Espectroscopia Raman Comparada à Citometria de Fluxo

A avaliação da doença residual mensurável (DRM) é uma prática frequente no tratamento da leucemia linfoblástica aguda (LLA). A detecção de DRM está associada a um risco aumentado de recidiva e prognóstico adverso em todos os grupos de pacientes com diagnóstico de LLA. Os três métodos aprovados para medição de MRD são citometria de fluxo, reação em cadeia da polimerase (PCR) de mutações específicas e sequenciamento de próxima geração (NGS). Destes, a citometria de fluxo é o método mais utilizado na prática clínica. No entanto, possui um nível de sensibilidade que detecta uma célula leucêmica em 10.000 células normais, além de outras desvantagens, como a necessidade de um painel de anticorpos fluorescentes para detecção de DRM, e sua medição não é padronizada em muitos centros. Novas técnicas de determinação podem ser necessárias para avaliação do MRD. A espectroscopia Raman é proposta como uma técnica potencial para medição de MRD, que se baseia no espalhamento inelástico da luz que ocorre quando ela interage com a matéria, causando espalhamento óptico, onde uma parcela da radiação muda seu comprimento de onda (por efeito Raman). Ao analisar a luz espalhada inelasticamente, podemos obter um espectro Raman formado pela intensidade da luz espalhada em função da sua frequência de vibração, obtendo assim informações sobre a composição bioquímica de uma amostra biológica.

Objetivos.

OBJETIVO PRINCIPAL:

Avaliar a presença de DRM em pacientes com LLA comparando um método de avaliação padrão usando citometria de fluxo com um novo método proposto usando espectroscopia Raman.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

• Avaliar a presença de DRM por citometria de fluxo em pacientes com LLA.
• Avaliar a presença de DRM por espectroscopia Raman em pacientes com LLA.
• Realizar uma comparação entre as técnicas de medição de MRD determinando sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo.
• Estabelecer a validação do uso da espectroscopia Raman como método de avaliação de MRD.

Design de estudo:

Um estudo observacional, transversal, comparativo e de teste diagnóstico será realizado em amostras de aspirado de medula óssea de pacientes adultos e pediátricos com LLA para avaliar a presença de DRM por espectroscopia Raman, comparando os resultados desta técnica com aqueles obtidos por citometria de fluxo. Como um estudo de teste diagnóstico, serão avaliados sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo. O estudo será realizado em pacientes adultos e pediátricos com diagnóstico de leucemia linfoblástica aguda tratados no departamento de hemato-oncologia do UMAE No. 1 Centro Médico Nacional Bajio e do UMAE Hospital Ginecologia-Pediatria No.

Critério de inclusão:

Pacientes com diagnóstico de LLA para os quais a determinação de MRD é clinicamente necessária serão incluídos no estudo. Seus resultados serão avaliados pelo padrão ouro, citometria de fluxo, e comparados com resultados obtidos por espectroscopia Raman.