Análise de microbiota para prever resultados de pacientes com artrite reumatóide tratados com inibidor de JAK (MARAJA)

A medicina personalizada, na qual cada paciente receberia o tratamento e regime personalizado ideal, é uma grande promessa para melhorar o atendimento ao paciente. No entanto, estudos anteriores falharam em estabelecer preditores validados de resposta a medicamentos antirreumáticos modificadores da doença (DMARDs) em pacientes com artrite reumatoide (AR). Os inibidores de JAK são uma nova classe de DMARDs com grande eficácia, podendo ser até superior aos anti-TNF. Como existem produtos químicos, seu custo de produção é muito mais barato do que as terapias biológicas e provavelmente serão centrais no cuidado dos pacientes nos próximos anos. Atualmente, três estão disponíveis: upadacitinib (UPA), tofacitinib e baricitinib. Nosso estudo terá como foco a UPA. Os resultados clínicos dependem principalmente de i) fatores que influenciam o metabolismo e as concentrações do fármaco e ii) adequação entre o alvo do fármaco e as vias inflamatórias envolvidas na doença do paciente. Os seres humanos carregam em seu intestino trilhões de germes, que agora são conhecidos por serem os principais agentes na saúde e na doença. Esses germes possuem muitas enzimas e modulam fortemente a expressão de enzimas humanas. A microbiota intestinal pode, de fato, metabolizar diretamente drogas orais e controlar a expressão do citocromo P450 3A4 (CYP3A4), a principal enzima que metaboliza o TOFA. Mostramos, em um experimento preliminar com camundongos, que a modificação da composição da microbiota intestinal altera os efeitos do JAKi nas vias de sinalização. Assim, acreditamos que os modelos que incluem a composição da microbiota intestinal, juntamente com marcadores de ativação imune, irão prever os resultados clínicos em pacientes com AR tratados com UPA.

Objetivos principais e secundários: Construir modelos preditivos de desfechos clínicos (eficácia e segurança) de pacientes com AR tratados com UPA com base na análise da microbiota e marcadores de ativação imune.

Metodologia:

Este estudo prospectivo longitudinal multicêntrico incluirá 60 pacientes com AR e resposta inadequada ao metotrexato. Os resultados clínicos estudados serão a não resposta EULAR em 3 meses, conforme definido pela liga europeia contra o reumatismo EULAR (resultado primário), obtenção de baixa atividade da doença em 6 meses ou eventos adversos incidentes (desfechos secundários). A microbiota intestinal será avaliada na linha de base e M3 a partir de amostras fecais descongeladas. O DNA será purificado usando o mini kit de fezes QIAamp DNA (Qiagen) e qualificado usando Qubit e TapeStation 4200 (Agilent). A biblioteca será preparada pela amplificação das regiões V1-V2 e V3-V4 dos genes 16S rRNA bacterianos e será qualificada por q-PCR e os amplicons serão sequenciados por MiSeq (Illumina). Análises bioinformáticas iniciais e taxonomias serão realizadas usando o software QIIME2. A ativação imune será avaliada através da ativação da via JAK-STAT pelo RT² profiler PCR Array da via de sinalização JAK STAT (Qiagen) que perfila a expressão de 84 genes relacionados à sinalização mediada por Jak e Stat. As concentrações de UPA serão avaliadas por cromatografia líquida-espectrometria de massa tandem (LC-MS/MS) na linha de base e 3 meses. Classificadores estatísticos (algoritmo de rede neural, análise discriminante linear e quadrática, máquina de vetores de suporte, florestas aleatórias, métodos de encolhimento ou vizinhos mais próximos) incorporando microbioma, expressão gênica da via de sinalização JAK STAT e dados clínicos serão usados ​​para determinar os perfis associados à clínica da UPA resposta e segurança. Os pacientes que interromperem a UPA prematuramente (antes de 3 meses) por eventos adversos ou perda de seguimento serão considerados não respondedores.