Expressão gênica em úlceras venosas crônicas da perna (GECVELUS)
Th17- Perfil de Expressão Gênica em Pacientes com Insuficiência Venosa Crônica e Úlceras: Resultados Genéticos e Clínicos
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
A Doença Venosa Crônica (DCV) é uma condição clínica amplamente difundida nos países ocidentais, com prevalência variando de 10% em adultos com menos de 30 anos de idade a quase 80% em indivíduos com mais de 70 anos de idade. As manifestações clínicas da DCV variam desde sinais clínicos leves, incluindo varizes, até sinais mais avançados e graves, como úlceras venosas crônicas de perna (CVLUs), que impactam significativamente a qualidade de vida (QV) dos pacientes afetados. Várias alterações genéticas e moleculares foram estudadas até agora para entender o início, a progressão e as complicações da DCV, incluindo os estados de insuficiência venosa crônica (IVC) nos quais CVLUs podem se desenvolver. O aparecimento das CVLUs geralmente é precedido por alterações cutâneas dos membros inferiores como a lipodermatoesclerose, que é uma condição inflamatória crônica decorrente da IVC, caracterizada por uma condição inflamatória da pele. Este evento patológico leva à fibrose subcutânea e endurecimento da pele afetada, resultando em hipóxia tecidual essencial para a ulceração venosa.Estudos de perfil de expressão gênica, presentes na literatura atual, permitem hipotetizar vários mecanismos subjacentes ao desenvolvimento de CVLU, destacando uma ampla variedade de interconexões genético-moleculares. No entanto, nenhum até o momento é capaz de fornecer um modelo genético e celular ligando os eventos patogenéticos que levam ao aparecimento de CVLU ou à progressão dessas lesões. As células T helper 17 (Th-17) são um subtipo de T helper pró-inflamatório (CD4+) definidas pela produção de uma assinatura de citocina da qual IL-17 representa o progenitor. O desenvolvimento, diferenciação e expansão de Th-17 depende de fatores de diferenciação (TGF-β), fatores de crescimento (IL-23/IL23R) e diversos fatores de transcrição (ROR-γt, STAT3).
Curiosamente, o eixo Th-17 tem sido implicado em várias doenças autoimunes, incluindo artrite reumatóide, esclerose múltipla, colite ulcerativa, doença de Crohn, psoríase e encefalite autoimune, entre outras. Além disso, um papel cada vez mais forte do eixo Th-17 na resistência tumoral a medicamentos e na progressão e radicalização da infecção pelo HIV está emergindo recentemente.
Nosso estudo visa avaliar o perfil de expressão do gene Th17 em pacientes com DCV e CVLUs.
Tipo de estudo
Inscrição (Antecipado)
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Raffaele Serra, M.D.,Ph.D.
- Número de telefone: +3909613647380
- E-mail: rserra@unicz.it
Locais de estudo
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Catanzaro, Itália, 880100
- Recrutamento
- University Magna Graecia of Catanzaro
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Contato:
- Raffaele Serra, M.D.
- Número de telefone: +3909613647380
- E-mail: rserra@unicz.it
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Subinvestigador:
- Rosario Amato, M.D., Ph.D.
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- pacientes com doença venosa crônica com CEAP Classes clínicas (C) 2-6: C2: varizes C3: edema C4: alterações cutâneas C5: úlceras venosas cicatrizadas C6: úlceras venosas ativas
Critério de exclusão:
- pacientes com doença arterial periférica
- pacientes com malignidade
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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Grupo 1 - Pacientes com Doença Venosa Crônica (DCV)
Serão recrutados pacientes com DCV em diferentes estágios, de acordo com a Classificação CEAP de Distúrbios Venosos Crônicos.
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As amostras de sangue serão coletadas em tubos vacutainer K3 EDTA de 3 mL.
As células mononucleares do sangue periférico serão isoladas por meio de centrifugação em gradiente de densidade em até 2 horas após a coleta da amostra.
As células T CD4+ primárias serão purificadas dos linfócitos do sangue periférico usando um kit de isolamento de células T CD4+ de triagem magnética, de acordo com as instruções do fabricante.
A extração de RNA será realizada.
O RNA total será quantificado, e a qualidade do RNA será avaliada por eletroforese em gel de formaldeído agarose e pela determinação da razão de absorbância 260/280.
Um micrograma de RNA total de cada amostra será submetido à transcrição reversa.
Um microlitro de cDNA será amplificado via PCR em tempo real e 10 pmol de primers específicos para IL23R, IL17, SGK1, RANBP1, TFGB.
Os ensaios de PCR em tempo real serão realizados em triplicata. A especificidade dos produtos de PCR será determinada por meio da análise da curva de fusão.
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Grupo 2 - Sujeitos Saudáveis sem Doença Venosa Crônica (DCV)
Serão recrutados indivíduos saudáveis voluntários sem Doença Venosa Crônica (DCV).
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As amostras de sangue serão coletadas em tubos vacutainer K3 EDTA de 3 mL.
As células mononucleares do sangue periférico serão isoladas por meio de centrifugação em gradiente de densidade em até 2 horas após a coleta da amostra.
As células T CD4+ primárias serão purificadas dos linfócitos do sangue periférico usando um kit de isolamento de células T CD4+ de triagem magnética, de acordo com as instruções do fabricante.
A extração de RNA será realizada.
O RNA total será quantificado, e a qualidade do RNA será avaliada por eletroforese em gel de formaldeído agarose e pela determinação da razão de absorbância 260/280.
Um micrograma de RNA total de cada amostra será submetido à transcrição reversa.
Um microlitro de cDNA será amplificado via PCR em tempo real e 10 pmol de primers específicos para IL23R, IL17, SGK1, RANBP1, TFGB.
Os ensaios de PCR em tempo real serão realizados em triplicata. A especificidade dos produtos de PCR será determinada por meio da análise da curva de fusão.
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Th17- Perfil de Expressão Gênica
Prazo: 1 ano
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Será avaliado o perfil genético em pacientes com Doença Venosa Crônica e em indivíduos Saudáveis.
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1 ano
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Colaboradores e Investigadores
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Publicações e links úteis
Publicações Gerais
- Serra R, Buffone G, de Franciscis A, Mastrangelo D, Molinari V, Montemurro R, de Franciscis S. A genetic study of chronic venous insufficiency. Ann Vasc Surg. 2012 Jul;26(5):636-42. doi: 10.1016/j.avsg.2011.11.036.
- Serra R, Ssempijja L, Provenzano M, Andreucci M. Genetic biomarkers in chronic venous disease. Biomark Med. 2020 Feb;14(2):75-80. doi: 10.2217/bmm-2019-0408. Epub 2020 Feb 13. No abstract available.
- Metzinger L, de Franciscis S, Serra R. The Management of Cardiovascular Risk through Epigenetic Biomarkers. Biomed Res Int. 2017;2017:9158572. doi: 10.1155/2017/9158572. Epub 2017 Jul 13.
- de Franciscis S, Metzinger L, Serra R. The Discovery of Novel Genomic, Transcriptomic, and Proteomic Biomarkers in Cardiovascular and Peripheral Vascular Disease: The State of the Art. Biomed Res Int. 2016;2016:7829174. doi: 10.1155/2016/7829174. Epub 2016 May 19.
- Kim JS, Jordan MS. Diversity of IL-17-producing T lymphocytes. Cell Mol Life Sci. 2013 Jul;70(13):2271-90. doi: 10.1007/s00018-012-1163-6. Epub 2012 Oct 4.
- Smith PD. Update on chronic-venous-insufficiency-induced inflammatory processes. Angiology. 2001 Aug;52 Suppl 1:S35-42. doi: 10.1177/0003319701052001s05.
- Moseley TA, Haudenschild DR, Rose L, Reddi AH. Interleukin-17 family and IL-17 receptors. Cytokine Growth Factor Rev. 2003 Apr;14(2):155-74. doi: 10.1016/s1359-6101(03)00002-9.
- Amato R, Dattilo V, Brescia C, D'Antona L, Iuliano R, Trapasso F, Perrotti N, Costa D, Ielapi N, Aiello F, Provenzano M, Bracale UM, Andreucci M, Serra R. Th17-Gene Expression Profile in Patients with Chronic Venous Disease and Venous Ulcers: Genetic Modulations and Preliminary Clinical Evidence. Biomolecules. 2022 Jun 28;12(7):902. doi: 10.3390/biom12070902.
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Antecipado)
Conclusão do estudo (Antecipado)
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Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
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- E.R.ALL.2018.42
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