Nová formulace nanonosičů s obsahem sildenafilu pro léčbu alopecie areata

Cílem této práce bylo optimalizovat sildenafilem naplněné lipozomy, které by mohly zlepšit perkutánní absorpci a folikulární penetraci sildenafilu a dosáhnout tak zlepšené terapeutické účinnosti s minimálními zbytečnými vedlejšími účinky v důsledku perorálního podávání.

Kromě toho se studie zaměřovala na posouzení účinnosti topické formulace liposomů s obsahem sildenafilu ve srovnání s topickou terapií minoxidilem pro léčbu nerovnoměrné AA pokožky hlavy prostřednictvím zkoumání jejích klinických účinků spolu s dermoskopickými nálezy.

Materiál Lipoid S75 (fosfatidylcholin (70 %) s beztukovými sójovými fosfolipidy) byl laskavě darován společností lipoid (Německo). Sildenafil citrát byl zakoupen od Fagron Iberica SAU. Acetonitrilové HPLC činidlo bylo zakoupeno od Fisher Chemical. Ultračistá voda byla. Cholesterol byl zakoupen od společnosti Fluka chemical co. (Indie). Ethanol (absolutní) byl zakoupen od El-Nasr Pharmaceuticals, (Egypt). Všechna činidla a chemikálie byly zakoupeny od (Sigma Aldrich).

Metodika Příprava SIL-LIP technikou stříkání SIL-LIP byly formulovány metodou stříkání. Předem vypočítaná množství Lipoidu s75, cholesterolu a sildenafilu byla rozpuštěna ve 2 ml absolutního ethanolu a připravený roztok byl přenesen do rozprašovacího zařízení [20]. V uzavřeném systému byl alkoholový roztok sildenafilu a lipidů nastříkán (100 ul bylo nastříkáno každých 10 sekund) na povrch 2 ml destilované vody obsahující sacharózu (9 % w/v) za míchání při 1250 otáčkách za minutu při 25 °C. se udržuje až do úplného odpaření ethanolu. Aby bylo zaručeno úplné nasedání vytvořených lipozomů, byly SIL-LIP udržovány při 4 °C přes noc [21]. SIL-LIP byly zobrazeny pomocí (JEM-1400,-Jeol,-Tokio,-Japonsko) udržovaném při 80-kV. SIL-LIP byl ponechán deset minut při 25 °C před vyšetřením na uhlíkem potažené měděné mřížce.

Měření velikosti částic Pro získání lepšího náhledu na velikost a distribuci velikosti byla použita difrakce laserového světla. připravený SIL-LIP byl zředěn deionizovanou vodou a analyzován pomocí Mastersizer 3000E Malvern Instruments, UK při 25 °C. Výsledkem byl průměr tří opakovaných hodnot.

Účinnost zachycení (E.E) připravených lipozomů

EE % bylo stanoveno centrifugací lipozomální suspenze při 1000 rpm po dobu 45 minut při 4 °C, aby se izoloval nezachycený sildenafil v supernatantu pro nepřímé stanovení EE %. Množství sildenafilu v supernatantu bylo stanoveno UV spektrofotometrem (Spectronic Genesys®, Winspec Software, Spectronic, USA) při 228 nm. EE (%) byla vypočtena následovně:

EE (%) = [(Qi -Qs)/Qt] × 100 kde Qi je počáteční množství sildenafilu přidaného během přípravy a Qs je množství sildenafilu stanovené v supernatantu po centrifugaci Klinická studie Prospektivní randomizovaná kontrolovaná studie byla provedena v kožní oddělení Fakultní nemocnice Assiut včetně pacientů s nerovnoměrným AA pokožky hlavy ve věku 10 až 40 let. Pacienti s alopecií totalis/universalis nebo ofiázou, ti se systémovými a/nebo jinými dermatologickými onemocněními a ti, kteří byli léčeni pro AA v předchozích 3 měsících, byli vyloučeni.

Tato studie byla provedena v souladu s pokyny Helsinské deklarace a protokol studie byl schválen Etickým výborem pro výzkum Lékařské fakulty Univerzity Assiut (IRB č. 17300458). Od všech pacientů byl před zařazením získán informovaný souhlas.

Při úvodní návštěvě bylo u všech pacientů provedeno úplné odebrání anamnézy a důkladné klinické vyšetření. Diagnóza byla stanovena na základě klinického i dermoskopického vyšetření.

Protokol léčby

Pacienti byli náhodně přiřazeni k použití buď topického 5% minoxidilového gelu nebo topických 1% sildenafilem naplněných lipozomů dvakrát denně po dobu 8 týdnů.

Kritéria hodnocení

Klinické hodnocení bylo provedeno srovnáním sériových fotografií lézí se základními. Skóre závažnosti alopecie Tool (SALT) bylo vypočteno na začátku, po 4 týdnech a 8 týdnech a průměrné procento opětovného růstu vlasů bylo stanoveno pomocí bodovacího systému SALT pro opětovný růst vlasů a klasifikováno jako A0: žádná změna nebo další vlasy vypadávání, A1: 1-24 % opětovný růst vlasů, A2: 25-49 % opětovný růst vlasů, A3: 50-74 % opětovný růst vlasů, A4: 75-99 % opětovný růst vlasů a A5: 100 % vlasů opětovný růst.

Dermoskopické vyšetření bylo provedeno před léčbou a po 4 a 8 týdnech za použití ručního dermoskopu (DermLite DL4, 3Gen, Inc., San Juan Capistrano, CA 92675). Základní a postterapeutické digitální fotografie dermoskopických polí byly pořízeny fotoaparátem chytrého telefonu iPhone 6S. Byly hodnoceny dermoskopické rysy AA včetně žlutých teček, černých teček, zlomených vlasů, chloupků s vykřičníkem, krátkých vellus chloupků a dorůstajících chloupků. Byla vyšetřena dvě dermoskopická pole; jeden od středu a druhý v poloze 3 hodin náplasti alopecie. Trichoskopické parametry v každém poli byly vyhodnoceny a kvantifikovány.

Analýza dat byla provedena pomocí softwaru SPSS verze 24 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Pro srovnání kvalitativních dat a kvantitativních dat byly použity Chí-kvadrát test a Mann-Whitney test. P < 0,05 bylo považováno za statisticky významné.