Caracterização de Células Breg (Breg)

Justificativa: A artrite reumatóide (AR), a doença articular inflamatória mais comum, está frequentemente associada à destruição articular irreversível e pode comprometer o prognóstico dos pacientes. Se os tratamentos para estabilizar a doença já estão disponíveis, a pesquisa continua para tentar curar permanentemente a doença. Está bem estabelecido que as células B têm um papel patogênico na AR. Mais recentemente, foi demonstrado que as células B também poderiam ter funções reguladoras por meio da secreção de interleucina 10 (IL-10). Eles são chamados de células reguladoras B (Breg). No modelo de camundongo o mais comumente usado de artrite reumatóide, artrite induzida por colágeno (CIA), a transferência Breg ajuda a prevenir o desenvolvimento de CIA e curar a artrite estabelecida. Os investigadores demonstraram recentemente que o Breg estava diminuído em pacientes com AR em comparação com os controles e que a taxa de Breg estava inversamente correlacionada com a atividade da doença e os níveis de autoanticorpos. Esses resultados sugerem, portanto, que a falta de secreção de IL-10 pelas células B desempenha um papel importante na fisiopatologia da AR. No entanto, em humanos, o Breg permanece pouco compreendido. O principal objetivo do projeto é caracterizar melhor o B capaz de produzir IL-10 tanto em indivíduos com AR quanto em controles. Compreender o que induz a secreção de IL-10 por B pode permitir pensar em novas abordagens terapêuticas em doenças autoimunes, inclusive na AR.

Objetivos.

Principal: Identificar transportadores de nutrientes e receptores de quimiocinas expressos diferencialmente entre Breg e outras células B em pacientes com AR.

Secundário:

• Identificar genes e proteínas de superfície diferencialmente expressos entre Breg e outros Linfócitos B (BL) em pacientes com AR.
• Identificar transportadores de nutrientes, receptores de quimiocinas, genes e proteínas de superfície diferencialmente expressos entre Breg e outros BL em indivíduos saudáveis.
• Comparar a expressão de transportadores de nutrientes, receptores de quimiocinas, genes e proteínas de superfície entre controles Breg Breg e indivíduos com AR.

Métodos:

Delineamento: Estudo transversal envolvendo serviços de reumatologia bicêntricos em Montpellier e Nîmes para recrutamento; nossa equipe de pesquisa no Translational IGMM Nîmes e no laboratório de imunologia para análises biológicas.

População:

• AR: paciente atende aos critérios ACR (American College of Rheumatology) -EULAR (European League Against Rheumatism) 2010, virgem e bioterapia com corticosteroides menor que 10 mg/dia, estável há pelo menos uma semana.
• Controles: pareados por idade e sexo a pacientes com AR, sem doença sistêmica.

Terminais

• Principal: os portadores de nutrientes de intensidade de fluorescência média de citometria de fluxo e a porcentagem de BL expressando os diferentes receptores de quimiocinas
• Secundário: análise do transcriptoma e superfície proteômica com confirmação citométrica da expressão proteica do RNA e proteínas identificadas.

Número de indivíduos: 50 controles e 50 pacientes com AR (10 cada para cada um dos 3 métodos de comparação Breg / B IL10- e 10 cada para cada uma das duas etapas de validação). Cada paciente terá uma visita. A duração prevista do estudo é de 2 anos.

Análise estatística: Comparação das razões B + IL-10 / IL-10-B entre pacientes com AR e controles pelos testes de Student ou Mann-Whitney.

Resultados Esperados e Perspectivas: Este projeto nos permitirá definir e entender melhor o Breg em pacientes com AR e em controles. Se os investigadores conseguirem encontrar marcadores extracelulares específicos para Breg, isso simplificará o estudo posterior dessas células. Compreender que permite que o BL se torne regulador e que explique a falta de IL-10 pelo BL na AR pode abrir novas perspectivas terapêuticas.