Диагностическое значение фрагментации ДНК сперматозоидов и морфологии сперматозоидов для лечения вспомогательной репродукции

Это исследование будет проводиться в частных центрах ЭКО. Целью данного исследования является определение прогностического значения уровней фрагментации ДНК сперматозоидов до и после обработки спермы и морфологии сперматозоидов для прогнозирования результатов вспомогательной репродукции.

60 пар пройдут циклы ИКСИ в частных центрах ЭКО. Все пациенты проходят цикл ИКСИ. Мониторинг: КОГ будет контролироваться с помощью трансвагинальной сонографии, а затем доза гонадотропина будет корректироваться в соответствии с размером и количеством фолликулов.

Запуск овуляции: когда три или более фолликула достигают> 18 мм, тройная линия эндометрия более 8 мм, инъекции гонадотропина и агониста будут прекращены и будет введено 10 000 МЕ ХГЧ.

Сбор яйцеклеток: через 34-36 часов после инъекции ХГЧ, перенос эмбрионов: через 48-72 часа после извлечения ооцитов. Поддержка лютеиновой фазы: 100 мг прогестерона внутримышечно ежедневно до дня проведения теста на беременность.

тест на беременность: через 15 дней после переноса эмбриона. Сбор и подготовка спермы. Образцы спермы будут собираться путем мастурбации в чистых контейнерах, как правило, после 2-3 дней воздержания. Каждому образцу дают разжижаться не менее 20 минут при температуре 37 °C.

Анализ спермы:

Основные параметры сперматозоидов, включая количество сперматозоидов, концентрацию, подвижность и морфологию, будут оцениваться в соответствии с рекомендациями Всемирной организации здравоохранения. После первоначальной оценки эякуляты будут разделены на три аликвоты. Аликвоту каждого образца будут использовать для оценки повреждения ДНК сперматозоидов, вторую аликвоту обработают методом прямого погружения (n = 30) или методом дзета-теста (n = 30), за этим последует повторная оценка повреждения ДНК в каждом образец для измерения разницы в повреждении ДНК после обработки в каждом методе, затем сперматозоиды из третьей аликвоты будут морфологически проанализированы вручную с использованием окраски спермы и светового микроскопа и будут оценены в соответствии с ВОЗ.

Анализ фрагментации ДНК:

Оценка повреждения ДНК будет измеряться до и после обработки каждого образца с использованием улучшенной версии теста на дисперсию хроматина сперматозоидов. Образцы будут подготовлены для анализа. Этап окрашивания потребуется для оценки подготовленных слайдов. Образцы окрашивают раствором Diff-Quik, погружая каждое предметное стекло в раствор Diff-Quik I (эозинофильный) и раствор Diff-Quik II (базофильный) на 6 минут каждый, дают высохнуть при комнатной температуре. Затем предметное стекло исследуют. под светлопольным микроскопом.