Бактериальное расположение на зубах

Кариес зубов и заболевания пародонта тесно связаны с биопленкой полости рта, известной как зубной налет. Многое известно о составе этой биопленки, особенно на ранней стадии ее развития (то есть до 12 часов после чистки зубов). Первичными первичными колонизаторами являются стрептококки и актиномицеты. Эти бактерии часто коагрегируют друг с другом по механизму, который включает связывание белковых адгезинов на поверхности одной клетки с комплементарными полисахаридами рецепторов клеточной поверхности (RPS) на стрептококках.

Профили коагрегации известны для широкого круга оральных актиномицетов и стрептококков. Однако, несмотря на потенциальное значение этих взаимодействий в формировании биопленок, мало что известно об их возникновении в биопленках ротовой полости in situ.

Задача

Целью данного исследования является определение и сравнение влияния коагрегации на пространственную организацию бактерий в наддесневом зубном налете, образующемся в условиях нормального слюноотделения (Рука 1 протокола) или повышенного слюноотделения (Руководство 2 протокола).

Исследуемая популяция

Исследуемая популяция будет состоять из двадцати пяти (25) здоровых взрослых субъектов в возрасте 18 лет и старше. Все субъекты будут участвовать в Arm 1 протокола. Кроме того, по крайней мере три добровольца из группы 1 будут участвовать в группе 2 протокола.

Дизайн исследования

Это будет наблюдательный продольный протокол для определения пространственной организации бактерий, обнаруженных в зубном налете у нормальных здоровых людей. Зарегистрированные субъекты будут проходить стандартное обследование полости рта (включая скрининг рака полости рта), проводимое в клинике NIDCR стоматологами, включенными в протокол. Нижнечелюстной стент будет изготовлен по индивидуальному заказу на основе слепков, полученных во время обследования. Фрагменты эмали, вырезанные из ранее удаленных третьих моляров, будут стерилизованы этиленоксидом, а затем вставлены в стент с каждой стороны над молярной зоной. В настоящее время у нас имеется достаточно удаленных третьих моляров, чтобы разместить зубные чипы для всего протокола, если четыре субъекта завершат исследование, как планировалось. Если потребуются дополнительные чипы, NIDCR в настоящее время занимается подготовкой протокола, который при необходимости предоставит удаленные зубы для этого и других протоколов. В группе 1 исследования индивидуально подобранный стент будет носиться во рту каждого субъекта, а чипы удаляются для анализа через 4 или 8 часов ношения. Бактериальная биопленка на чипах будет окрашена флуоресцентными антителами против специфических микробных адгезинов или рецепторов, после чего пространственная организация меченых клеток в биопленке будет документирована с помощью лазерной конфокальной микроскопии. Чипы могут использоваться для выделения бактерий, и субъектов попросят предоставить образцы слюны и образцы зубного налета для конкретных участков (соскобы кюретки, мазки с десен) для молекулярно-таксономического анализа. Решения о том, у кого будут взяты эти образцы, будут основываться на реактивности имеющихся антител с бактериальными сообществами. Субъекты из группы 1 исследования, выбранные для участия в группе 2, будут жевать основу жевательной резинки в течение 10 минут, чтобы увеличить слюноотделение при ношении стента. Стент у этих людей будет удален через 4 часа дополнительного ношения и проанализирован, как указано выше. Перед участием в Arm 2 протокола субъекты будут проинформированы о том, что эксперименты поддерживаются соглашением CRADA. По этому соглашению будет осуществляться обмен только закодированной исследовательской информацией. Образцы останутся у исследовательской группы NIH. Физические лица могут участвовать только в первой группе или в обеих группах исследования, как указано в их документе о согласии.

Критерии оценки

Мерами результата для этого протокола будет качественное и количественное описание орального бактериального сообщества во время развития начальной бляшки.