Modelagem do epitélio brônquico na asma grave com células-tronco pluripotentes induzidas por humanos (iPSC) (MOSAIC)
A asma é grave quando não pode ser controlada com terapias inalatórias de dose máxima, enquanto o gerenciamento de comorbidades e outros fatores precipitantes ou agravantes foi otimizado. A aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA) é uma doença broncopulmonar complexa resultante de reações imunológicas contra Aspergillus fumigatus.
O desenvolvimento de um modelo de epitélio brônquico gerado a partir de pacientes com doença pulmonar crônica permitirá a modelagem do tecido brônquico para entender a formação desses tampões de muco. Este estudo tem como objetivo validar este modelo
Os pesquisadores se propõem a verificar a viabilidade de obter e comparar dois epitélios em duas populações com base nos seguintes experimentos:
Diferenciação de um clone de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSC) derivado de amostra de sangue (células mononucleares do sangue periférico) de inflamação tipo 2 (T2), asma grave e aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA) para obtenção de epitélio brônquico diferenciado in vitro.
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
A asma é grave quando não pode ser controlada com terapias inalatórias de dose máxima, enquanto o gerenciamento de comorbidades e outros fatores precipitantes ou agravantes foi otimizado. A aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA) é uma doença broncopulmonar complexa resultante de reações imunológicas contra Aspergillus fumigatus.
A nível celular e molecular, asma grave e ABPA são doenças brônquicas crónicas caracterizadas por inflamação das vias aéreas tipo 2 (T2), hiperplasia do músculo liso brônquico, produção excessiva de muco por metaplasia das células mucosas e remodelação epitelial. A inflamação do tipo 2 na asma é predominante e é caracterizada pelo acúmulo de células imunes, como eosinófilos, mastócitos, células T-helper 2 (Th2), células linfoides inatas tipo 2 (ILC2s) e células dendríticas.
A obstrução persistente das vias aéreas, apesar da terapia máxima, é atualmente considerada a maior necessidade médica não atendida no tratamento da asma. Fahy e colegas publicaram um artigo importante em 2018 que pode explicar a obstrução das vias aéreas. Usando tomografia computadorizada de tórax, eles demonstraram a presença de tampões de muco que obstruem completamente os segmentos das vias aéreas de asmáticos graves. Esses tampões de muco estão associados a um alto número de eosinófilos circulantes no sangue.
Não há modelo em grande escala para modelar asma grave e ABPA. Os investigadores propõem desenvolver um epitélio brônquico com células-tronco pluripotentes (iPSC) na interface ar-líquido, chamado iALI, gerado a partir desses pacientes com o objetivo de modelar asma grave e ABPA e, em particular, o epitélio.
Os objetivos secundários que pretende responder são:
- Comparação do epitélio das vias aéreas derivado de iPSC com células epiteliais nasais isoladas do mesmo paciente (escova nasal).
- Caracterizar o fenótipo do epitélio das vias aéreas derivado de iPSC de pacientes com asma grave ABPA e T2, em comparação com um controle saudável.
- Diferenciação de iPSC em eosinófilos maduros
- Co-cultura do epitélio com eosinófilos derivados de iPSC
- Cultura do epitélio das vias aéreas derivado de iPSC com cristal de Charcot-Leyden
- Demonstrar a viabilidade de obter iPSC a partir de amostragem de sangue periférico.
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Montpellier, França, 34295
- University hospital of Montpellier
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Descrição
Critério de inclusão:
- Tabagismo < 10 BP e desmamado > 1 ano.
Critérios de diagnóstico para grupo de asma grave T2:
- História de asma grave diagnosticada por um médico (de acordo com os critérios da GINA)
- Indivíduo em uso de corticosteróide inalado em alta dose (ICS 1000 µg equivalente a beclometasona) e beta-agonistas por pelo menos 6 meses antes da inclusão
- Eosinofilia sanguínea na história (anos anteriores) > 300/mm3
Critérios diagnósticos para o grupo de aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA)
- Diagnóstico de ABPA definido pelos 3 critérios obrigatórios a seguir:
- Diagnóstico de asma pelo médico há pelo menos 12 meses com base nas recomendações de 2019 do grupo Global Initiative for Asthma (GINA)
- Evidência de hipersensibilidade a Aspergillus fumigatus por teste cutâneo (na triagem ou teste cutâneo positivo documentado anterior nos últimos 12 meses) ou anticorpos séricos específicos de imunoglobulina E (IgE) para A. fumigatus (≥ 0,35 kUnit/l) na triagem.
- IgE sérica total elevada (> 1000 UI/ml). Se os 3 critérios auxiliares para o diagnóstico de ABPA (abaixo) forem atendidos, um nível de IgE ≤ 1.000 UI/ml é aceitável. Se o paciente estiver recebendo corticosteróides orais (COs) na triagem, um nível de IgE documentado anterior >1.000 UI/ml nos últimos 12 meses é aceitável.
E pelo menos 2 dos seguintes critérios auxiliares:
- Contagem de eosinófilos no sangue >500 células/μl na triagem para pacientes que não receberam ACOs na triagem. Para pacientes recebendo COs na triagem, contagem de eosinófilos no sangue > 500 células/μl na triagem ou contagem de eosinófilos anterior documentada > 500 células/μl nos últimos 12 meses.
- Presença de anticorpos precipitantes ou imunoglobulina G (IgG) sérica para A. fumigatus na triagem.
- Anormalidades radiológicas documentadas consistentes com ABPA (como impactação mucóide transitória, muco hiperdenso [alta atenuação de tampões mucosos], opacidades de nódulos centro-lobulares atenuação de tampões mucosos], opacidades de nódulos centro-lobulares, telectasia, bronquiectasias, etc.) por radiografia de tórax ou tomografia computadorizada de alta resolução (HR-CT) nos últimos 18 meses ou na triagem.
Critério de exclusão:
- Outras doenças respiratórias associadas (ex. doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), fibrose cística)
- Paciente em período de exclusão determinado por outro protocolo
- Populações protegidas de acordo com o código de saúde pública francês: parturientes, lactantes ou mulheres grávidas; sujeitos privados de liberdade por decisão judicial ou administrativa; Major protegido por lei (sob qualquer forma de tutela).
- Falta de consentimento informado
- Não beneficiário do sistema nacional de seguro de saúde
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Outro
- Alocação: N / D
- Modelo Intervencional: Atribuição de grupo único
- Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
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Experimental: Pacientes elegíveis
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Uma amostra de sangue e uma escova nasal para cada participante. A escovação nasal permitirá o isolamento de células epiteliais que servirão de comparação para o tecido brônquico produzido a partir do iPS derivado do sangue. Uma amostra de sangue de aproximadamente 14 ml será coletada para isolamento e congelamento das células mononucleares sanguíneas permitindo a geração de iPS.
Outros nomes:
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Obtenção de epitélio brônquico funcional de iPSC: sim/não
Prazo: Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Um epitélio brônquico funcional foi obtido a partir de células-tronco pluripotentes induzidas do sangue do paciente? (sim/não) A obtenção de epitélio brônquico funcional (iALI) de iPSCs de um paciente com asma grave T2 e um paciente ABPA será avaliada pela quantificação de marcadores de diferenciação por imunofluorescência, integridade do epitélio brônquico por medição da resistência transepitelial ( TEER), função secretora por medição das concentrações de mucina (CCSP, MUC5AC e MUC5B) e análise do batimento ciliar
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Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Comparação do perfil transcriptômico entre iALI e células epiteliais das vias aéreas
Prazo: Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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o perfil transcriptômico de iALI de iPSCs de um paciente com asma grave T2 e um paciente com ABPA será comparado com o das células epiteliais das vias aéreas da escovação nasal dos mesmos pacientes
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Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Comparação do perfil transcriptômico entre epitélio brônquico gerado de pacientes com asma grave e de indivíduos saudáveis
Prazo: Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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O perfil transcriptômico de iALI de iPSCs de um paciente com asma grave T2 e um paciente ABPA será comparado aos de indivíduos saudáveis
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Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Diferenciação de iPSC em eosinófilos maduros: sim/não
Prazo: Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Caracterização de eosinófilos obtidos de iPSCs de um paciente com asma grave T2 e um paciente ABPA pela presença de marcadores específicos por citometria de fluxo, imuno-histoquímica e imunofluorescência
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Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Avaliação do diálogo células imunes/epitélio brônquico
Prazo: Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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A cocultura do epitélio com eosinófilos derivados de iPSC e o diálogo célula imune/epitélio brônquico na cocultura de eosinófilos com iALI serão avaliados pela ativação de eosinófilos em contato com o epitélio e pela caracterização e estudo do fenótipo do epitélio exposto
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Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Obtenção de iPSC a partir de amostragem de sangue periférico: sim/não
Prazo: Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Qualificação de linhagens iPSC derivadas de sangue por morfologia, comportamento de cultura, cariótipo e expressão de marcadores específicos
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Dia 0 + cultura (estudo transversal)
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Anne Sophie GAMEZ, MD, University Hospital, Montpellier
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Real)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Estimado)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
- Doenças do sistema imunológico
- Infecções do Trato Respiratório
- Infecções
- Doenças Respiratórias
- Doenças pulmonares
- Doenças brônquicas
- Doenças Pulmonares Obstrutivas
- Hipersensibilidade Respiratória
- Hipersensibilidade, Imediata
- Hipersensibilidade
- Infecções Bacterianas e Micoses
- Doenças Pulmonares, Fúngicas
- Micoses
- Aspergilose Pulmonar
- Aspergilose
- Asma
- Aspergilose Broncopulmonar Alérgica
- Técnicas de investigação
- Manipulação de amostras
- Técnicas de laboratório clínico
- Técnicas e procedimentos de diagnóstico
- Diagnóstico
- Perfurações
- Procedimentos cirúrgicos, operatórios
- Coleção de amostras de sangue
Outros números de identificação do estudo
- RECHMPL22_0384
- 2022-A02059-34 (Identificador de registro: ID-RCB)
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Descrição do plano IPD
O objetivo geral é disponibilizar os dados do estudo aos pesquisadores interessados, bem como fornecer provas de transparência para o estudo. Os dados serão disponibilizados para pessoas que endereçam uma solicitação razoável ao diretor de estudo.
Os dados individuais dos participantes (e um dicionário de dados que os acompanha) serão desidentificados e potencialmente limpos ou agregados conforme os investigadores considerarem necessário para proteger o anonimato dos participantes.
Prazo de Compartilhamento de IPD
Critérios de acesso de compartilhamento IPD
As condições sob as quais os membros do público terão acesso aos conjuntos de dados são:
- Os dados serão usados/examinados sem fins lucrativos;
- Os dados não serão utilizados na tentativa de identificar um participante ou grupo de participantes;
- O usuário não trabalha para uma seguradora privada;
- Os dados não serão utilizados para apoiar qualquer tipo de apólice de seguro privado ou penalidades de saúde;
- Os dados serão usados/examinados para o avanço da ciência/ensino respeitando a privacidade e os direitos do participante/paciente;
- O usuário indicará por que deseja acessar os dados.
Tipo de informação de suporte de compartilhamento de IPD
- PROTOCOLO DE ESTUDO
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
produto fabricado e exportado dos EUA
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