Многоцентровое обсервационное исследование пациентов с китайским немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) с редкой мутацией управляющего гена

Критерии включения:

1. Женщина или мужчина, 18 лет и старше;
2. Гистологически или цитологически подтвержденный диагноз НМРЛ；
3. Возможность получить результаты тестирования гена опухолевой ткани с помощью набора панелей полимеразной цепной реакции (ПЦР) рака легкого, проведенного в больнице.
4. Подписанное и датированное информированное согласие.

Критерий исключения:

1. Сочетание с другим типом опухоли
2. Исследователь оценивает ситуацию, которая может повлиять на процесс и результаты клинического поиска.

Предполагаемое количество участников: 50000 участников.

Критерии оценки:

Первичные показатели результата:

1. Частота мутаций редкого драйверного гена НМРЛ и клинико-патологические особенности у 50 000 пациентов в реальном мире;
2. Взаимосвязь между редкими подтипами драйверного гена и клинико-патологическими особенностями (возраст, пол, курение в анамнезе, гистологический подтип, клиническая стадия, метастазы в лимфатические узлы, местные метастазы, отдаленные метастазы, метастазы в головной мозг) у пациентов с НМРЛ.

Вторичные показатели результатов:

1. Взаимосвязь между редкими подтипами мутаций драйверного гена и выживаемостью или прогнозом заболевания (частота объективного ответа (ЧОО), выживаемость без прогрессирования (ВБП) и общая выживаемость (ОВ)) у пациентов с НМРЛ.

Метод исследования:

1. Предварительный/отборочный период (V0)

   1. Скрининг зарегистрированных пациентов в соответствии с критериями приема. Выявление набора ПЦР-панелей рака легкого в стационаре требует использования образцов тканей (в том числе хирургической ткани, ткани биопсии в интервенционных условиях, ткани биопсии лимфатических узлов, ткани метастазов и т. д.);
   2. Все зарегистрированные образцы должны быть проверены на мутацию гена киназы нейротрофического тропомиозинового рецептора (NTRK) (ПЦР);
   3. Если результаты а)+б) показывают, что была обнаружена редкая мутация гена-драйвера, участники будут вовлечены в следующий этап; если а)+б) результаты теста были отрицательными, то 500 случаев были отобраны для обнаружения секвенирования следующего поколения (NGS) в этой популяции и вовлечены в следующий этап;

2. Базовый период (V1)

   а. Проведите дальнейшую классификацию положительных образцов с редкой мутацией драйверного гена с помощью секвенирования по Сэнгеру и запишите результаты теста;

3. Последующий период (V2)

   1. Запишите схему лечения заболевания и последующее наблюдение за состоянием выживания зарегистрированных пациентов;
   2. 1 раз в 3 мес (или по клиническим показаниям) до 60 мес или смерть;
   3. Собирать информацию, включая последующее лечение, статус заболевания и статус выживания, результаты визуализирующего обследования, результаты лабораторных исследований и т. д. (подробности см. в форме отчета о болезни (CRF));
   4. Для тех, кому необходимо дальнейшее молекулярное тестирование (например, первичная лекарственная устойчивость), мультигенный анализ с использованием метода секвенирования следующего поколения (NGS);
   5. Потеря последующего наблюдения: если пациент не вернется в центр для последующего посещения, центр предпримет две попытки связаться по телефону и сохранит записи контактов. Если пациент не отвечает в течение 1 месяца после второго контакта, считается, что пациент проиграл интервью.

Материалы и методы:

Материалы:

Материал образца должен представлять собой геномную ДНК человека и тотальную РНК, выделенную из образцов опухолевой ткани. Перед выделением ДНК и РНК очень важно убедиться, что в образцах опухолевой ткани присутствует не менее 20% опухолевых клеток.

Методы:

Мутация вставки экзона 20 рецептора эпидермального фактора роста (экзон 20-ins EGFR)/слияние с активин-рецептор-подобной киназой (ALK)/слияние с тирозинкиназой рецептора протоонкогена 1 ROS (ROS1)/мутация вирусного онкогенного гомолога саркомы крыс Кирстен (KRAS)/ Мутация гомолога вирусного онкогена RAS (NRAS) нейробластомы/мутация протоонкогена B-Raf, мутация серин/треонинкиназы (BRAF)/мутация фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат-3-киназы каталитической субъединицы альфа (PIK3CA)/протоонкоген RET (RET ) слияние / фактор мезенхимально-эпителиального перехода (MET) 14, пропуск экзона / мутация тирозинкиназы 2 рецептора Erb-b2 (ERBB2) / мутация слияния киназы рецептора нейротрофического тропомиозина (NTRK) были обнаружены с помощью флуорогенной количественной полимеразной цепной реакции в китайском НМРЛ.

1. Экстракция ДНК/РНК:

   Общая концентрация РНК для обнаружения слияния генов составляет 10–100 нг/мкл в фиксированной формалином ткани, залитой парафином (FFPE), или 2–30 нг/мкл в свежей ткани.

   Количество выделенной ДНК для обнаружения генных мутаций составляет 1,5~3 нг/мкл в ткани FFPE или 0,5~1 нг/мкл в свежей ткани.

2. Обратная транскрипция РНК.

3. Обнаружение целевых изменений в РНК и ДНК:

   В РНК были обнаружены слияние генов ALK, ROS1, RET, NTRK и мутация с пропуском экзона MET 14.

   В ДНК обнаружены экзо-ины EGFR 20, мутации KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA и ERBB2.

4. Интерпретация результатов