser aprimorado por superfície (SELDI-TOF).

Os biomarcadores com o maior valor diagnóstico serão subsequentemente identificados usando tempo de voo de ionização/dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF) e espectrometria de massa em tandem (MS/MS).

Perspectivas:

A validação dos valores diagnósticos e prognósticos dos novos biomarcadores descobertos e identificados usando a abordagem proteômica descrita acima exigirá o desenvolvimento de técnicas de medição mais diretas (por exemplo, ELISA), que serão usadas prospectiva ou retrospectivamente em outras coortes de pacientes com doença arterial coronariana . Estudos básicos serão realizados em paralelo, de forma a melhor compreender o papel destes novos biomarcadores na fisiopatologia da aterosclerose.