Valor diagnóstico de la fragmentación del ADN espermático y la morfología espermática para el tratamiento de reproducción asistida

Este estudio se realizará en centros privados de FIV. El objetivo de este estudio es determinar el valor pronóstico de los niveles de fragmentación del ADN espermático antes y después del procesamiento del semen y la morfología espermática para predecir el resultado de la reproducción asistida.

60 parejas se someterán a ciclos de ICSI en centros privados para FIV. Todos los pacientes pasarán por un ciclo de ICSI. Monitoreo: la COH se monitoreará mediante una ecografía transvaginal y luego se ajustará la dosis de gonadotropina de acuerdo con el tamaño y la cantidad de folículos.

Activación de la ovulación: cuando tres o más folículos alcanzan >18 mm, la línea triple del endometrio supera los 8 mm, se detendrán las inyecciones de gonadotropina y agonista y se administrarán 10.000 UI de hCG.

Recolección de óvulos: 34-36 horas después de la inyección de hCG, transferencia de embriones: 48-72 horas después de la recuperación de ovocitos. Soporte de la fase lútea: con inyección de progesterona de 100 mg por vía intramuscular diaria hasta el día de la prueba de embarazo.

Test de embarazo: 15 días después de la transferencia embrionaria. Recolección y preparación de semen. Las muestras de semen se recolectarán por masturbación en recipientes limpios, generalmente después de 2-3 días de abstinencia. Cada muestra se dejará licuar durante al menos 20 min a 37 °C.

Análisis de semen:

Los parámetros básicos de los espermatozoides, incluidos el recuento, la concentración, la motilidad y la morfología de los espermatozoides, se evaluarán de acuerdo con las pautas de la Organización Mundial de la Salud. Después de la evaluación inicial, los eyaculados se dividirán en tres alícuotas. Se usará una alícuota de cada muestra para evaluar el daño del ADN espermático, la segunda alícuota se procesará mediante la técnica de natación directa (n 30) o la técnica de prueba zeta (n 30), seguida de la evaluación del daño del ADN nuevamente en cada muestra. muestra para medir la diferencia en el daño del ADN después del procesamiento en cada técnica, luego los espermatozoides de la tercera alícuota se analizarán morfológicamente manualmente usando tinción espermática y un microscopio óptico y se calificarán de acuerdo con la OMS.

Ensayo de fragmentación de ADN:

La evaluación del daño en el ADN se medirá antes y después del procesamiento de cada muestra utilizando una versión mejorada de la prueba de dispersión de cromatina espermática. Se prepararán muestras para su análisis. Se requerirá un paso de tinción para evaluar los portaobjetos preparados. Las muestras se tiñerán con solución Diff-Quik, sumergiendo cada portaobjetos en solución Diff-Quik I (eosinofílica) y solución Diff-Quik II (basófila) durante 6 min cada uno, se deja secar a temperatura ambiente. Luego se examinará el portaobjetos. bajo microscopio de campo claro.