Estudo observacional multicêntrico de pacientes chineses com câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) com mutação genética rara

Critério de inclusão:

1. Feminino ou masculino, 18 anos de idade ou mais;
2. Diagnóstico histologicamente ou citologicamente comprovado de NSCLC;
3. Capaz de obter resultados de teste de gene de tecido tumoral por kit de painel de reação em cadeia da polimerase (PCR) de câncer de pulmão realizado em hospital
4. Consentimento informado assinado e datado.

Critério de exclusão:

1. Combinar com outro tipo de tumor
2. O investigador julga a situação que pode afetar o processo de busca clínica e os resultados.

Inscrições estimadas: 50.000 participantes.

Medidas de resultado:

Medidas de resultados primários:

1. Frequência de mutação do gene condutor raro do NSCLC e características clinicopatológicas em 50.000 pacientes no mundo real;
2. A relação entre subtipos raros de genes condutores e características clinicopatológicas (idade, sexo, histórico de tabagismo, subtipo histológico, estágio clínico, metástase linfonodal, metástase local, metástase à distância, metástase cerebral) em pacientes com NSCLC.

Medidas de resultados secundários:

1. A relação entre os subtipos raros de mutação do gene condutor e a sobrevida ou prognóstico da doença (taxa de resposta objetiva (ORR), sobrevida livre de progressão (PFS) e sobrevida geral (OS)) em pacientes com NSCLC.

Método de Pesquisa:

1. Pré-entrada/período de triagem (V0)

   1. Faça a triagem dos pacientes inscritos de acordo com os critérios de admissão. A detecção de kit de painel de PCR de câncer de pulmão no hospital requer o uso de amostras de tecido (incluindo tecido cirúrgico, tecido de biópsia em condições intervencionistas, tecido de biópsia de linfonodo, tecido de metástases, etc.);
   2. Todas as amostras inscritas devem ser testadas com mutação genética (PCR) do Receptor Neurotrófico-Tropomiosina Quinase (NTRK);
   3. Se os resultados a)+b) mostrarem que foi detectada uma rara mutação do gene driver, os participantes serão envolvidos na próxima etapa; se os resultados do teste a)+b) forem negativos, então 500 casos foram selecionados para detecção de sequenciamento de próxima geração (NGS) nesta população e foram envolvidos na próxima etapa;

2. Período de linha de base (V1)

   a. Faça uma classificação adicional de amostras positivas de mutação genética rara pelo sequenciamento de Sanger e registre os resultados do teste;

3. Período de acompanhamento (V2)

   1. Registrar o regime terapêutico da doença e acompanhar o estado de sobrevida dos pacientes inscritos;
   2. Uma vez a cada 3 meses (ou de acordo com as necessidades clínicas) até 60 meses ou morte;
   3. Coletar informações, incluindo tratamento de acompanhamento, estado da doença e estado de sobrevivência, resultados de exames de imagem, resultados de exames laboratoriais, etc. (consulte o formulário Formulário de Relato de Caso (CRF) para obter detalhes);
   4. Para aqueles que precisam de mais testes moleculares (como resistência primária a medicamentos), análise multigênica usando o método de sequenciamento de próxima geração (NGS);
   5. Perda de acompanhamento: Se o paciente não retornar ao centro para uma consulta de acompanhamento, o centro fará duas tentativas de contato por telefone e manterá os registros de contato. Se o paciente não responder dentro de 1 mês após o segundo contato, considera-se que o paciente perdeu a entrevista.

Materiais e métodos:

Materiais:

O material da amostra deve ser ADN genómico humano e ARN total extraídos de amostras de tecido tumoral. Antes da extração de DNA e RNA, é muito importante certificar-se de que haja pelo menos 20% de células tumorais nas amostras de tecido tumoral.

Métodos:

Inserção do exon do receptor do fator de crescimento epidérmico 20 (exon 20-ins do EGFR)/fusão de quinase semelhante ao receptor de ativina (ALK)/fusão de tirosina quinase (ROS1) do receptor do proto-oncogene ROS/mutação homóloga de oncogene viral do sarcoma do rato Kirsten (KRAS)/ Neuroblastoma RAS mutação homóloga do oncogene viral (NRAS)/B-Raf proto-oncogene, serina/treonina quinase (BRAF) mutação/fosfatidilinositol-4,5-bifosfato 3-quinase subunidade catalítica alfa (PIK3CA) mutação/RET proto-oncogene (RET ) fusão/fator de transição mesenquimal-epitelial (MET) 14 salto de exon/mutação do receptor de tirosina quinase 2 (ERBB2) Erb-b2/mutação de fusão do receptor de neurotrófico-tropomiosina quinase (NTRK) foram detectados por reação em cadeia da polimerase quantitativa fluorogênica em NSCLC chinês.

1. Extração de DNA/RNA:

   A concentração total de RNA para detecção de fusão gênica é de 10~100 ng/µL em tecido fixado em formalina e embebido em parafina (FFPE) ou 2~30 ng/µL em tecido fresco.

   A quantidade de DNA extraído para detecção de mutação genética é de 1,5~3 ng/µl em tecido FFPE ou 0,5~1 ng/µl em tecido fresco.

2. Transcrição reversa do RNA.

3. Detecção das alterações alvo no RNA e no DNA:

   Fusão de genes ALK, ROS1, RET, NTRK e mutação de salto de exon MET 14 foram detectados no RNA.

   Exons-ins EGFR 20, KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA e mutação ERBB2 foram detectados no DNA.

4. Interpretação do resultado