Uma nova formulação de nanocarreadores carregados de sildenafil para tratamento da alopecia areata

O objetivo do presente trabalho foi otimizar os lipossomas carregados com sildenafil que poderiam aumentar a absorção percutânea e a penetração folicular do sildenafil, alcançando maior eficiência terapêutica com o mínimo de efeitos colaterais desnecessários devido à administração oral.

Além disso, o estudo teve como objetivo avaliar a eficácia da formulação tópica de lipossomas carregados com sildenafil em comparação com a terapia tópica com minoxidil para o tratamento de AA irregular do couro cabeludo através do exame de seus efeitos clínicos juntamente com achados dermatoscópicos.

Materiais O Lipoid S75 (fosfatidilcolina (70%) com fosfolipídios de soja isentos de gordura) foi gentilmente doado pela empresa Lipoid (Alemanha). O citrato de sildenafil foi adquirido da Fagron Iberica SAU. O reagente de HPLC de acetonitrila foi adquirido da Fisher Chemical. Água ultrapura era. O colesterol foi adquirido da Fluka Chemical Co. (Índia). O etanol (absoluto) foi adquirido da El-Nasr Pharmaceuticals, (Egito). Todos os reagentes e produtos químicos foram adquiridos da (Sigma Aldrich).

Metodologia Preparação de SIL-LIP utilizando técnica de pulverização SIL-LIP foram formulados utilizando método de pulverização. Quantidades pré-calculadas de Lipoid s75, colesterol e sildenafil foram dissolvidas em 2 ml de etanol absoluto e a solução preparada foi transferida para um aparelho de pulverização [20]. Em sistema fechado, a solução alcoólica de sildenafil e lipídios foi pulverizada (100 ul foram pulverizados a cada 10 segundos) sobre a superfície de 2 ml de água destilada contendo sacarose (9% p/v) com agitação a 1250 rpm a 25º C. Agitação foi mantida até completa evaporação do etanol. Para garantir o recozimento completo dos lipossomas formados, o SIL-LIP foi mantido a 4°C durante a noite [21]. SIL-LIP foram fotografados usando (JEM-1400,-Jeol,-Tóquio,-Japão) mantido a 80 kV. O SIL-LIP foi deixado por dez minutos a 25°C antes do exame em grade de cobre revestida com carbono.

Medição do tamanho de partícula Para obter mais informações sobre o tamanho e a distribuição de tamanho, foi empregada a difração de luz laser. o SIL-LIP preparado foi diluído com água deionizada e analisado com Mastersizer 3000E Malvern Instruments, Reino Unido a 25°C. O resultado foi a média de três valores repetidos.

Eficiência de aprisionamento (EE) de lipossomas preparados

O EE% foi determinado por centrifugação da suspensão lipossomal a 1.000 rpm por 45 min a 4 °C para isolar o sildenafil não aprisionado no sobrenadante para determinação indireta do EE%. A quantidade de sildenafil no sobrenadante foi determinada por espectrofotômetro UV (Spectronic Genesys®, Winspec Software, Spectronic, EUA) a 228 nm. O EE (%) foi calculado da seguinte forma:

EE (%) = [(Qi -Qs)/Qt] × 100 onde Qi é a quantidade inicial de sildenafil adicionada durante a preparação e Qs é a quantidade de sildenafil determinada no sobrenadante após centrifugação Estudo clínico Um estudo prospectivo randomizado e controlado foi conduzido em o departamento de Dermatologia do Hospital Universitário de Assiut incluindo pacientes com AA irregular no couro cabeludo, com idade entre 10 e 40 anos. Foram excluídos pacientes com alopecia total/universalis ou ofíase, aqueles com doenças sistêmicas e/ou outras doenças dermatológicas e aqueles que receberam tratamento para AA nos últimos 3 meses.

Este estudo foi conduzido em conformidade com as diretrizes da Declaração de Helsinque e o protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Medicina da Universidade de Assiut (IRB no. 17300458). O consentimento informado foi obtido de todos os pacientes antes das inscrições.

Na visita inicial, foi feita anamnese completa e exame clínico completo para todos os pacientes. O diagnóstico foi estabelecido com base no exame clínico e dermatoscópico.

Protocolo de Tratamento

Os pacientes foram randomizados para usar gel tópico de minoxidil a 5% ou lipossomas tópicos carregados de sildenafil a 1% duas vezes ao dia por um período de 8 semanas.

Critérios de avaliação

A avaliação clínica foi realizada pela comparação de fotografias seriadas das lesões com as basais. A pontuação do Severity of Alopecia Tool (SALT) foi calculada, no início do estudo, 4 semanas e 8 semanas e a porcentagem média de novo crescimento do cabelo foi determinada usando o sistema de pontuação SALT para o novo crescimento do cabelo e classificada como A0: nenhuma alteração ou mais cabelo perda, A1: 1-24% de recrescimento do cabelo, A2: 25-49% de recrescimento do cabelo, A3: 50-74% de recrescimento do cabelo, A4: 75-99% de recrescimento do cabelo e A5: 100% de cabelo re-crescimento.

O exame dermatoscópico foi realizado antes do tratamento e às 4 e 8 semanas, utilizando o dermatoscópio portátil (DermLite DL4, 3Gen, Inc., San Juan Capistrano, CA 92675). Fotografias digitais basais e pós-terapia dos campos dermatoscópicos foram tiradas usando uma câmera de smartphone iPhone 6S. As características dermatoscópicas da AA foram avaliadas, incluindo pontos amarelos, pontos pretos, cabelos quebrados, cabelos em ponto de exclamação, cabelos velos curtos e cabelos em crescimento. Foram examinados dois campos dermatoscópicos; um no centro e outro na posição das 3 horas da mancha de alopecia. Parâmetros tricoscópicos em cada campo foram avaliados e quantificados.

A análise dos dados foi feita utilizando o software SPSS versão 24 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). O teste Qui-quadrado e o teste Mann-Whitney foram utilizados para comparação de dados qualitativos e dados quantitativos, respectivamente. P < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.