A aplicação de células-tronco da córnea cultivadas em pacientes que sofrem de insuficiência de células-tronco da córnea

Materiais e métodos:

1. Serão escolhidos pacientes que sofrem de insuficiência unilateral de células-tronco límbicas. Certifique-se de que esses voluntários entendam os benefícios e os fatores de risco da operação.
2. Prepare a membrana amniótica humana e cultive a membrana a 37°C, 5% de CO2, 95% de ar ambiente.
3. Um mês antes do transplante, retirar 1-2 mm2 de tecidos límbicos do olho saudável e cultivar o tecido límbico na membrana amniótica com 1,5 ml de meio epitelial hormonal suplementar (em 5% de soro fetal de vitela)
4. Continue cultivando as células em meio de Eagle modificado por Dulbecco/Ham's F12 (proporção de 1:1), adicionado com 5% de dimetil sulfóxido, 2 mg/ml de fator de crescimento epidérmico humano, 5 ug/ml de insulina, 0,5 ug/ml de hidrocortisona, 50 ug/ml ml de gentamicina, 1,25 ug/ml de anfotericina B, 5% autosoro. Duas a três semanas depois, o transplante será realizado após as células atingirem 2-3 cm2
5. Remova o tecido de superfície anormal na córnea da lesão, transplante a membrana amniótica com células-tronco límbicas cultivadas na córnea desnudada. Cubra com lentes de contato após a operação e aplique antibióticos e esteróides tópicos.
6. No pós-operatório, observe os pacientes por uma semana. Após a alta, acompanhar os pacientes uma semana, duas semanas, um mês, dois meses, três meses, seis meses e um ano depois.
7. As fotos serão tiradas e a extensão da regeneração do epitélio da córnea, acuidade visual e complicações serão registradas durante as visitas de acompanhamento.
8. Os investigadores planejam coletar 20 pacientes de 1º de julho de 2007 a 30 de junho de 2010.